DNA重组技术的基本工具ppt课件课堂.ppt

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1、1,2,问题探讨：,苏云金芽孢杆菌含有一,种可以合成毒蛋白的基因。,让细菌的毒蛋白基因在,棉花细胞中表达，可培育出,抵抗棉铃虫害的抗虫棉。,苏云金芽孢杆菌,毒蛋白,普通棉花,抗虫棉,3,DNA,外源基因,G C A,T,T G C,A,A C G,T,C G T,A,G C A,T,T G C,A,4,限制酶的识别特点,?,以中轴线两侧的双链,DNA,上碱基呈反向对称，重复排,列,?,?,如：,GAA,TTC,CCC,GGG,?,CTT,AAG,GGG,CCC,5,G A A T T C,C T T A A G,C T T A A,G,A A T T C,G,粘性末端,特定的,核苷酸,序列,(

2、6),特定的切,点,EcoRI,限制酶,中轴线,6,不,同,的,限,制,酶,所,形,成,的,黏,性,末,端,不,同,C C C,G G G,C C C,G G G,特定的核苷,酸序列,(6),特定的切,点,C C C,G G G,G G G,C C C,平末端,平末端,Smal,酶,7,黏性末端和平末端,8,DNA,分子,切割,DNA,分子实质是,断开两个核苷酸之间的,磷酸二酯键,。,9,?,要想获得某个特定性状的基因必须要用限制,酶切几个切口？可产生几个黏性,(,平,),末端？,?,如果把两种来源不同的,DNA,用同一种限制酶,来切割，会怎样呢？,思考,?,10,DNA,外源基因,G C A

3、,T,T G C,A,A C G,T,C G T,A,G C A,T,T G C,A,11,?,要想获得某个特定性状的基因必须要用限制,酶切几个切口？可产生几个黏性,(,平,),末端？,要切两个切口，产生四个黏性,(,平,),末端。,?,如果把两种来源不同的,DNA,用同一种限制酶,来切割，会怎样呢？,会产生,相同的黏性,(,平,),末端,，然后让两,者的黏性,(,平,),末端,黏合,起来，就似乎可以合,成重组的,DNA,分子了。,思考,?,12,13,可把黏性末端之间的,缝隙“缝合”,起来，,E,coli DNA,连接酶,或,T,4,DNA,连接酶,即,恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸

4、二酯键,14,可把黏性末端之间的,缝隙“缝合”,起来，,E,coli DNA,连接酶,或,T,4,DNA,连接酶,即,恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键,15,类型：,类型,E,coli,DNA,连接酶,T,4,DNA,连接酶,来源,功能,大肠杆菌,T,4,噬菌体,恢复,磷酸,二酯键,只能连接,黏性末端,能连接,黏性末端,和,平末端,(,效率较低,),相同点,差别,（二）“分子缝合针”,DNA,连接,酶,16,DNA,聚合酶,DNA,连接酶,区别,1,区别,2,相同点,寻根问底,?,DNA,连接酶与,DNA,聚合酶是一回事吗,?,为什么,?,1),只能将,单个核苷酸,连,接到已有的核

5、酸片段上，,形成磷酸二酯键,形成,磷酸二酯键,1),在,两个,DNA,片段之,间,形成磷酸二酯键,2),以,一条,DNA,链为模板,，,将,单个核苷酸,通过磷酸,二酯键连接成一条互补,的,DNA,链,2),将,DNA,双链上的,两,个缺口同时连接,起来，,不需要模板,Go on,17,三、“分子运输车”,基因进入受体细胞的载,体,载体需要的条件：,有,1,多个限制酶切点,对受体细胞无害,导入基因能在受体细胞中复制、表达,有某些标记基因，便于筛选,常用运载体：,细菌的质粒,噬菌体或某些动植物病毒,假如目的基因导入受体细胞后不能复制或不能转,录，转基因生物能有预想的效果吗？,作为分子运输车,载体，

6、如果没有切割位点将,会怎样？,霍乱菌的质粒多个限制酶切点，你会用它来做分,子运输车吗？,目的基因有没有进入受体细胞，如何去发现？,18,?,常用的载体：质粒,能复制并带着,插入的目的基,因一起复制,有切割位点,有标记基因的,存在，可用含,氨苄青霉素的,培养基鉴别,19,A,A,T,T,G,C,C,T,T,A,A,G,磷酸二,酯键,磷酸二,酯键,20,练习,?,在基因工程中，切割运载体和含有目的基因,的,DNA,片段，需使用（,）,A.,同种限制酶,B.,两种限制酶,C.,同种连接酶,D.,两种连接酶,?,基因工程常用的受体细胞有（,）,(1),大肠杆菌,（,2,）枯草杆菌,（,3,）支原体,（

7、,4,）动植物细胞,A.,（,3,）（,4,）,B.,（,1,）（,2,）（,4,）,C.,（,2,）（,3,）（,4,）,D.,（,1,）（,2,）（,3,）,21,不属于质粒被选为基因运载体的理由是,A,、能复制,（,）,B,、有多个限制酶切点,C,、具有标记基因,D,、它是环状,DNA,D,练习,22,1,、下列不适合用于基因工程的运载体,是（,）,A,、质粒,B,、噬菌体,C,、细菌,D,、病毒,选,我,C,2,、下列说法正确的是：（,）,A,、限制酶的切口一定是,GAATTC,碱基序列,B,、质粒是基因工程中唯一的运载体,C,、重组技术所用的工具酶是限制酶、,连接酶、运载体,D,、利用运载体在宿主细胞内对目的基因,进行大量复制的过程可称为“克隆”,选,我,D,审题,23,1.1 DNA,重组技术的基本工具,