诱骗受体3对大鼠移植肝脏的保护作用.doc
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1、诱骗受体3对大鼠移植肝脏的保护作用文章来源 毕业论文网 毕业论文 作者:王槐志 黎万玲 张玉君 陈志宇 朱瑾 郑平 熊燕 董家鸿【摘要】 目的 将重组诱骗受体3(decoy receptor 3,DcR3)腺相关病毒(adenoassociated virus,AAV)感染移植肝,探讨DcR3对移植肝的保护作用。方法 实验动物分为同基因肝移植组(G1)、同种异体肝移植组(G2)、AAV空病毒感染的同种异体肝移植组(G3)、重组DcR3/A
2、AV感染的同种异体肝移植组(G4)。常规建立同种异体大鼠肝移植模型;术中取预先制备的浓缩1109 IU病毒颗粒感染移植肝;术后观察大鼠的存活时间、肝功能,荧光显微镜及光镜下观察DcR3在肝脏中的表达及肝脏病理改变。结果 G4组的平均生存时间比G2、G3组显著延长,G2、G3组的平均生存时间差异无统计学意义。G4组大鼠术后15、20 d的肝功能、肝脏病理改变分别与G2、G3组大鼠术后7、10 d相似。结论 DcR3对大鼠移植肝有显著的保护作用。 【关键词】 诱骗受体3; 肝移植; 保护作用; 大鼠Protective effects of decoy receptor 3 on ra
3、t liver allograft 【Abstract】 Objective To investigate the protective effect of decoy receptor 3 (DcR3) on rat liver allograft by infecting liver allograft with recombinant human DcR3/adenoassociated virus (AAV). Methods All rats were divided into isogenic li
4、ver transplantation group (G1), allogenic liver transplantation group (G2), allogenic liver transplantation group infected by AAV virus (G3) and allogenic liver transplantation group infected by recombinant DcR3/AAV (G4). Rat liver allotransplantation model was established by regular methods. Liver
5、allografts were infected by condensed viral particles (1109 IU) perioperatively. Survival time of rates and liver function were investigated, and the expression of DcR3 in liver allograft and pathological changes of liver were observed under fluorescent microscope and light microscope. Results
6、 The mean survival time of rats in G4 was significantly longer than that in G2 and G3, with no statistical difference between G2 and G3. The pathological changes of liver and liver function at postoperative days 15 and 20 of G4 were similar to those at postoperative days 7 and 10 of G2 and G3. Concl
7、usions DcR3 has protective effect on rat liver allograft after liver transplantation. 【Key words】 Decoy receptor 3; Liver transplantation; Protective effect; Rats 诱骗受体3(decoy receptor 3,DcR3)有保护移植物免受排斥反应损伤的治疗潜能1-2。腺相关病毒(adenoass
8、ociated virus,AAV)可作为诱导肝移植耐受时免疫调节或移植物保护分子转染和表达的理想载体3-4。因此本研究将AAV作为其载体转染肝脏,期望实现DcR3蛋白在移植肝中的长期表达,为移植肝提供保护作用, 同时避免其全身性的副作用。1 材料与方法1.1 重组DcR3/AAV及AAV空病毒颗粒 取预先制备的浓缩重组DcR3/AAV及AAV空病毒颗粒1109 IU,用乳酸林格氏液稀释至5 ml备用5。AAV病毒中自带的绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)可作为DcR3表达的标志。1.2&nbs
9、p; 实验动物 近交系DA大鼠,质量180200 g,由哈尔滨医科大学实验动物中心提供;近交系Lewis大鼠,质量200250 g,由北京维通利华实验动物有限公司提供。所有大鼠均在标准条件下饲养,给予啮齿类动物饲料及饮水,遵守实验动物使用和管理准则。1.3 动物分组 同基因肝移植组(G1,n=8):Lewis大鼠为供、受体。同种异体肝移植组(G2,n=10):DA大鼠为供体,Lewis大鼠为受体,术后不予任何处理。AAV空病毒感染的同种异体肝移植组(G3,n=10):DA大鼠为供体,Lewis大鼠为受体。切取供
10、肝之后,将AAV空病毒颗粒用乳酸林格氏液稀释至5 ml后经门静脉注入肝脏,同时夹闭下腔静脉两端及门静脉保存30 min,至供肝植入时放开。重组DcR3/AAV感染的同种异体肝移植组(G4,n=10):所用病毒颗粒为重组DcR3/AAV病毒颗粒,余同G3组。1.4 动物模型的建立 采用经典的2袖套法建立大鼠原位肝移植模型。1.5 标本采集 于肝移植术后1、3、5、7、10、15、20 d从大鼠尾静脉取2 ml抗凝血。于肝移植术后7、10、15、20 d麻醉状态下开腹取小块肝脏标本,然后关腹让动物继续生
11、存。1.6 观测指标 观察大鼠术后1般情况、存活时间至术后25 d。术后存活时间超过24 h视为手术成功。采用Beckman全自动生化分析仪检测肝功能。取不同时相点的肝组织行冰冻切片及常规石蜡切片,同时常规进行苏木精伊红染色,在荧光显微镜及光镜下观察DcR3的表达及肝脏病理改变。1.7 统计学分析 结果以s表示,各组间均数比较采用方差分析。生存时间采用SPSS 11.5软件绘制成KaplanMeier曲线,比较采用对数秩检验(Logrank)。P<0.05为差异有统计学意义。2 结
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