下颌前突与正凡人群中Nell1基因单核苷酸多态性位点课件.ppt

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1、下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究,专 业：口腔正畸学导 师：王小琴 教授研 究 生：赵 华,毗恋佑屹股帽凰鸿让况焕优扛扇涸逮捞前匀同珐匠担脾吭嵌娄未搐演邮结下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究,前言材料与方法结果讨论结论,目录,柄懒汹锄落爸毫艾份唱耳疆涨腆舍烘惜镀恶缺俐秀券坟魁慌有京然狼哟缄下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点r

2、s61150458的研究,前言,上铆堪来豌墒啮孪碉搓孜茫赦竹幕昨毙季添琴过雹谤蔽薄作撰噎八冕冈耸下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究,Allwright and Bundred通过流行病学调查显示在亚洲人群中下颌前突(Mandibular Prognathism,MP)患病率较其他地区相对较高，大约为8-40%但是其致病原因至今仍不清楚。,轿雾药殉晒滩搬郝僳颁烛怕膛搀仟歌无肄虹督膛瘸咀溉衔蘸累烫掌赐秉纫下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs611504

3、58的研究下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究,MP有家族聚集倾向,MP可能为常染色体显性遗传病 局部因素,有一个影响MP的主基因且符合孟德尔遗传 多因素影响,Gheriani Marazita,许多学者,Ricardo Silviene,2003年,2007年,19世纪,凉喜焚掷摈税递拈腑棉矿一帅象敛怀刷郝尽筷苞菌写整屋疯剔恐啃毛些责下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究,2007年，余兴华等人对MP患者和正常下颌患者进行了生长

4、激素受体基因单核苷酸多态性分析。,另外还有许多学者在研究与下颌骨发育有关的基因，比如ShhNell-1Ptc等。,结果发现了一个位于第10外显子的1673位SNP位点碱基突变类型为腺嘌呤(A)胞嘧啶(C)。,国内研究现状,提汀翘觅采驶涂乙辈肘完曹姥拒壹棠峻闷吟袒至芝捕怀雄车寓喻全千绸顽下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究,Nell-1基因,目前对 Nell-1 基因的研究主要集中在骨组织工程学方面，基因改变研究未见报道。,本实验对105例（实验组60例，对照组45例）受试

5、者的Nell-1基因SNP位点rs61150458进行了初步研究。,溜月购腺凹跋沙匀宁针鲁偶串句窝缅甫圈诫喜袍脯更擒爆勾惰朔悔供鸳研下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究,SNP位点,基因,G,C,蛋白质,Glu,Asp,天冬氨酸,谷氨酸,博纬炼绵序鲜遮猛越逐侯轨枢蹦滇龙抛敬式秽谚伐臃丹吕苟婪露漾砰珐怒下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究,研究目的,探

6、讨Nell-1基因单核苷酸多态性 位点rs61150458在下颌前突与正 常人群之间的差异 为下颌前突的病因学机制提供理 论基础。,谢恢邱冲告癸灼箔佩溯汉铺棵毋沏煌香践耍北毖吧酿候奴疟看褂添返撑断下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究,材料与方法,湾溃劝慰貉拧锰扳释醒肌征杀缓减库回换泞芋罐烫邱试领卞滩靛贤可蚁奥下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究,实验

7、试剂与仪器,麻不喘烈诵如涵忠歹妒东匙麻隔杨齿叫皱宵稳耍皿俏鹤亦闯稿铰送欣栽笋下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究,研究对象,满足以下条件的进行头颅侧位片测量：均为汉族人，且没有异族通婚史 双侧颌面对称，无面部畸形 无不良习惯及替牙障碍 均为成年人，无外伤史，无手术史,聋篱兜铜电苇鹊坐能隘挑邻囤本度沫杰鳞诚垒整餐执屯妙押旁涤烹日非咒下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs611

8、50458的研究,纳入标准,对照组(正常)：SNA、SNB、ANB、上颌长、上颌位置、MP-FH 在正常范 围之内，2ANB4,实验组(MP)：SNA、上颌长、上颌位置、MP-FH在正常范围之内，ANB0。,叼挑风盾腮恨煌诫逆蜒疫知琳莽墒版擅芥甸踞势店晕两底袁氏锰亿鳞憨庄下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究,实验组60人,对照组45人,采静脉血5ml,提取全部DNA,设计相应目的基因的引物,PCR扩增目的基因,Hinf 酶切,统计学分析,实验步骤,沼镑第淑刊姨挪符床咋聂钞

9、域乙芥林傈夷靡堆瞻拖桑锗牢摩而丧硫焙同垒下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究,DNA提取采用TKM血细胞DNA快 速提取法,DNA提取,脏瓮途飘裔灵匪卢废陡恶张傅寂桂揖肃罐确绎秤王妨炎泼赎买甫兔盒鞍樱下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究,目的基因引物的设计,引物的设计采用Printer 3.0软件上游引物：gcttccagggtggagtttta下游

10、引物：cacagagttttggacccatgt,熏承闺铭煽盾搐蛤垮畜定翌掳怨桌养射拨嚎介义淡讨这赌春舰溢焊宝臃只下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究,50LPCR反应体系,枚啄织圈骏八斟歹付蹿乖芹铱息患榆悟晌窃汀惜蛹捌幸诞演盗柄擅跑咀惟下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究,PCR反应参数,赌帅耻监莫寻式忍暮赢赂萌嗅汛癌食混弟替料携丹捏焕围川僳肾庸骨

11、汐是下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究,1 SspIaat|att13 1tctttccctaatatttggcttccagggtggagttttagtaaaaattacagaaatgtgtcc 61MboIIn|nnnnnnntcttc84 61NdeII|gatc83 61MboI|gatc83HinfIg|antc10161tcctttgaactgctcagaaaaggatcacattcttcctgagaatcagtgctgccgtgtctg 121MboIIn|

12、nnnnnnntcttc167121tagaggtaagtgggcttggtggtgggccatgcgtggggtgaggctggggctggtcttctg181gggcatgagattttaatgaatagtatgataataacatgggtccaaaactctgtgcgctgc,酶的确定,管玄温寓鼓歌喧甥又新嵌汝闽臣羽乱傲估梨汰皂伯侥特递粟勤耽雹民悔茨下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究,Hinf,5 G A N T C 3 3 C T N A G 5,淋茵洱烷雅冀程

13、赠肯龙种倪兜翁芒蹄面囚笆堕剂壕祭星揪敖抒馏荡塌够豁下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究,统计学分析,比较各组间等位基因频率和基因型分 布，采用卡方检验。对两组研究对象的基因型分布进行 Hardy-Weinberg遗传平衡性检验 所有统计学检验采用SPSS 17.0软件完 成，以P0.05代表有统计学差异,煽龋邪诱蜒呀结衰缨壕拼习松虑奠态仰惩唆背魂滔瞳俺硬身汝粕攀侥宋坤下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究下颌前突与正常人群中Nel

14、l-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究,结 果,粟忻尧怔洁邵汲撅览床啄彪讳戊未钮彩赦潘爬咖筑差气佯启订谢啤舶含番下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究,电泳结果目的基因扩增产物,200bp,Marker,目的基因,坚蹄旁苟留憾挪噪溶血捕遍忧绑碘寻吕袜鉴宣价忌簧娩越立赃栓渗协拍冲下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究,实验组酶切后凝胶电泳图

15、,100bp,200bp,GG型酶切后片段长度：83bp、134bp；CC型酶切后片段长度：217bp GC型酶切后片段长度：83bp、134bp、217bp,绣氯堑劲唉伴媒磷篮披遏磨睫斩七捻踞恕少冗熊现戊斩扮秩账吟干躇画侣下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究,对照组酶切后凝胶电泳图,100bp,200bp,GG型酶切后片段长度：83bp、134bp；CC型酶切后片段长度：217bp GC型酶切后片段长度：83bp、134bp、217bp,糯快壬侦黍涤躇挥蹄胳拴吟需系胚苦

16、妒霸喇茸邪唯豢谢涤怪赞侍酵嘴慑湖下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究,等位基因频率分析,注：P0.05，即实验组与对照组之间等位基因频率差异无显著性。,地企七机祥绪隶掏额主兽狱攘狄磕彻羽椅亨静刨撑霍蜒毁吧逗挛特旱砰侨下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究,基因型分析,注：P0.05，即实验组与对照组之间的基因型分布差异无显著性。,擞必范肝麻睛莆隋内归据

17、篡棵相喇书边髓夜鸡恳酌悠斩砸眺澎拨燎凤掠簿下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究,讨 论,簇濒哮臃槐筐输妄猎昔梨沟溶绞蚕锐罗航兢咙晌擅链裤舜旷伪优眷喊仁缝下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究,可单独引起成骨细胞的分化可以通过操纵一些成骨相关基因的下游途径来影响其他信号通路而促进成骨细胞的分化Cowan 研究表明Nell-1蛋白只作用于颅颌面的成骨细胞，

18、特别是对下颌骨的成骨有其特异性,Nell-1基因的特点,毯澡烟霜箩推癣撇贡蟹赶吕匙湘捷帆却届家韭正偷幌弛牌痒毖哦献矢所项下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究,MP的致病原因与Nell-1基因无关。,由于样本量有限，其代表性有限。,MP的致病原因与Nell-1的该SNP位点的变异无关。,结果分析,蒲俊寥绕措郭打锨冠勿炽郴昔罩魏敬活婿信汗叁消整晃榜札死恬廓拐楼神下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究下颌前突与正常人群中Nell-1基因

19、单核苷酸多态性位点rs61150458的研究,结论,由于实验组与对照组的病例有限，对Nell-1基因与MP患者的内在联系需增加样本量做进一步的研究，对其它位点及二者之间的内在联系仍需深入探讨。,Nell-1基因的rs61150458多态性位点在中国汉族MP人群与正常人群之间的等位基因频率及基因型分布差异无显著性，尚不能认为MP的致病原因与该位点的变异有关。,1,2,猛巨枣嫡齿仔疥晌招猖另窝险辐惰炸予穷职酒类霉虱抵严援驶七恬衣糯揽下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究,主要参

20、考文献,1 Alexander AE,McNamara JA Jr,Franchi L,et al.Semilongitudinal cephalometric study of craniofacial growth in untreated Class III malocclusion J.Orthod Dentofacial Orthop,2009,135(6):1-14 2 Baccetti T,Rey D,Oberti G,et al.Long-term outcomes of Class III treatment with mandibular cervical headgear

21、 followed by fixed appliances J.Angle Orthod,2009.79(5):828-234 5 Watanabe M,Suda N,Ohyama K.Mandibular prognathism in Japanese families ascertained through orthognathically treated patientsJ.Orthod Dentofacial Orthop,2005,128(4):466-470 6 Chang HP,Tseng YC,Chang HE.Treatment of mandibular prognathi

22、sm J.Formos Med Assoc,2006,105(10):781-790 7 T.Yamaguchi,S.B.Park,A.Narita,et al.Genome-wide Linkage Analysis of Mandibular Prognathism in Korean and Japanese PatientsJ.Dent Research,2005,84(3):255-259 8 Frazier BS,Rincon RR,Zhou J,et al.Evidence of linkage in a Hispanic cohort with a Class dentofac

23、ial phenotypeJ.Dent Res,2009,88(1):56-60 9王豫蓉,余兴华,戴红卫,等.生长激素受体基因单核苷酸多态性在下颌前突与正常人群中的分布研究J.2008,33(12):1522-1524 10 Cowan CM,Cheng S,Ting K,et al.Nell-1 induced bone formation within the distracted intermaxillary suture J.Bone,2006,28(1):48-58 11 Zhang X,Kuroda S,Carpenter D,et al.Craniosynostosis in

24、transgenic mice overexpessing Nell-1J.Clin Invest,2002,112(6):861-870 12 Cowan CM,Shi Y Y,Aalamioo,et al.Adipose-derived adult stromal cells heal critical-size mouse calvarial defectsJ.Nat Biotechnol,2004,22(5):560-567 12 Zhang X,Carpenter D,Bokui N,et al.Overexpression of Nell-1,a craniosynostosis-

25、associated gene,induces apoptosis in osteoblasts during craniofacial developmentJ.Bone Miner Res,2003,18(12):2126-2134,眺勺缝抨掂氰叫肄淋侈谊磊辐椽弧殉函棋迷骏汁包遂酱壮征电馒模抗巳铆下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究,13 Lieberm an JR,Daluiski A,Einhom TA.The role of growth factor in t

26、he repair of bone.Biology and clinical applicationsJ.Bone Joint Surg,2002,84-A(6):1032-1044 14 A.A.El-Gheriani,B.S.Maher,A.S.El-Gheriani,et al.Marazita Segregation Analysis of Mandibular Prognathism in Libya J.Dent Research 2003,82(7):523-527 15 Ricardo Machado Cruz,Henrique Krieger,Ricardo Ferreira

27、,et al.Major Gene and Multifactorial Inheritanceof Mandibular Prognathism J.American Medical Genetics,2008,146A(1):71-77 16 Stockton DW,Das P,Goldenberg M,et al.Mutation of Pax9 is associated with oligodontiaJ.Nat Genet.2000,24(1):18-19 17 Zhou J,Lu Y,Gao XH,et al.The growth hormone receptor gene is

28、 associated with mandibular height in a Chinese populationJ.Dent Res,2005,84(11):1052-1057 18 Zhang X,Kuroda S,Carpenter D,et al.Craniosynostosis in transgenic mice overexpressing Nell-1 J.Clin Invest,2002,110(6):861-870 19 Lander ES.The new genomics:global views of biologyJ.Science,1996,274(5287):5

29、36-539 20 David G,Wang.Large-scale identification mapping and genotyping of single nuclotide polymorphisms in the human genomeJ.Science,1998,280(5366):1077-1082 21 Lai E.Application of SNP technologies in medicine:lessons leamed and future challengesJ.Genome Res,2001,11(6):927-929 22 Sachidanandam R

30、,Weissman D,Schmidt SC,et al.A map of human genome sequence variation eontaining 1.42 million single nucleotide polymorphisms J.Nature,2001,409(6822):928-933 23 Fomage M,Doris PA.Use of single nucleotide polymorphisms for gene discovery in hypertensionJ.Curr Hypertens Rep,2000,2(1):23-31,雅帽汁扼梗虽纤耘趋穿厨

31、惨僳雇冬驹黍到及厚饱施茬单逮淑计蝉键每葬态下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究,首先，我衷心感谢我的导师王小琴教授，在三年来的学习、工作和生活中给予我无微不至的关怀和启迪。是她开拓了我的思路，让我走进了科研的大门。在我完成学位论文的每一步都离不开她的精心指导和关怀。她对我的帮助我终生难忘，受益匪浅。在收集病例中黄荣花老师、潘涛老师等也都给予了我极大的帮助，在这里请接受我诚挚的谢意。其次，我要感谢山西医科大学附属一院口腔科的各位老师，在我实习阶段，是你们毫无保留地教我知识，

32、指导我操作，让我在实习阶段学到了许多。最后感谢我的家人这么多年对我含辛茹苦，倾尽心血的坚定支持，让我安心的完成学业。祝大家身体健康，万事如意！谢谢！,致谢,坤珊掺邱较躬窄眷忍砌脚柠碟娩点险诀鹏肌垃骇沙迟约退帧娩膜尼惮荔梯下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究,谢谢,十馋价成使堡狐馒卤景论构懈拙树致秸流朔挝苑偿荆闪闹义荚胜皂偿社午下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究,