黄连、吴茱萸药对的配伍研究.doc

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1、辽宁中医药大学 硕士学位论文黄连、吴茱萸药对的配伍研究 姓名：张朔 申请学位级别：硕士 专业：生药学 指导教师：张振秋 20090301 辽宁中医药大学届硕士学位论文 摘 要 目 的：本文以中医基础理论为指导，结合先进的现代科学技术对黄连、吴茱萸 药对的配伍进行全面规范化的研究。 材料与方法：以化学成分和药效作用多方面考察的方法，确定黄连、吴茱萸药 对的最佳制备方法和配伍比例：采用正交设计与均匀设计相结合的方法，筛选出 黄连、吴茱萸药对的最佳提取工艺；利用高效液相色谱法，对黄连、吴茱萸药对 提取物进行定性、定量以及药代动力学方面的研究。 结 果： 根据实验比较，确定黄连、吴茱萸药对的最佳制备方

2、法为醇提合煎法，最佳配伍 比例为：。 采用正交设计与均匀设计法，确定黄连、吴茱萸药对的最佳提取工艺为：黄连（粗 粉）与吴茱萸一起，以倍量乙醇提取次，每次小时。 采用高效液相色谱法，制定了不同配伍比例的黄连、吴茱萸药对的指纹图谱，并 以盐酸小檗碱和吴茱萸碱的峰高比作为指标，以求能够对各不同配伍比例进行区分。采用法对黄连、吴茱萸药对中的盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、盐酸药根碱、吴茱萸碱以及吴茱萸次碱进行鉴别，斑点清晰，分离度、值、方法的重复性与专属性均良好。采用高效液相色谱法对黄连、吴茱萸药对中指标性成分行进测定，其线性关系良好、精密度、稳定性、重复性及加样回收率均符合标准。采用内标法对黄连、吴茱萸药对

3、及黄连药材提取物中盐酸小檗碱进行药代动力学研究，黄连、吴茱萸药对提取物的主要药动参数为：（）士，积 （。）士，。）士：黄连提取物的主要药动参数为：（），舣（）士，。）。 黄连、吴茱萸药对的配伍研究结 论：通过对黄连、吴茱萸药对全面规范化的研究，确定了该药对的最佳制备方法、配伍比例和提取工艺，建立了此药对的指纹图谱和质量标准体系，进一步完善了黄连、吴茱萸药对的药代动力学研究，从中得出的黄连、吴茱萸药对的最佳配伍比例，与传统古方左金丸（黄连、吴茱萸：）的比例完全一致，证明了古方配伍的合理性，为中药药对的配伍进一步研究和开发提供参考依据。关键词：黄连；吴茱萸；配伍；指标性成分；药代动力学； 辽宁中医

4、药大学届硕士学位论文 ： ， ， （） ： ， （）； ； ， ， ： ， ， ： ： （） （） ， ， ， ， ， ， ， ， ， ， 黄连、吴茱萸药对的配伍研究 ， ， （） ， （） ：（）士 ，（）士，（。） 士 ； ：（） 士，而双（。）士，（四士。 ： ， （） ” 妫酰欤? ， ， （， ：）， ： ； （）； ； 辽宁中医药大学学位论文独创性与真实性声明 本人郑重声明：在我呈交的学位论文中，本人经研究所得的数据、原理、结论等一切内容均真实，且经本人认真核对无误：我呈交的与学位论文相关的资料（原始记录、照片、录像片、检查化验报告单等）确为完整的学位论文研究中的原始资料，救嗣蛔魅

5、魏涡薷模晃页式坏难宦畚氖俏冶救嗽谥傅冀淌闹傅枷陆械难芯抗骷叭玫难芯砍晒闹刑乇鸺右员曜椭滦坏牡胤酵猓畚闹忻挥衅渌艘丫砘蜃垂难芯砍晒渌硕晕彝瓿纱寺畚牡陌镏约岸员狙芯克龅娜魏喂毕拙言诼畚闹凶髁嗣魅匪得鞑硎拘灰狻?我呈交的学位论文及与该论文相关的资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。 学位论文作者签名主蝴 吼川年月夕日 关于学位论文使用授权的声明 本人完全了解辽宁中医药大学有关保留使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门机构送交论文的印刷版和电子版，允许被查阅和借阅。本人授权辽宁中医药大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位

6、论文。 （保密论文在解密后应遵守此规定） 学位论文作者签名汹 学位论文导师签名 日期：砷年月弓日 日期： 年 月 日 辽宁中医药大学届硕士学位论文 厶一 刖 青 黄连、吴茱萸药对始出于丹溪心法中的左金丸，由黄连、吴茱萸（：）组成。方中黄连为毛莨科植物黄连 、三角叶黄连 或云连 的干燥根茎，具有清热燥湿、泻火解毒之效【。吴茱萸为芸香科植物吴茱萸 （）、石虎 （）（）或疏毛吴茱萸 （ （）的干燥将近成熟的果实，具有散寒止痛、降逆止呕、助阳止泻的功效【。方中重用黄连（倍于吴茱萸）为君，清肝泻火，佐以辛热之吴茱萸条达肝气，开散郁结，且能抑制黄连之苦寒，使泻火而无凉遏之弊。两药相伍一温一寒，辛开苦降，共

7、奏清肝泻火，降逆止呕之良效。现代药理研究表明左金丸具有抑制胃酸分泌、抗胃溃疡、抑菌、抗炎、镇痛等功效，临床应用广泛。 目前对于黄连、吴茱萸药对的研究，主要集中在质量控制方面，并且仅有对盐酸小檗碱和吴茱萸次碱含量的相关报道，而对于该药对的提取、药效以及药代动力学方面的研究尚属空白，本文对黄连、吴茱萸药对做了较为系统全面的研究，使其规范化，并为此药对进一步的研究开发提供参考资料。 黄连、吴茱萸药对的配伍研究 左金丸的现代研究进展摘要：左金丸为黄连和吴茱萸以：的比例配伍而成，有清泻肝火，降逆止呕之功，治疗肝火犯胃之胁肋疼痛，嘈杂吞酸，呕吐口苦，由于其新疗效的不断发现，引起人们广泛的关注，本文主要对左

8、金丸的化学成分、药理作用以及临床应用进行了一简单的综述。关键词：左金丸；药理作用；化学成分；临床应用：研究进展 左金丸为朱丹溪名方，以黄连和吴茱萸以：的比例配伍而成，能清泻肝火，降逆止呕，用于肝火犯胃之胁肋疼痛，嘈杂吞酸，呕吐口苦，舌红苔黄，脉弦数之证。方中重用黄连（倍于吴茱萸）为君，清肝泻火，佐以辛热之吴茱萸条达肝气，开散郁结，且能抑制黄连之苦寒，使泻火而无凉遏之弊。两药相伍一温一寒，辛开苦降，共奏清肝泻火，降逆止呕之良效。左金丸用药虽简单，但配方精妙，古人多用于“泻肝火”。经现代研究与实践，证明左金丸应用广泛，现综述如下。药理作用抑制胃酸分泌 加味左金丸（黄连、吴茱萸，木香）水提液明显抑制

9、幽门结扎大鼠的胃液分泌，与生理盐水组比较，有显著性差异（）；在胃窦移檀术致大鼠慢性高胃酸分泌模型上左金丸水提液能减少胃液分泌，左金丸组胃液量为（），空白对照组胃液量为（）。以上两个模型均未见左金丸对胃液中酸浓度有影响，由于减少了胃液分泌，所以降低了总酸流量。在大鼠活体胃灌流模型上加味左金丸（同上）水提液十二指肠给药 后明显抑制大鼠基础泌酸，使胃液中酸浓度明显下降（），加味左金丸组泌酸反应时效曲线明显低于生理盐水组，抑酸效价与剂量有关， 剂量作用最明显，抑制率达，优于空白对照组和阳性药雷尼替丁组。抗溃疡 加味左金丸（同上）水提液 。体重的剂量能促使实验性大鼠胃小弯溃疡的愈合，治疗 后愈合率达，明

10、显高于生理盐水对照组（）。加味左 辽宁中医药大学届硕士学位论文 金丸（同上）水提液（ 以）明显对抗盐酸乙醇氢氧化钠，阿斯匹林所致急性胃粘膜 损伤，与空白组比较，均为。 抑菌 采用平皿打孔法，加入左金丸溶液，培养 ，左金丸对金黄色葡萄球菌、霍 乱弧菌、乙型链球菌的抑菌较强，对大肠杆菌、伤寒杆菌的抑制作用稍次，能杀 灭，其原理主要是黄连能影响细菌的代谢，抑制丙酮酸的氧化过程。此外还能 增强人体白细胞及肝脏网状内皮系统的吞噬能力。吴茱萸除具有抗菌作用外，且 在解除胃肠道胀气的同时，又抑制了在致病过程中释放强力的炎性介质，并使 失去粘附于胃粘膜上皮的能力引。 对胃肠运动的影响 左金丸 蝇。剂量能明显抑

11、制小鼠排空（均），加木香后则无 此作用。左金丸 、 一、 。明显抑制小鼠小肠推进运动（）， 加木香可减轻此作用。这与合用疏肝理气药能使胃排空加速的报道】是一致的。 镇痛抗炎 用热板法，以左金丸 （）以给小鼠灌胃，连续 ，可提高镇痛阈值，与 生理盐水组比较有显著差异；用扭体法，以左金丸 （）以给小鼠灌胃，连续 ，对醋酸引起的扭体反应有显著抑制作用，与生理盐水组比较有显著差异。还 能抗炎，以左金丸 （）给大鼠灌胃，连续 ，可抑制棉球肉芽组织增生，与生理盐水组比较有显著差异。化学成分 左金丸以黄连和吴茱萸以：的比例配伍而成，黄连为毛茛科植物黄连（ ）、三角叶黄连（ ）或云南黄连（ ）的干燥根茎。具有

12、清热燥湿、泄火解毒功效，为名贵的常用中药，我国入药已有两千多年的历史， 神农本草经列为上品。小檗碱是黄连的主要化学成分，含量为，其他化学成分还有黄连碱（）、甲基黄连碱（、掌叶防己碱又名巴马亭（）、棕榈碱、药根碱（）、非洲防己碱、表小檗碱（）、小檗红碱（）、木 黄连，吴茱萸药对的配伍研究 兰花碱（）矛阿魏酸（ ）。但不同品种、不同产地、不同采收时间、不同分析方法条件下，各种生物碱的分析结果均有差异。中药吴茱萸 （）为芸香科植物吴茱萸干燥的近成熟果实始载于神农本 草经，列为中品。具有温中散寒疏肝止痛之功效。常用于厥阴头痛、寒疝腹痛、 寒湿脚气、经行腹痛、腕腹涨痛、呕吐吞酸、五更泄泻等症的治疗。生物

13、碱是吴 菜萸的主要活性成分，是成分研究的主流。其所含生物碱可分为吲哚喹唑啉类、 喹诺酮类及其它类。吲哚喹唑啉类主要有吴茱萸碱、吴茱萸次碱、吴茱萸因碱、 羟基茱萸碱、二氢吴茱萸碱、甲酰二氢吴茱萸次碱、吴茱萸酰胺，其中后二者 新近才分离得到【。喹诺酮类有吴茱萸卡品碱、二氢吴茱萸卡品碱等。此外还含有 柠檬苦素类和挥发油类的成分。黄连与吴茱萸两药以：的比例合用后，生物碱类 成分是其主要的活性成分。 质量研究 黄连的质量研究 近年来，对黄连的质量研究较为广泛，目前文献报道的有高效液相色谱法、 紫外分光光度法、薄层扫描法，其中高效液相法报道较多。其中孙光文，胡华明， 杨先哲等【，采用乙腈一 一磷酸二氢钾一

14、二甲胺（：）为流动相， 测定了黄连膏中小檗碱的含量。向莉，李盾，在以 一磷酸氢二钠溶液（磷 酸调至）： 一十二烷基磺酸钠溶液：乙腈（：）为流动相， 检测波长的条件下，同时测定了黄连中五种生物碱（小檗碱、黄连碱、巴马 亭、药根碱、表小檗碱）的含量。 吴茱萸的质量研究 关于吴茱萸的质量研究也主要集中在高效液相法。洪玉梅，蔡嵩，王维皓等【】， 应用钡，定了吴茱萸及其炮制品中吴茱萸内酯的含量。甄攀，王治宝，白雪梅 等舛，应用法测定了吴茱萸中吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含量。 左金丸的质量研究 张捷，张锋，姜莉等 ，在乙腈一水（：），检测波长为 的条件下，应用法测定了左金丸中吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含量。李宇，

15、韩风梅，柳伟 辽宁中医药大学届硕士学位论文 等【，采用甲醇一乙腈一 一 水溶液（：，）为流动 相，应用反相高效液相色谱法同时测定了加昧左金丸中盐酸小檗碱和吴茱萸次碱 的含量。 临床应用 消化性溃疡 潘氏【用左金丸合四逆散加味治疗消化性溃疡例， 为个疗程，结果显 效例，有效例，无效例，总有效率为。傅氏【等用左金丸、黄芪建中 汤、失笑散组成愈溃三合汤治疗十二指肠球部溃疡例，结果治愈例，显效 例，有效例，无效例，总有效率 慢性胃炎 王氏【】等用左金丸和香苏饮加味治疗慢性萎缩性胃炎例，临床治愈例，显 效例，有效例，无效例，总有效率。胃镜复查明显好转例，显效例， 有效例，无效例，总有效率。程氏【用加味左

16、金丸治疗本病例，结果 临床显效例。有效例，无效例，总有效率。王氏【等用左金丸合化肝煎治疗糜烂性胃炎例，临床治愈 例，有效例，无效例，总有效率。程氏【】用左金丸加味治疗糜烂性胃炎例，临床治愈例，有效例，无效例，总有效率。程氏】以左金丸为主辨治慢性胃炎例，治愈例，好转例。朱氏【】用枳芍左金加味汤治疗慢性浅表性胃炎例，显效例，好转例，无效例，总有效率。胆汁反流性胃炎 曹氏【】等剧芹金丸加味汤治疗胆汁反流性胃炎例，近期治愈例，显效例，无效例，总有效率。柯氏【】以自拟挽留汤（左金丸为主）治疗碱性反流性胃炎例，显效例，好转例，无效例，总有效率。幽门螺杆菌感染 陆氏【】用左金丸治疗幽门螺杆菌感染例，痊愈例，

17、无效例，疗效明显优于吠喃唑酮（）。幽门梗阻 黄连、吴茱萸药对的配伍研究 张氏【用左金承气汤（左会丸加味）治疗幽门不全梗阻例，总有效率。 于氏【】用左金丸合胃苓汤治疗幽门梗阻例，临床治愈例，好转例，无效例， 总有效率。 功能性消化不良 汪氏【等用左金丸为主的连苏畅中饮治疗功能性消化不良，痊愈例，显 效 例，有效 例，无效 例，总有效率。 反流性食管炎 严氏】中西医结合治疗反流性食管炎例，其中肝胃羧刃陀米蠼鹜韬匣?煎加减，配合西药对症治疗，总有效率，与单纯西药组对比有显著性差异， 。章氏等用加味左金丸联合铝碳酸镁治疗反流性食管炎例。症状改善 疗效等同于奥米拉唑；其中例胃镜治疗前后对照，镜下治愈例，

18、好转例，无 效例，总有效率为。 此外，左金丸还用于巅顶痛、眩晕、梅核气、牙痛、重症不寐、食道擦伤、胸痛、胁痛、乳痈、乳房肿痛、睾丸肿痛、便秘、妊娠恶阻等。从此可知，左金丸除用于脾胃功能失调外，还广泛应用于消化系统以外的疾病。因此，古方左金丸在现代仍有广泛的应用前景，值得总结和推广。参考文献：】陈蔚文，李茹柳，蓝绍清等左金丸抗溃疡及抑制胃液分泌的实验研究】广州中医学院学报， ，（）：”【】陈尉文，李茹柳，徐颂芬等加味左金丸胶囊剂的药效学及含量测定研究【】广州中医学院学报，（）：”陆永才左金丸治疗幽门螺杆菌感染例临床观察浙江中医杂志，（ ）：】施顺清疏肝理气药与胃排空速度】中成药研究，（）：江苏新

19、医学院中药大辞典（上册）【】上海：上海人民出版杜， 】孙光文，胡华明，杨先哲等钡，定黄连膏中小檗碱的含量】中成药， 辽宁中医药大学届硕士学位论文 （）： 】向莉，李盾法研究黄连中硇藜畹任逯稚锛畹暮俊玻省浚啥贾幸揭?大学学报，（）：， 洪玉梅，蔡嵩，王维皓等钡定吴茱萸及其炮制品中吴茱萸内酯的含量 中国中药杂志，（ ）： 甄攀，王治宝，白雪梅等吴茱萸中吴茱萸碱和吴茱萸次碱的分析中 成药，（）：” 张捷，张锋，姜莉等钡定左金丸中吴茱萸碱和吴茱萸次碱含量【】中 国中药杂志，（）： 【】李宇，韩风梅，柳伟等反相高效液相色谱法测定加昧左金丸中盐酸小檗碱和 吴茱萸次碱的含量【】中国药学杂志，（）： 】潘益鑫

20、四逆散合左金丸治疗消化性溃疡例】浙江中医杂志， （）： 】傅振伟，刘连河愈溃三合汤治疗十二指肠溃疡例】吉林中医药， （）：】王少旭，郭为民香苏散和左金丸加味治疗慢性萎缩性胃炎例【】陕西中医，（）：】胡运莲，周新蓉，夏瑾喻程丽芳教授用加味左金丸治疗慢性萎缩性胃炎经验】中国中西医结合消化杂志，（）：】王贤斌，傅赛萍左金丸合化肝煎治疗糜烂性胃炎例观察】实用中医药 杂志，（）：】程霞，汲清左金丸加味治疗治疗糜烂性胃炎例观察】长春中医学院学报，（）：】程玉树以左金丸为主辨证论治慢性胃炎例分析河北中西医结合杂志，（）：】朱怀远枳芍左金加味汤治疗慢性浅表性胃炎】湖北中医杂志， 塾墅型巡塑 （）： 曹会波，韩

21、立翠，王和良左金丸加味方治疗胆汁返流性胃炎例】山西中 医，（）： 】柯联才自拟挽留汤治疗碱性返流性胃炎福建中医药，（）： 】陆永才左金丸治疗幽门螺杆菌感染例临床观察】浙江中医杂志， （： 张斌左金承气汤治疗幽 不全梗阻例陕西中医，（）： 于春光，刘姝胃苓汤合左金丸治疗幽门梗阻例】中医药学报， （）： 】汪艳娟，王行宽连苏畅中饮治疗功能性消化不良的临床观察【湖南中医学 院学报，（）：】严晖中西医结合治病反流性食管炎例疗效观察】实用中西医结合临床， ，（）：】章一凡，朱雄雄力口昧左金丸联合铝碳酸镁治病反流性食管炎临床观察中成药，（：” 辽宁中医药大学届硕士学位论文 黄连、吴茱萸药对的配伍研究 第一

22、章黄连、吴茱萸药对最佳制备方法的确定 在版中国药典一部中收载的左金丸处方就是由黄连、吴茱萸药对组 成。由于其制法为两味药材细粉直接以水泛丸，有效成分含量低，致使药物的服 用量大，服用时间长等弊端，因此，本章对黄连、吴茱萸药对进行了制备方法的 研究，以提高药物的有效成分的含量，从而减少其服用量及服用时间，以总碱含 量、黄连中盐酸小檗碱和盐酸巴马汀含量、吴茱萸中吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含 量及药效为指标，根据文献【】分别选择了水和乙醇对黄连与吴茱萸药材进行提取，所以实验考察了水提合煎、水提分煎合并、醇提合煎、醇提分煎合并不同煎煮方法，最终确定醇提合煎法为黄连、吴茱萸药对的最佳制备方法。一、仪器与试药仪器 高效液相色谱仪；一可见紫外检测器；超声提取器；型电子分析天平； 十万分之一电子天平（瑞士）；型三用紫外分析仪。日立紫外可见双光束扫描分光光度计；试药 黄连、吴茱萸药材购自河北安国，经辽宁中医药大学李峰教授鉴定为黄连 （ ）、吴茱萸（ （）。盐酸药根碱对照品，批号： ；盐酸巴马汀对照品，批号： ；盐酸小檗碱对照品，批号： ；吴茱萸碱对照品，批号： ；吴茱萸次碱对照品，批号： ，均由中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用；薄层层析硅胶（青岛海.