心脑血管药理、食管癌放疗增敏研究mnsod基因单核苷酸多态性与食管癌放疗敏感性课件.ppt

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1、MnSOD基因单核苷酸多态性与食管癌放疗敏感性的关系,河北医科大学第四医院放疗科王雅棣 程云杰 刘青 2009.11.21,研 究 背 景,锰超氧化物歧化酶（MnSOD）存在于线粒体中，可使细胞代谢过程中产生的超氧阴离子（O2-.）转化为H2O2，H2O2又在谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）和过氧化氢酶（CAT）两酶的作用下，生成水和氧，使细胞无毒化，是体内重要的抗氧化物质。,MnSOD的作用机制,研究背景,MnSOD与放射敏感性,放射治疗,直接作用：放射线损伤DNA,细胞死亡,MnSOD,间接作用：H2O O2-、OH和H自由基与生物大分子相互作用，形成不可逆损伤,放射线,研究背景,MnSOD的

2、相关性研究,研究背景,染色体基因组水平上单个核苷酸变异引起的DNA序列多态性。包括单碱基的转换、颠换，不包括插入、缺失等其它的遗传变化类型。它是人类可遗传的变异中最常见的一种。,单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism,SNP）,研究背景,编码基因序列的改变,SNP原理示意图,蛋白质结构的变化,蛋白质功能的改变,研究背景,Sutton A et al.Pharmacogenetics 2003;13(3):145157,3.MnSOD的多态性：Sutton A等研究显示：,研究背景,MnSOD（-9TC）SNP与肿瘤放射敏感性,Ambrosone CB回顾性

3、研究显示：接受放疗后乳腺癌患者中，同时携带MnSOD（C/C）基因型 和髓过氧化物酶（MPO）G/G基因型的的预后好。Martin RC研究显示：MnSOD（-102 CT）SNP 延长了放疗后乳腺癌患者的无复发 生存时间。以上两项研究提示MnSOD基因多态性可能作为预测放射敏感性及预后的一个分子学指标,研究背景,研究目的,探讨MnSOD基因启动子区上游第9位点TC多态性与食管癌放射敏感性的关系,目 的,材料与方法,2006.92007.12 我科收治的食管鳞状细胞癌患者93例。符合放疗入组标准，完成所有放疗计划且可行放疗后评价。,研究对象,患者为初治，活检病理证实为食管鳞状细胞癌。临床分期期

4、III期（采用UICC 1997 年 TNM 分期标准，T分期 采用CT-T分期）。年龄18岁85岁之间，KPS评分80分。放射治疗前常规检查无远地转移，无恶性肿瘤病史。患者有完整的临床资料，包括：纤维食管镜、食管钡餐造影、胸部和上腹部强化CT、腹部超声等。李彩英，刘明,彰俊杰，等.中国医学影像技术，2002，18:236-237.,材料与方法,入 组 标 准,23例照射范围：食管原发灶上下外扩35 cm，野宽58cm照射方式：等中心照射技术，三野或四野照射，照射剂量：6064 Gy/3032次/66.5W,普通,70例照射范围：GTV：食管原发灶（长度以影像学和内镜检查为主要依据，前后左右以

5、CT显示大小）和长径1cm肿大淋巴结 CTV：临床靶区包括原发灶上下外扩3cm、周围外扩0.8 1.0cm 及相应的淋巴引流区 PTV：计划靶区为CTV均匀外扩0.5cm,适形,放射治疗,照射剂量：6064Gy/3032次/66.5W，,材料与方法,疗 效评价,万钧等“食管癌近期疗效评价标准”,CR：X片上显示粘膜像，可见粘膜基本恢复正常或增粗；若食管钡餐造影充盈片边缘 光滑，钡剂通过顺利，但管壁可稍僵硬，管壁无狭窄或稍显狭窄，病变上最宽处 横径与病变最狭窄处横径之比，小于或等于1.5,PR：食管钡餐食管走行无明显扭曲或成角，无明显溃疡，钡剂通过尚顺利，但边缘欠 光滑，有小的充盈缺损及或小龛影

6、，或边缘虽光滑，但管腔有明显的狭窄，病变 上最宽处横径与病变最狭窄处横径之比大于1.5,NR：食管钡餐片病变仍有残留或看不出病变有明显好转，仍有明显的充盈缺损及龛影 或狭窄加重,材料与方法,疗效评价,疗 效评价,材料与方法,随访截止时间为2009年2月22日，共计随访患者93例，失访3例，随访率97%，总体中位生存时间（median survival time，MST）18.0个月。,疗效评价,提取基因组DNA,PCR-RFLP,MnSOD基因型分析,采集外周血5ml,各组间基因型分析,食管癌患者,实 验 流 程 图,材料与方法,PCR-RFLP（聚合酶链反应-限制性片段长度多态性）,酶切,预

7、变性：95 5min变 性：95 30s退 火：64.5 30s延 伸：72 1min延 伸：72 5min,PCR产物,电泳,酶切产物,上游引物：5-ACCAGCAGGCAGCTGGCGCCGG-3下游引物：5-GCGTTGATGTGAGGTTCCAG-3,材料与方法,卡方检验分析不同MnSOD基因型之间 即期疗效的差异 采用Kaplan-Meier法计算生存率，差异 显著性检验采用Logrank法检验 分析不同MnSOD基因型之间预后的差 异，显著性水平为P0.05 统计采用SPSS 11.5统计软件包,材料与方法,统计学处理,结 果,MnSOD基因 PCR产物,1 2 3 4 5 6,1

8、00,200,300,500,107bp,89bp,结 果,酶切后产物,不同MnSOD基因型与食管癌即期疗效的关系,结 果,不同MnSOD基因型与食管癌生存率的关系,结 果,讨 论,Ambrosone CB 研究显示：放疗后乳腺癌患者同时携带 MnSOD（-9 C/C）基因型和髓过氧化物酶（MPO）G/G基因型生存期 Martin RC研究显示：MnSOD（-102CT）SNP 使乳腺癌患者无复发 时间本研究结果显示：MnSOD（-9TC）SNP 在食管癌病变长度5cm患 者中携带 T/C或C/C基因型患者即期疗效好于携带T/T 基因型患者,讨 论,MnSOD（-9TC）SNP与肿瘤放射敏感性,讨 论,MnSOD（-9TC）SNP与肿瘤放射敏感性,结 论,病变长度5cm患者中，携带T/C或C/C基因型患者即期疗效优于携带T/T基因型患者，即MnSOD（T/CC/C）基因型增加了病变长度5cm食管癌患者的放疗敏感性。,结 论,本研究显示：携带MnSOD（T/C+C/C）基因型患者1年生存率为73%，好于携带MnSOD（T/T）基因型患者一年生存率68%，但未显出统计学差异，可能与病例数少，或观察时间短有关，有待于加大样本量及进一步随访，以期得出可靠的结论。,结 论,谢谢！,