【word】 苯酚硫酸显色法测定蒙药沙蓬中的多糖含量.doc

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1、苯酚-硫酸显色法测定蒙药沙蓬中的多糖含量2010年11月第l1期中国民族医药杂志593样品含量测定取本品按2.2项下的方法处理并测定,对照品溶液的制备同上,两批样品及模拟样测定结果见表5.表5样品中栀子苷含量测定结果专属性,稳定性,线性关系,重复性,回收实验等多方面考察后,数据合理,精确,说明该方法可以被用作破血石(其其Et甘一24)中栀子苷含量的测定方法.4.2参照中国药典)2005年版一部”三子散”项下的含量测定方法,以乙腈一水(15:85)为流动相进行测定理论板数较高,但峰形不好且有拖尾,分离度过小,效果不理想.经过摸索采用乙腈一水一甲醇(12:88:1)为流动相,各项指标都比较理想.参

2、考文献1国家药典委员会.中国药典s.2005年版一部.化学工业出版社.23内蒙古卫生厅.内蒙古蒙药材标准(M.内蒙古科学技术出版社,l986.(3西藏,青海,四川,甘肃,云南,新疆卫生局.藏药标准Is.第一版.83.43国家中医药管理局.中华本草【M.上海科学技术出版社.4小结2o1O年6月lO日收稿4.1实验结果表明:破血石(其其日甘一24)中栀子苷经过苯酚一硫酸显色法测定蒙药沙蓬中的多糖含量嘎鲁爱军(1.内蒙古医学院药学院,内蒙古呼和浩特010059;2.内蒙古师范大学化学与环境科学学院,内蒙古呼和浩特010022)摘要:目的:测定蒙药沙蓬中多糖的含量.方法:采用95%乙醇热提取法从蒙药沙

3、蓬中提取多糖,用苯酚一硫酸显色法测多糖含量.结果:求得其线性回归方程为A=16.9715e一0.08919,相关系数为r=0.9995,平均回收率为102.52%,RSD%为3.11%(n=5),沙蓬中多糖含量约O.041%.结论:该方法简便,快捷,准确,重复性高,.-q-于蒙药中多糖的含量测定.关键词:沙蓬;多糖;紫外可见分光光度法;含量测定中图分类号:R291.2文献标识码:A文章编号:10066810(2010)11005903沙蓬具有祛疫,清热,解毒,利尿之功能,用其煮散剂或入丸散治疗瘟疫,头痛,赤目,黄疸,肾热,尿道灼痛,胃”赫依”,口舌生疮,齿龈溃烂等症”】.有关蒙药沙蓬的化学成分

4、方面研究尚未见报道.本文对沙蓬(全草)进行了多糖的提取与分离,并采用苯酚一硫酸法对其进行其含量测定.旨在为沙蓬的进一步开发利用提供理论依据.1仪器与试剂1.1仪器:TGB16一WS型台式高速离心机(湖南湘仪实验室仪器开发有限公司),TU1901型双光束紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限公司),FA214型电子天平(上海海康电子仪器厂),RE一52A型旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂).1.2试剂与材料:沙蓬全草(秋季采收于内蒙古,除去杂质,泥沙,阴干),葡萄糖,苯酚,浓硫酸,乙醇,丙酮,所用试剂均为分析纯.2实验方法与结果2.1沙蓬多糖的提取与精制:将沙蓬剪碎,准确称取5O.00g于100

5、0mL圆底烧瓶中,加入900mL75%的乙醇浸泡24h后,80C水浴回流提取3次,每次2.5h,过滤,合并滤液.旋干溶剂得浸膏,浸膏分散于水中,用活性炭于40C脱色3中国民族医药杂志2010年11月第l1期次,用石油醚脱脂3次.在水溶液中加入2倍量无水乙醇,静置,次日离心3om.m(500Dr,liI1),沉淀依次用无水乙醇,丙酮分别洗涤2次,离心,抽滤,于燥得粗多糖.准确称取提取所得到的31.7mg干燥粗多糖加入适量蒸馏水溶解,转移至100mL容量瓶中,摇匀,定容,得到均匀的多糖溶液,备用.2.2标准曲线的绘制2.2.1标准溶液的配制:精确称取105C干燥至恒重的葡萄糖Z00mg,加入蒸馏水

6、定容于100mL容量瓶中,再精密量取2.0OraL溶液,定容于100mL容量瓶中,摇匀,得到0.04mg?zTlL葡萄糖标准溶液.2.2.2苯酚溶液的配制:精确称取新蒸苯酚5.00g,加入蒸馏水定容于100mL容量瓶中,低温避光放置.备用.2.2.3标准曲线的绘制:分别精密吸取葡萄糖标准溶液0.00,0.25,0.50,1.00,1.5o,2.00mL于6个不同的10mL刻度试管中,再用吸量管依次加入蒸馏水2.00,I.75,I.50,1.00,0.50,0.00mL,摇匀,分别加入配置好的苯酚溶液1.00mL,摇匀,沿管壁缓缓加入5.0mL浓硫酸,振摇5min,放置至室温,在恒温水浴箱中沸水

7、浴加热20rain,冷却至室温b】.用双光束紫外可见分光光度计在200800rim之间扫描,结果在489.5rim处有最大吸光度.得到回归方程:A=16.9715e一0.O89l9(r=0.9995).图1光谱扫描曲线图2葡萄糖溶液标准曲线2.3精密度实验:分别精确取2.0mL葡萄糖标准溶液5份于5个10mL的刻度试管内,用苯酚一硫酸法显色,在489.5rim下,测定吸光度(n=5),得RSD=1.536%,表明精密度良好.表1最大吸收峰2.4稳定性实验:间隔30min测定显色后的样品溶液吸光度,连续2.5h观察其稳定性.试验样品溶液显色后2.5h内无明显变化,吸光度相对标准偏差为RSD=0.

8、2699%.2.5加样回收率实验:精确取2.0mL多糖溶液5份于5个10mL刻度试管内,用苯酚一硫酸法显色.在489.5nm下,测定多糖溶液的吸光度.再精确量取2.0mL葡萄糖标准溶液5份于5个10mL刻度试管内,用苯酚一硫酸法显色.在489.5nm下,测定葡萄糖标准溶液的吸光度.最后在另外5个10mL麇度试管中分别加入1.0mL多糖溶液和1.0mL葡萄糖标准溶液,混匀用苯酚一硫酸法显色.在489.5rim下,测定其吸光度.通过标准曲线及加样回收率公式加样回收率(%)=(加样后的糖量一加样前多糖量),加入葡萄糖量100%得到平均回收率为102.52%,RSD为3.11%.2.6多糖的含量测定:

9、吸取2.00mL已配置好的粗多糖溶液于刻度试管中,用苯酚一硫酸法显色后,在489.5nm下测其吸光度,如此重复测定5次,根据回归方程求得沙蓬中总多糖含量约0.041%.表4多糖含量测定结果2010年月第11期中国民族医药杂志613结语沙蓬是一种常用蒙药药材,资源特别丰富,本实验研究为该药材的有效成分的提取以及进一步开发利用提供了理论数据.沙蓬入药部位为全草,由于含有大量叶绿素,故其提取液为墨绿色,用活性炭去色效果不佳,对其化学成分的定性鉴别产生较大颜色干扰,虽有颜色变化,但不易观察到.给沙蓬的化学成分研究带来较大阻碍.参考文献1柳白乙拉,武绍新.中华本草.蒙药卷M3.上海:上海科学技术出版社,

10、2O04,236237.2余晓霞,张可,郑旭霞.芦荟是多糖含量测定方法的探讨J3.营养,2003,(2):149151.3J夏秀华,王海欧.银杏叶多糖两种测定方法的比较(J.食品研究与开发,2OO7,28(11):124126.(4周超,谢明勇,等.车前子多糖的测定方法研究J.分析实验室,2008,27(4):1012.5赵玉英.蒙成药哈日阿布日一16中多糖的组分和含量研究(J.光谱学与光谱分析,2005,25(2):314315.6阿力塔,马俊杰,包伊如,等.蒙药呼和嘎日迪一9多糖的提取与含量测定J.光谱实验室,2OO9,26(2):348349.2010年7月4日收稿高效液相色谱法测定蒙药

11、制剂乌珠木口服液中甘草酸的含量赵俊苹.周雪梅那松巴乙拉(1.呼和浩特市药品检验所,内蒙古呼和浩特010010;2.内蒙古药品检验所,内蒙古呼和浩特010010)关键词:高效液相色谱法;甘草酸;含量;蒙药;鸟珠木口服液中图分类号:R291.2文献标识码:A文章编号:10066810(2010)11006102乌珠木口服液是中蒙医院研制的由自葡萄干,甘草,沙2.2供试品溶液的制备:精密量取本品10mL,置分液漏斗棘等药组成的口服制剂.具有化痰,止咳,定喘等功效.主中,用水饱和的正丁醇提取3次,每次20mL,合并正丁醇要用于感冒咳嗽,急慢性支气管炎,肺炎等病症.甘草为方液,用正丁醇饱和的水洗涤3次,

12、每次20mL,弃去水层,正中主要成分之一,其主要成分为三萜类化合物有甘草甜丁醇液蒸干,残渣加流动相溶解转移至25mL量瓶中,用流素,主要为甘草酸的盐类以及甘草皂苷和黄酮化合物.为动相稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液作为供试品溶液.此,对方中甘草的主要成分甘草酸进行了含量测定.通过2.3对照品溶液的制备:精密称取甘草酸单铵盐对照品适实验摸索,确定了比较理想的色谱条件和含量测定方法,经量,置10mL量瓶中,用流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,即方法学考察及阴性对照实验,表明该方法操作简单,重现性得.(每lmL含甘草酸单铵盐对照品0.2mg,折合甘草酸为好,专属性强,可作为其质量控制的内在指标.0.19

13、32mg).1仪器与试药2.4提取方法的选择及提取效率的考察:为保证被测成分1.1仪器:岛津LE一20ASPDM20A型检测器,LCsolution提取完全,考察了同一批号供试品,用水饱和的正丁醇提取色谱工作站.岛津LC一2550型紫外分光光度计.3次后,供试品溶液再继续用正丁醇提取第4次和第5次,1.2试剂与试药:甘草酸单铵盐对照品(批号:110731一将其分别蒸干,用流动相溶解定容进行测定,结果在与对照200409;以甘草酸计含量为96.6%)中国药品生物制品检定品相同的保留时间基本无吸收,表明用正丁醇提取3次可所;甲醇为色谱纯,水为高纯水,其它试剂均为分析纯.以将甘草酸提取干净.2实验方法验证2.5空白阴性对照试验:取按处方比例并以相同工艺制备2.1色谱条件:C.柱(250X4.6mm5U);流动相l甲醇一0.的缺甘草的阴性对照,按供试品溶液制备法制得阴性对照2tool?L醋酸铵溶液一冰醋酸(62:38:1);检测波长250rtm;溶液.在上述色谱条件下,分别精密吸取对照品溶液,阴性流速:1.Oral?min;柱温30;理论板数按甘草酸峰计,应对照溶液,供试品溶液各l呲,分别注入液相色谱仪,测定不低于250o.结果为:阴性对照色谱图中在与甘草酸单铵盐对照品以及