液相色谱的新进展—超高效液相色谱课件.ppt
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1、液相色谱新进展 超高效液相色谱,Waters公司的UPLC:Ultra Performance Liquid Chromatography(超高效液相色谱)Agilent公司的RRLC:Rapid Resolution Liquid Chromatography(快速高分离度液相色谱),一、定义:,用细粒径填料(sub-2m)、细内径柱子获得柱效高达(100,000-300,000/m)的液相色谱技术,简称超高效液相色谱,为什么关注小颗粒色谱填料?,根据Van Deemter方程H=A+B/v+Cv,颗粒度越小,HETP越低,柱效越高,分离度越好对于小颗粒,通过高流速获得高分离速度对于小颗粒,
2、提高流速时HETP不会提高提高分离速度,二、基本原理,节约时间节约溶剂超高灵敏度超高分离度缺点:高压力 Agilent RRLC 约450bar Waters UPLC 约700bar,优点:,三、优缺点:,西洋参成分的分离比对,HPLC,UPLC,4.6250mm,5m,2.150mm,1.7m,1、提高分离速度,小颗粒填料的速度优势 分离度RSL/dp,即保持L/dp,同比缩短柱长,以提高分离速度 提高流速小颗粒填料的保持柱效,不降低分离度提高速度的辅助手段温度,不同色谱柱和温度的分离速度比对,2、提高分离度和灵敏度,提高L/dp(dp变小)提高柱效提高分离度对于4.6150mm,5m色谱
3、柱,L/dp 30对于4.6150mm,1.8m色谱柱,L/dp 83.3-改善分离度,保持分离速度对于4.6100mm,1.8m色谱柱,L/dp 55.6-改善分离度,提高速度,分离度:颗粒对药物杂质分离的影响,改善分离度和灵敏度,四、应用实例:西洋参的液相色谱分析(Agilent液相色谱仪),1、分离目标化合物:根据中国药典(2005年版)确定分离人参皂苷Rg1、Re与Rb1,结构如下:,2、药典色谱条件样品:西洋参提取液仪器:Agilent 1100高效液相色谱系统流动相:以乙腈为流动相A,以0.1磷酸为流动相B,按下表进行梯度洗脱,四、应用实例:西洋参的液相色谱分析(Agilent液相
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