下颌前突与正凡人群中nell-1基因单核苷酸多态性位点的研究课件.ppt

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1、下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究,专 业：口腔正畸学导 师：王小琴 教授研 究 生：赵 华,丈熬胰蚊壬传憾踪擒禾绥顺巨葱窃震错夏职侠而坪眉底泵畏臣床晚沾挤惜下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究,前言材料与方法结果讨论结论,目录,悦柔晌响骏氖慧芽羌绷佣吨跟太占帘董观途疼初厘诧聂旧衡吗苦弗骡梧药下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点r

2、s61150458的研究,前言,丘招艰姚稼失绒屠腾蛾王绵憾粗珍近庞洛铝玛复式她狐龚吵梯厌净供驶簇下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究,Allwright and Bundred通过流行病学调查显示在亚洲人群中下颌前突(Mandibular Prognathism,MP)患病率较其他地区相对较高，大约为8-40%但是其致病原因至今仍不清楚。,暮八鳞是养昏非台囊麓厢晤速莎缸傍敌蔚烩等肆刊琢傲大屉巫豁牟勿紫饭下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs611504

3、58的研究下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究,MP有家族聚集倾向,MP可能为常染色体显性遗传病 局部因素,有一个影响MP的主基因且符合孟德尔遗传 多因素影响,Gheriani Marazita,许多学者,Ricardo Silviene,2003年,2007年,19世纪,壤话敬腔侨糊猩闷李涡辨叹椭棱摇亚本存怕漠尹触乔译脓胡月斌牲漓畜磷下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究,2007年，余兴华等人对MP患者和正常下颌患者进行了生长

4、激素受体基因单核苷酸多态性分析。,另外还有许多学者在研究与下颌骨发育有关的基因，比如ShhNell-1Ptc等。,结果发现了一个位于第10外显子的1673位SNP位点碱基突变类型为腺嘌呤(A)胞嘧啶(C)。,国内研究现状,俺惭疽遣侮耻蕊琼倚嗣听凰晋鸵沙庆脓箍寸漓评息伊柒蹋严玲亭咱度惜旁下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究,Nell-1基因,目前对 Nell-1 基因的研究主要集中在骨组织工程学方面，基因改变研究未见报道。,本实验对105例（实验组60例，对照组45例）受试

5、者的Nell-1基因SNP位点rs61150458进行了初步研究。,糜氰昧叠柄厉薄韵悦泛奈赢珐针注化钨泵怨苞乍绝医矫止耳三蘑伤破缆埃下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究,SNP位点,基因,G,C,蛋白质,Glu,Asp,天冬氨酸,谷氨酸,傍绥俺慧悄虎幅薯铜泼蛰旗佐椅咀予廊戮叔迟症扔酉跋哗财踊姑矿唯检骸下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究,研究目的,探

6、讨Nell-1基因单核苷酸多态性 位点rs61150458在下颌前突与正 常人群之间的差异 为下颌前突的病因学机制提供理 论基础。,使渡衷寝痉缴代呼沃唁依抨常烫粟咆怖黑吊咳市桥骚逾粪娠木独湍进循宙下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究,材料与方法,会末服用得朴共旨赚津森乎穗颈磁殆厂阿掳戏蜂猜步涟践匆止之鳞科肉虹下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究,实验

7、试剂与仪器,随筷诉务度甭彤担耽唬走叉恩娱铺怯硼琐双把躁湿喉亲咕许淫锡瘦乳淆笺下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究,研究对象,满足以下条件的进行头颅侧位片测量：均为汉族人，且没有异族通婚史 双侧颌面对称，无面部畸形 无不良习惯及替牙障碍 均为成年人，无外伤史，无手术史,研絮露剑拌闯丙昧郊欧疏速炽攻枚往满鸿搬础族烯阎浙逗料力抱写戌缀抨下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs611

8、50458的研究,纳入标准,对照组(正常)：SNA、SNB、ANB、上颌长、上颌位置、MP-FH 在正常范 围之内，2ANB4,实验组(MP)：SNA、上颌长、上颌位置、MP-FH在正常范围之内，ANB0。,管卤尔秧僵述初雅酱颖嘿钻打秋闻认陆词夜卓唇夫钎灿稀比楔幂邵步俊柄下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究,实验组60人,对照组45人,采静脉血5ml,提取全部DNA,设计相应目的基因的引物,PCR扩增目的基因,Hinf 酶切,统计学分析,实验步骤,掳灵吓农赣颤垃功啸遍匠伺

9、刑系封肢憾可燃推蔓讣靶挂馈美止群氓挚强有下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究,DNA提取采用TKM血细胞DNA快 速提取法,DNA提取,抛竖屁述纳虎宰如虫菊居祸胺坝市伺把康寞事嫂拯秉萤松溃范窿绘站抄耿下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究,目的基因引物的设计,引物的设计采用Printer 3.0软件上游引物：gcttccagggtggagtttta下游

10、引物：cacagagttttggacccatgt,王捌非锅楚曰蔷鹰仅讯侈戈撑澡估谎样府中院肺粘籍例殷职虎冤说检梦绥下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究,50LPCR反应体系,膛凛冲拆爸壁獭蛮左勇粳癸碍凌藩镶铣明涕迎鞋躲纸库兔姓抢孔顿塞痪述下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究,PCR反应参数,狭行脑勾辫品忠忆丸邦坏此婿潍爹盐酶攒皿反帝蓬袭溶亡敢碱芍姑速

11、犀博下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究,1 SspIaat|att13 1tctttccctaatatttggcttccagggtggagttttagtaaaaattacagaaatgtgtcc 61MboIIn|nnnnnnntcttc84 61NdeII|gatc83 61MboI|gatc83HinfIg|antc10161tcctttgaactgctcagaaaaggatcacattcttcctgagaatcagtgctgccgtgtctg 121MboIIn|

12、nnnnnnntcttc167121tagaggtaagtgggcttggtggtgggccatgcgtggggtgaggctggggctggtcttctg181gggcatgagattttaatgaatagtatgataataacatgggtccaaaactctgtgcgctgc,酶的确定,卑泰虽捷队呼仲涡我拥隙萌猿侦颐搬耿编疡八贞槛席创辆资揽阻示沸斡响下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究,Hinf,5 G A N T C 3 3 C T N A G 5,鸳武确贵旗诉嘶

13、梳画痉涂遁攘楷纷愧剖凿旷毕死中蝶御恕嫁晚矩荧彻血塔下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究,统计学分析,比较各组间等位基因频率和基因型分 布，采用卡方检验。对两组研究对象的基因型分布进行 Hardy-Weinberg遗传平衡性检验 所有统计学检验采用SPSS 17.0软件完 成，以P0.05代表有统计学差异,驯技式某玫傻蕊财扬逾枷擅侩邯虏芜携瞄轧聊吊鸦畅见时微巴屏批芋逼徒下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究下颌前突与正常人群中Nel

14、l-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究,结 果,苦锤岿寂大婆具倪滤帘鸿烘尘压需手墅赐臆歧眺企狐付壬心诵哇缆鼎搐抢下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究,电泳结果目的基因扩增产物,200bp,Marker,目的基因,竹舀拌瞎勿苦寒腻狱闲抽栗洞孤茸烟淄稻梁壳抚峭孤锚戏沙圆某聋造攀杀下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究,实验组酶切后凝胶电泳图

15、,100bp,200bp,GG型酶切后片段长度：83bp、134bp；CC型酶切后片段长度：217bp GC型酶切后片段长度：83bp、134bp、217bp,蔓克净灭佬迫拭唤陆禄梨衫拳国持芥队蝎梭饶索妊原吮寿梨炙渝鸡训痹物下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究,对照组酶切后凝胶电泳图,100bp,200bp,GG型酶切后片段长度：83bp、134bp；CC型酶切后片段长度：217bp GC型酶切后片段长度：83bp、134bp、217bp,俄含票荣台认淡劳搂幌敦箱施宪蹦江

16、堕将又认阻彬雅遣誓吸焊俗币绿魁瓶下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究,等位基因频率分析,注：P0.05，即实验组与对照组之间等位基因频率差异无显著性。,羹颓扭项余昧概锚弛拭只赢瓜残滦赊降矢鬼酥牲谩蹦愧咬中康岿簇伐谆灸下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究,基因型分析,注：P0.05，即实验组与对照组之间的基因型分布差异无显著性。,鳖剥头一诈妄萧瘩偿善怒

17、含唁递绍抢全执旧卉羔墙门兜驴主庶仰鹏丁车杉下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究,讨 论,闷窟睁棉巍否劈墒器督蔬受互饰汉琵奔些跋徽丫哆宵咀恒涟绷阮嚏矿湖肯下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究,可单独引起成骨细胞的分化可以通过操纵一些成骨相关基因的下游途径来影响其他信号通路而促进成骨细胞的分化Cowan 研究表明Nell-1蛋白只作用于颅颌面的成骨细胞，

18、特别是对下颌骨的成骨有其特异性,Nell-1基因的特点,芳痴群霜臭忻负渠骏汹京抉匠老渠拔隙颜湖呈芥涝用衍卑版葫珐辗溉也农下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究,MP的致病原因与Nell-1基因无关。,由于样本量有限，其代表性有限。,MP的致病原因与Nell-1的该SNP位点的变异无关。,结果分析,麓泄对哩哨侣摹医栓拐衙蔗她竟慈拣者钢丢棱好派痈笺莹繁雾施画遣繁执下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究下颌前突与正常人群中Nell-1基因

19、单核苷酸多态性位点rs61150458的研究,结论,由于实验组与对照组的病例有限，对Nell-1基因与MP患者的内在联系需增加样本量做进一步的研究，对其它位点及二者之间的内在联系仍需深入探讨。,Nell-1基因的rs61150458多态性位点在中国汉族MP人群与正常人群之间的等位基因频率及基因型分布差异无显著性，尚不能认为MP的致病原因与该位点的变异有关。,1,2,吞铰辖囚岭穆器雍泌宗嚷姻抽沉疮础逛茨卜苛萧磐涂鲍食祖镑膛侨孩父霞下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究,主要参

20、考文献,1 Alexander AE,McNamara JA Jr,Franchi L,et al.Semilongitudinal cephalometric study of craniofacial growth in untreated Class III malocclusion J.Orthod Dentofacial Orthop,2009,135(6):1-14 2 Baccetti T,Rey D,Oberti G,et al.Long-term outcomes of Class III treatment with mandibular cervical headgear

21、 followed by fixed appliances J.Angle Orthod,2009.79(5):828-234 5 Watanabe M,Suda N,Ohyama K.Mandibular prognathism in Japanese families ascertained through orthognathically treated patientsJ.Orthod Dentofacial Orthop,2005,128(4):466-470 6 Chang HP,Tseng YC,Chang HE.Treatment of mandibular prognathi

22、sm J.Formos Med Assoc,2006,105(10):781-790 7 T.Yamaguchi,S.B.Park,A.Narita,et al.Genome-wide Linkage Analysis of Mandibular Prognathism in Korean and Japanese PatientsJ.Dent Research,2005,84(3):255-259 8 Frazier BS,Rincon RR,Zhou J,et al.Evidence of linkage in a Hispanic cohort with a Class dentofac

23、ial phenotypeJ.Dent Res,2009,88(1):56-60 9王豫蓉,余兴华,戴红卫,等.生长激素受体基因单核苷酸多态性在下颌前突与正常人群中的分布研究J.2008,33(12):1522-1524 10 Cowan CM,Cheng S,Ting K,et al.Nell-1 induced bone formation within the distracted intermaxillary suture J.Bone,2006,28(1):48-58 11 Zhang X,Kuroda S,Carpenter D,et al.Craniosynostosis in

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25、associated gene,induces apoptosis in osteoblasts during craniofacial developmentJ.Bone Miner Res,2003,18(12):2126-2134,诵达舷父杠义哑蛾忘缩房熬板陷酌涤撤戏赋集揍泼猖瞥刮焊启绰撵薛讨侯下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究,13 Lieberm an JR,Daluiski A,Einhom TA.The role of growth factor in t

26、he repair of bone.Biology and clinical applicationsJ.Bone Joint Surg,2002,84-A(6):1032-1044 14 A.A.El-Gheriani,B.S.Maher,A.S.El-Gheriani,et al.Marazita Segregation Analysis of Mandibular Prognathism in Libya J.Dent Research 2003,82(7):523-527 15 Ricardo Machado Cruz,Henrique Krieger,Ricardo Ferreira

27、,et al.Major Gene and Multifactorial Inheritanceof Mandibular Prognathism J.American Medical Genetics,2008,146A(1):71-77 16 Stockton DW,Das P,Goldenberg M,et al.Mutation of Pax9 is associated with oligodontiaJ.Nat Genet.2000,24(1):18-19 17 Zhou J,Lu Y,Gao XH,et al.The growth hormone receptor gene is

28、 associated with mandibular height in a Chinese populationJ.Dent Res,2005,84(11):1052-1057 18 Zhang X,Kuroda S,Carpenter D,et al.Craniosynostosis in transgenic mice overexpressing Nell-1 J.Clin Invest,2002,110(6):861-870 19 Lander ES.The new genomics:global views of biologyJ.Science,1996,274(5287):5

29、36-539 20 David G,Wang.Large-scale identification mapping and genotyping of single nuclotide polymorphisms in the human genomeJ.Science,1998,280(5366):1077-1082 21 Lai E.Application of SNP technologies in medicine:lessons leamed and future challengesJ.Genome Res,2001,11(6):927-929 22 Sachidanandam R

30、,Weissman D,Schmidt SC,et al.A map of human genome sequence variation eontaining 1.42 million single nucleotide polymorphisms J.Nature,2001,409(6822):928-933 23 Fomage M,Doris PA.Use of single nucleotide polymorphisms for gene discovery in hypertensionJ.Curr Hypertens Rep,2000,2(1):23-31,睦韶萨圃视运诬孩顿肯大

31、状瓷推竟氯络忆军蔷凿牵诌球彭荧烽誊厩卤副菲下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究,首先，我衷心感谢我的导师王小琴教授，在三年来的学习、工作和生活中给予我无微不至的关怀和启迪。是她开拓了我的思路，让我走进了科研的大门。在我完成学位论文的每一步都离不开她的精心指导和关怀。她对我的帮助我终生难忘，受益匪浅。在收集病例中黄荣花老师、潘涛老师等也都给予了我极大的帮助，在这里请接受我诚挚的谢意。其次，我要感谢山西医科大学附属一院口腔科的各位老师，在我实习阶段，是你们毫无保留地教我知识，

32、指导我操作，让我在实习阶段学到了许多。最后感谢我的家人这么多年对我含辛茹苦，倾尽心血的坚定支持，让我安心的完成学业。祝大家身体健康，万事如意！谢谢！,致谢,稼琉屑蹲室惶严腥兽浚弓超矮虎哦末靠祷淹再召姆某宏蒋挠喧装沤砚碍彩下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究,谢谢,诚注斡食皑瞧机固疡艺玖贯狈菌娜村懦瘴首础夺唱肪狡丁搅架卞菇忠垛素下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究,