单克隆抗体制备课件.ppt

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1、合肥十三中 王立新,2002年月日，两场筹备了10年的“太空婚礼”首次在神舟四号飞船上举行，植物细胞“新人”黄花烟草和革新一号烟草叶肉细胞原生质体，动物细胞“新人”是小鼠B淋巴细胞和骨髓瘤细胞，两批新人同时在“产房”电融合仪内孕育新生命。一段时间后，我国首批”太空娃娃”终于顺利诞生。对照实验结果表明，细胞融合率大大提高。,STS,“太空婚礼”,太空中处于失重状态，不同种细胞（原生质体）更容易亲近,为什么在太空，细胞的原生质体融合率会大大上升？,神舟放飞强国梦,“太空婚礼”科研项目一：,“太空婚礼”科研项目二：,挑战自我,植物体细胞杂交技术,动物细胞融合技术,植物体细胞杂交过程示意图,同核体,同

2、核体,异核体（杂交细胞）,人工诱导,还有3个3个以上细胞的融合-,A,A,B,B,B,A,“太空婚礼”植物科研项目计划书,细胞膜流动性、细胞全能性,酶解法去壁,物理法化学法,克服远缘杂交障碍获得具优良性状的杂种植株,请同学们阅读课本P52动物细胞融合内容 问题：1、什么是动物细胞融合？2、它相当于植物体细胞杂交过 程的哪一步？3、它们的过程、基本原理、诱 导融合方法和意义是否相同？,鼠B淋巴细胞,鼠骨髓瘤细胞,人工诱导,1.1动物细胞融合的概念,杂交瘤细胞,动物细胞融合（细胞杂交）是指（在一定的条件下）两个或多个细胞结合形成一个细胞（该单核细胞称为杂交细胞）的过程。,问题：1、它相当于植物体细

3、胞杂交过 程的哪一步？2、它们的过程、基本原理、诱 导融合方法和意义是否相同？,1.2动物细胞融合过程、诱导方法与原理,为什么灭活的病毒能作诱导剂？,灭活丧失感染性,保留促融合活性,过 程,1.2动物细胞融合过程、诱导方法与原理,原理：细胞膜的流动性,1.3动物细胞融合技术的意义和应用,问题：抗体由什么细胞产生？其化学本质是什么？与抗原作用的特点？主要分布在哪里？,1、抗体,一个天然抗原物质可有多种和多个决定簇。教材中所说的抗原分子刺激淋巴细胞，说的也就是抗原决定簇刺激B淋巴细胞，使其分裂分化出特异性的浆细胞，分泌特异性抗体。,2、抗体的传统生产方法,从血清中分离抗体,该法制备抗体的特点：产量

4、低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。,多种浆细胞,动物体内,多种抗体,抗原,读下面一段文字资料，找出单克隆抗体的概念,发现：在动物发生免疫反应的过程中，体内的B细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个B细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用单个B细胞进行无性繁殖，即克隆。,3、单克隆抗体的概念,单:单个细胞 克隆:无性繁殖,单克隆抗体:单个细胞克隆产生的化学 性质单一特异性强的抗体,提示1：对B细胞进行细胞培养可行吗？,提示2：所学哪种细胞可以无限增殖？,问题：如何大量生产单克隆抗体？,一个效应B细胞（只分泌一种特异性抗体）,杂交瘤 细胞,4、单

5、克隆抗体的制备方案,动物细胞融合技术,单克隆 抗体,既能产生特异性抗体，又能大量繁殖的细胞,一个骨髓瘤细胞（能无限增殖）,+,制 备 单 克 隆 抗 体,1975年英国科学家米尔斯坦和柯勒的实验,5、单克隆抗体制备过程步骤,注射抗原,效应B细胞,骨髓瘤细胞,融合,多种杂交细胞,选择性培养基 筛选1,抗原-抗体杂交法,克隆化,单克隆抗体,筛选2（有限稀释）,1.注射抗原的目的是什么？,注射抗原,效应B细胞,骨髓瘤细胞,融合,多种杂交细胞,选择性培养基 筛选1,抗原-抗体杂交法,克隆化,单克隆抗体,筛选2（有限稀释）,2.诱导细胞融合的手段有哪些？,注射抗原,效应B细胞,骨髓瘤细胞,融合,多种杂交

6、细胞,选择性培养基 筛选1,抗原-抗体杂交法,克隆化,单克隆抗体,筛选2（有限稀释）,3.若细胞两两融合后，有几种融合情况？,注射抗原,效应B细胞,骨髓瘤细胞,融合,多种杂交细胞,选择性培养基 筛选1,抗原-抗体杂交法,克隆化,单克隆抗体,筛选2（有限稀释）,4.第一次筛选出的杂交瘤细胞为何需进行克隆化培养和专一抗体检测？,5.实际操作中如何经过两次筛选获得能产生特异性抗体的杂交瘤细胞？,效应B细胞,B淋巴细胞,注射抗原,骨髓瘤细胞,融合,B-B细胞,杂交瘤细胞,瘤-瘤细胞,选择性培养基 筛选1,多种杂交瘤细胞,符合要求的杂交瘤细胞,抗原-抗体杂交法,筛选2（有限稀释）幻灯片 34,克隆化,体

7、外培养,小鼠腹腔内增殖,单克隆抗体,克隆单个杂交瘤细胞，可制备抗一种抗原决定簇的特异单克隆抗体。,克隆,7、单克隆抗体的突出优点：,特异性强、灵敏度高、纯度高、产量大、容易大规模生产,6、原理：,细胞膜的流动性、细胞增殖,8、单克隆抗体的应用,诊断试剂最广泛应用准确、高效、简易、快速,运载药物(“生物导弹”单抗导向，药物为弹头),治疗疾病,动物细胞融合与单克隆抗体,1、动物细胞融合：（1）概念：（2）诱导剂：（3）主要用途：（4）意义：,2、单克隆抗体：（1）制备（2）特点（3）应用,现在你能主持“太空婚礼”动物科研项目了吗？,膜的流动性、细胞增殖,物理、化学、生物法,单克隆抗体的制备,小鼠免

8、疫处理、细胞分散,有助于疾病的诊断、治疗、预防,下图是单克隆抗体制备流程阶段示意图,思考训练：,（1）（）技术是单克隆抗体技术的基础。（2）在图中HAT培养上，未有融合的（）和融合的（）都会死亡，只有融合的杂种细胞才能生长。,动物细胞培养、动物细胞融合,亲本细胞,具有同种细胞核的细胞,（3）单克隆抗体与常规的血清抗体 相比，最主要的优点是：（）,特异性强、灵敏度高，可大量制备,（4）选出的杂交瘤细胞既具备骨髓瘤细胞的迅速（）特点，又具备淋巴细胞的（）特点，经过选择性培养的杂交瘤细胞，还需进行（）和（），经多次筛选，就可获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞。最后将杂交瘤细胞在体外条件下做大规模培养

9、，或小鼠腹腔内增殖，从（）或（）中，就可以提取出大量的单克隆抗体了。,大量增殖,分泌专一抗体,克隆化培养,抗体检测,细胞培养液,小鼠的腹水,（5）淋巴细胞是由动物（）中的（）细胞分化、发育而来。（6）杂交瘤细胞从培养基中吸收葡萄糖、氨基酸的方式（）,骨髓,造血干细胞,主动运输,课后作业,通过报刊、杂志、互联网或其他媒体搜集资料，了解细胞融合技术与单克隆抗体的新进展，就自己感兴趣的领域，自定选题，写一篇综述报告。参考选题：1、1984年诺贝尔生理学或医学奖 2、单克隆抗体的种类；3、单克隆抗体与疾病诊断；4、生物导弹；,单克隆抗体的制备,看书上53页图，讨论：单抗制备过程分哪几步？请用箭头把代表单克隆抗体制备过程步骤图解的字母按正确顺序连接起来。顺序是,有限稀释法 稀释多次,稀释,将培养皿孔内的上清液取出，检测抗体。常用的方法有：酶联免疫吸附试验和免疫荧光测定。,谢谢!,