猪支原体肺炎疫苗多菌株免疫效果比较分析.doc
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1、猪支原体肺炎疫苗多菌株免疫效果比较试验方案猪支原体肺炎疫苗多菌株免疫效果比较参考编号试验的日期动物试验开始日期2014- - 动物试验完成日期2014-实验室试验开始日期2014-实验室试验完成日期2014-动物试验地点实验室试验地点江苏省农科院兽医所试验负责人邵国青动物试验负责人冯志新、熊祺琰、华利忠动物试验参与者甘源、王佳、徐飞扬、陈财实验室试验负责人冯志新、熊祺琰、华利忠实验室实验参与者:冯志新、熊祺琰、马庆红、陈财、王佳试验方案起草人冯志新、熊祺琰、华利忠试验方案讨论参加者邵国青、刘茂军、冯志新、熊祺琰试验方案定稿人及时间2014-记录的附件页数目录猪支原体肺炎疫苗多菌株免疫效果比较1
2、猪支原体肺炎疫苗多菌株免疫效果比较1目录2猪支原体肺炎疫苗多菌株免疫效果比较31 目的32 材料与方法32.1 材料32.2方法42.2.1动物分组说明42.2.2动物分组与试验操作概表52.2.3免疫62.2.4 疫苗免疫后临床症状观察记录72.2.5 疫苗免疫后血清抗体及分型检测72.2.6 疫苗免疫后细胞免疫指标检测72.2.7 疫苗免疫后黏膜免疫指标检测72.2.8攻毒7附录1 攻毒保护率计算9附录2 猪支原体肺炎发病猪临床症状评判标准10附录3 动物分组记录表11附录4 动物免疫记录表12附录5免疫后异常临床症状观察记录表13附录6 抗体检测记录表14附录7 淋巴细胞增殖试验结果16
3、附录8 血象分析17附录9 T淋巴细胞分类计数18附录10 黏膜抗体检测记录表19附录11攻毒记录单20附录12特殊情况记录表21附录13 攻毒后临床症状观察记录表22附录14日增重记录24附录15 攻毒后肺部剖检记录26附录16攻毒后剖检记录28附录17 攻毒后肺部病理损伤记录30附录18 攻毒后肺部猪肺炎支原体抗原定量检测32猪支原体肺炎疫苗多菌株免疫效果比较1 目的猪支原体肺炎活疫苗AN306菌株与原168菌株的肺内注射免疫效果比较;猪支原体肺炎疫苗(天邦、吉林正业、辉瑞)免疫效果比较;2 材料与方法2.1 材料2.1.1待试的疫苗产品与试剂2.1.1.1 疫苗A.猪支原体肺炎活疫苗AN
4、306株F321,由江苏省农业科学院兽医所研制,规格为2107CCU/瓶(2ml冻干),批号为20140325。有效期:_。PCR鉴定:Mhp_,Mhr_。B.猪支原体肺炎活疫苗(168株),由南京天邦生物科技有限公司提供,规格为50头份/瓶,批号为139078-1。有效期:_。PCR鉴定:Mhp_,Mhr_。C.猪支原体肺炎活疫苗(乳兔继代株),由吉林正业生物科技有限公司提供,规格为 4头份/瓶,批号为2014002。有效期:_20150110_D.猪支原体肺炎灭活疫苗(P-5722-3株,Suvaxyn RespiFend MH),由上海硕腾(辉瑞)提供,规格为50头份/瓶,批号为1302
5、777A。有效期:15/11/16_2.1.1.2 试剂A猪支原体肺炎活疫苗(乳兔继代株)稀释液,批号:2014002;有效期:20170115B猪支原体肺炎雾化活疫苗稀释液C猪支原体肺炎肌注活疫苗佐剂G-1-12.1.2动物选择猪肺炎支原体抗体、抗原均阴性的5-10日龄仔猪,54头.饲养地点:江苏省农科院兽医所饲养员:_徐飞扬,陈才_仔猪免疫状况:未打气喘病疫苗。2.1.3 动物饲料仔猪料:2.1.4 设备气雾免疫设备、滴鼻头、20(10、5、2)ml注射器、耳标、耳号钳、冰盒、相机、解剖器械、离心管。2.1.5攻毒用强毒猪肺炎支原体强毒JS株组织强毒,来自本所,批号20130625,-20
6、保存,有效期至:2014/06/25。2.2方法2.2.1动物分组说明G1:-猪支原体肺炎活疫苗168株肺内免疫组。每头猪肺内注射免疫1头份(1ml)即1107 CCU的猪支原体肺炎活疫苗168株。免疫一次,一免后6周攻毒,攻毒后28天剖杀。G2: -猪支原体肺炎活疫苗AN306株肺内免疫组。每头猪肺内注射免疫1ml,即1107CCU的猪支原体肺炎活疫苗AN306株。免疫一次,6周后攻毒,攻毒后28天剖杀。G3: -猪支原体肺炎活疫苗168株气雾免疫组。每头猪气雾免疫5107CCU的猪支原体肺炎活疫苗168株。免疫一次,6周后攻毒,攻毒后28天剖杀。G4:-猪支原体肺炎活疫苗168株肌注免疫组
7、。每头猪肌肉注射免疫5107 CCU的猪支原体肺炎活疫苗168株。首免后两周二免,一免后6周攻毒,攻毒后28天剖杀。G5: -猪支原体肺炎灭活疫苗肌注免疫组。每头猪肌肉注射免疫1头份(2ml)猪支原体肺炎灭活疫苗。首后2周,加强免疫一次,首免后6周攻毒,攻毒后28天剖杀。G6:- 猪支原体肺炎乳兔活疫苗胸腔免疫组。每头猪胸腔注射免疫1头份(5ml)猪支原体肺炎乳兔活疫苗。免疫一次,一免后6周攻毒,攻毒后28天剖杀。G7: -猪支原体肺炎乳兔活疫苗滴鼻免疫组。每头猪滴鼻免疫?头份猪支原体肺炎乳兔活疫苗。免疫一次,6周后攻毒,攻毒后28天剖杀。G8: -健康对照组(不免疫,不攻毒)。不接种疫苗。不
8、攻毒,其它组攻毒后28天剖杀。G9: 攻毒对照组(不免疫,只攻毒)。不免疫疫苗,只攻毒,攻毒后28天剖杀。2.2.2动物分组与试验操作概表组号组别N疫苗剂量DPI-0DPI-7DPI-14DPI-21DPI-28DPI-35DPI-42DPI-70G1168肺内组6天邦1107 CCU/头(1头份)肺内免疫/采血/鼻拭子/称重鼻拭子采血/鼻拭子鼻拭子采血/鼻拭子鼻拭子采血/鼻拭子/攻毒/称重剖检/称重G2AN306肺内组6ADC1107 CCU/头G3168气雾组6天邦5107 CCU/头气雾免疫/采血/鼻拭子/称重G4168肌注组6天邦5107 CCU/头肌注免疫/采血/鼻拭子/称重肌注免疫
9、/鼻拭子采血/鼻拭子G5灭活苗组6辉瑞2ml/1头份G6乳兔苗胸腔组6吉林正业5ml/1头份胸腔免疫/采血/鼻拭子/称重采血/采血/鼻拭子鼻拭子G7乳兔苗滴鼻组6吉林正业1头份滴鼻免疫/采血/鼻拭子/称重G8健康对照组6-采血/鼻拭子/称重G9攻毒对照组6-称重攻毒/称重总计542.2.3免疫G1猪支原体肺炎活疫苗168株肺内免疫组用灭菌生理盐水50ml溶解168活疫苗冻干粉1瓶,使活疫苗终浓度为1107 CCU/ml,1头份/ml。每头猪肺内免疫1ml,即1107 CCU/头。G2猪支原体肺炎活疫苗AN306株肺内免疫组用灭菌生理盐水溶解AN306活疫苗冻干粉,使活疫苗终浓度为1107 CC
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