动物检疫检验-第8章禽疫病的检疫检验课件.ppt
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1、第8章 禽疫病的检疫检验,本章导读,本章主要就家禽疫病的检疫检验做了相关的阐述,内容包括禽主要疫病的检疫,常见疫病的鉴别检疫要点以及实训指导等。通过本章的学习,要求掌握每一种常见疫病的临场检疫要点,实验室检疫的主要方法以及检出检疫对象时的检疫处理,通过实训练习,学会家禽疫病的检疫技术,具备独立进行家禽疫病临诊和实验室检疫的能力,8.1 禽主要疫病的检疫,8.1.1 禽流行性感冒,禽流行性感冒(简称禽流感)又称真性鸡瘟,欧洲鸡瘟,是由A型流感病毒引起禽类的一种急性、高度致死性的传染病。其特征是发热、头面水肿、呼吸系统症状和败血症。,1)临诊检疫要点,(1)家禽中鸡和火鸡最易感,其它家禽、野鸟、野
2、生水禽、迁涉鸟均有较高的易感性。发病急、传播快、流行范围广,常呈地方性或大面积流行,其中高致病性禽流感的发病率与死亡率均高可达100,一年四季均可流行,但冬春两季多发。(2)潜伏期35天,强毒型发病迅速,死亡率高,从个别发病、死亡到鸡群中50出现症状,仅需23天时间。病鸡采食减少乃至废绝,精神沉郁,垂头缩颈,眼结膜充血,流泪,鸡冠发绀,头部水肿,有的趾爪鳞片发紫或有紫红色出血斑,拉黄绿色稀粪,呼吸罗音,咳嗽,产蛋量大量下降,一般2050不等,严重者绝产。温和型临床症状较轻,大部分精神、食欲正常,主要表现为产蛋量的大幅度下降,一般经710天产蛋率由90以上,下降到10不等,产蛋量下降的同时,软皮
3、蛋、白皮蛋、沙壳蛋,畸型蛋明显增多。(3)剖检各黏膜、浆膜及内脏有出血性变化。喉头气管充血严重,大部分腺胃乳头出血、腺胃与肌胃交界处及肌胃角质层下出血,十二脂肠、回肠、直肠、泄殖腔出血。盲肠扁桃体肿胀出血,肝、脾、肾、心脏常见有灰黄色的变性坏死性病灶,卵泡充血,有的变形成菜花状并有坏死,输卵管弹性、韧性降低,充血、出血、水肿乃至坏死,内有白色脓性分泌物或干酪样物。,2)实验检疫的主要方法,(1)病原检查 用无菌棉拭子涂抹气管或泄殖腔分泌物。棉拭子放在最终浓度1000IU青霉互、10mg链霉素、20mg制霉菌素的无菌培养液13ml中。在病毒血症期,可采血液,死后采心血、肝、脾等病料。病料研磨作1
4、:10加入生理盐水或培养液制成悬液再加入抗生素,置4下处理46h,低速离心,收集上清液低温保存备用。鸡胚接种 取处理过的病料0.1ml,以尿囊腔途径接种911日龄的SPF鸡胚,继续孵化,24h内死胚弃去,收24h以上至96h以内死胚的尿囊液羊水作血凝试验,以鉴定病毒。如果病料中有病毒存在,初次接种后的尿囊液一般就能产生血凝作用。如未测到血凝活性,须将收集的尿囊液盲传23代,并重复以上血凝实验,如仍为阴性,即判定阴性结果。,2)实验检疫的主要方法,(2)血清学检查 血凝试验(HA)和血凝抑制试验(HI)证实鸡鸡胚液有HA活性以后,首先应排除新城疫病毒。取一滴1:10稀释的正常鸡血清(最好是SPF
5、鸡血清)和一滴新城疫病毒抗血清,分别滴在一玻璃或瓷板上,各加一滴有HA活性的鸡胚液,混匀后各滴加5鸡红细胞悬液一滴,若两份血清都出现HA活性,则表明鸡胚液中不含有新城疫病毒。若新城疫病毒抗血清抑制HA活性,则证明鸡胚中存在新城疫病毒。在排除新城疫病毒以后,则需进一步确定其为A型流感病毒,或为其它禽副粘病毒或为具有血凝活性的细菌。测定A型流感病毒的简单而又可靠的方法,是用型特异性抗血清进行琼脂扩散试验(AGP)。若需鉴定毒株或亚型,则应使用一套特异性抗血清来鉴定病毒囊膜表面蛋白抗原(H和N)类型,或将病毒送往有关实验室 作流感病毒的常规定型。琼指扩散试验(AGP)AGP是应用已知的阳性和阴性血清
6、与待检抗原和已知阳性抗原作双向扩散试验,常温下24小时内在已知的阳性抗原和阳性血清之间应出现沉淀线,到48小时沉淀线更为清晰。若待检抗原与阳性血清间出现沉淀线,并且该沉淀线与邻近的阳性抗原和抗血清间的沉淀线相连,即可判定待检抗原为A型流感病毒。病毒中和试验 取910日龄鸡胚接种后37孵育34天,鸡胚死亡出现HA活性或两者同时出现,表示鸡胚感染流感病毒,(3)检疫后处理,确检禽流感时,立即上报疫情并封锁现场,对病禽和同群者以及方圆3Km的家禽以不放血方式扑杀,销毁尸体,对所有被污染的环境和器具物品进行彻底消毒。对疫期封锁,严禁家禽及其产品进出。经23周周边无新疫情发生,通过全面的终末消毒后方可解
7、除封锁。,8.1.2 鸡新城疫,鸡新城疫俗称鸡瘟、亚洲鸡瘟,是由新城疫病毒引起的鸡和火鸡的一种急性、高度接触性传染病,其特征是呼吸困难、下痢、神经机能紊乱、粘膜和浆膜出血。,1)临诊检疫要点,(1)鸡、火鸡、野鸡、鸽、鹌鹑均易感,其中鸡敏感性最高,尤其以幼龄鸡更易感。一年四季均可发生,但春、秋、冬多发。发病急、传播快,发病率、死亡率都很高,呈暴发或地方性流行。(2)潜伏期35天,最急性型未见症状即快速死亡。急性型体温升高、缩颈垂翅、闭眼、羽毛蓬乱、不愿走动、冠髯暗红或发紫。口腔流出大量粘液,呼吸困难,咳嗽,怪叫,排黄绿、黄白色稀粪。病程35d,5d以上不死者转变为慢性,神经症状明显,翅腿麻痹,
8、头颈后仰或向一侧扭转,或后退倒地,或伏地旋转,受刺激时发作加剧。非典型性新城疫,往往发生于免疫鸡群中,当有强毒感染时,仍可发生新城疫,但其发病率、死亡率均较低。主要表现为产蛋量不同程度的下降,蛋壳褪色,变薄、变脆、软壳蛋、畸形蛋,有不同程度的呼吸道症状,拉黄绿色稀粪。,1)临诊检疫要点,(3)病变主要是败血症变化。全身浆膜、粘膜出血,尤其以消化道、呼吸道最明显。腺胃乳头和肌胃角质层下出血,小肠和泄殖腔严重出血,十二脂肠有时有岛屿状凸出于粘膜表面的,麸皮样的坏死、溃疡灶。盲肠扁桃体肿大、出血、坏死。口腔、喉头和气管有多量粘液,喉头充血、出血,气管环状出血。产蛋鸡的卵泡和输卵管显著充血,有的卵泡变
9、形,常有卵黄性腹膜炎。非典型性新城疫仅见粘膜卡他性炎症,喉头和气管粘膜充血,腺胃乳头出血少见,十二指肠、直肠粘膜、泄殖腔和盲肠扁桃体出血多见。,鸡新城疫 神经症状,头扭向一侧,鸡新城疫 盲肠扁桃体肿胀、出血,鸡新城疫 腺胃乳头出血,2)实验检疫的主要方法,(1)病原检查 采取病鸡的呼吸道分泌物或脑、脾、肺组织,研磨后加10倍生理盐水制成悬液,再加双抗处理,离心沉淀,吸取上清液0.10.2ml,接种于911日龄鸡胚尿囊腔,于温箱内孵化,每天上下午各照蛋一次,连续观察5日。取2448小时内死亡鸡胚尿囊液作血凝抑制试验以鉴定。再仔细观察病死鸡胚病变,一般可见胚体全身充血、出血,以头、足处皮肤最为严重
10、。(2)血清学试验 鉴定新城疫病毒有多种血清学方法,最常用的是红细胞凝集试验和红细胞凝集抑制试验,而这两种试验的方法和判定标准又有多种,其中应用较多的是微量法。凝集抵制价在4倍以内为阴性,8倍为可疑,16倍以上为阳性。除此以外,用鸡胚作中和试验也是本病诊断的可靠方法。常用已知的抗体血清和被检病毒等量混合作用;然后接种鸡胚,并设对照组。如果对照给死亡(只接种病料)而试验组健活,则可判为新城疫。,3)检疫处理,检疫发现鸡新城疫时,应立即封锁、隔离。病鸡扑杀,尸体深埋或化制;污染物彻底消毒,垃圾、垫草、排泄物焚烧或深埋。可疑和健康鸡紧急预防接种。最后一例病鸡处理2周后再无新病例出现,通过全面严格的终
11、末消毒后方可解除封锁。,8.1.3 鸡马立克氏病,鸡马立克氏病是由鸡马立克氏病病毒引起的一种淋巴细胞增生性的肿瘤性传染病。特征是外周神经,性腺、虹膜、各内脏、肌肉和皮肤等发生淋巴样增生、浸润,形成肿瘤性病灶和肢麻痹。,1)临诊检疫要点,(1)主要侵害鸡,其他禽类较少感染,1日龄雏鸡最易感,随年龄的增长易感性降低,母鸡较公鸡易感,多在25月龄间发病。有高度的接触传染性,病死率高。多为散发或呈地方性流行。(2)潜伏期长,几周到几个月。发病后表现多型性。神经型(古典型)主要侵害外周神经,由于侵害的部位不同,症状亦不同。以侵害坐骨神经最常见,引起一腿或两腿由不全麻痹到麻痹,呈现特征性的一肢向前一肢向后
12、的“劈叉”姿势;臂神经受侵害时,则翅膀下垂;颈部神经受侵害时出现头颈下垂和歪斜;当迷走神经受侵害时,可见嗉囊扩张和喘息;当腹部神经受侵害时则常有下痢。内脏型多为急性经过,主要表现鸡冠苍白、萎缩、消瘦、下痢、体重迅速减轻、病程短、突然死亡、病死率极高。眼型虹膜灰白色,瞳孔变小,边缘不整齐呈锯齿状,视力减弱或丧失。皮肤型多在颈、背、翅、腿和尾部形成大小不等的结节及瘤状物。(3)剖检神经型的多见一侧坐骨神经、臂神经发炎、水肿、比正常增粗23倍,横纹消失。内脏型主要表现为各内脏器官(性腺、肝、脾、心、肺、腺胃、肠系膜等)中形成灰白色,质地坚硬的淋巴细胞性肿瘤,或使病变脏器弥漫性肿大,色泽变淡。,鸡马立
13、克氏病 神经症状“劈叉”姿势,鸡马立克氏病 一侧坐骨神经水肿、增粗,鸡马立克氏病 肝脏肿瘤,2)实验检疫的主要方法,主要包括病毒分离、琼脂扩散、免疫荧光和间接血凝试验等。(1)病毒分离与鉴定 用肿瘤细胞、肾上皮细胞、脾和外周血液中的白细胞作病毒分离的材料。接种于1日龄或孵出后的第1周内雏鸡,严格隔离饲养观察,接种后经1821天,对接种鸡进行有关感染迹象的检查。感染的标志是神经或脏器中有肉眼或显微镜下的马立克氏病病变;在细胞培养物中分离出病毒;在羽毛囊中出现特异性抗原或病毒粒子(荧光抗体试验阳性);或者在血液或血浆中的抗体检测试验(琼脂扩散)呈阳性结果。(2)血清血检查 感染MDV的鸡产生的抗体
14、可终生存在,所以可用血清学方法检测血清中的抗体。琼脂凝胶沉淀试验(AGP)AGP试验中,血清抗体和MD抗原在琼脂中发生反应。,2)实验检疫的主要方法,免疫荧光(IF)试验 如果有已知抗原,可用免疫荧光(IF)试验来检测抗体。反之,若抗体已知,也可检测抗原。酶联免疫吸附试验(ELISA)病毒中和试验 病毒中和试验用于检测感染鸡血清或血浆中的中和抗体。试验应用滴度约103PFU/ml以SPGA-EDTA缓冲液稀释的细胞游离性病毒悬液进行。1份2倍或10倍稀释的血清或血浆和4份病毒悬液混合,37或室温孵育30分钟。试验应设已知阳性和阴性血清对照。在2个24小时初代CK细胞培养皿内接种0.2ml血清病
15、毒混合物,吸附30分钟,然后加入新鲜培养液,隔日更换一次。接种后68天计数空斑。血清滴度是引起病毒滴度至少降低50(与阴性轿对照)的血清稀释率的对数。,3)检疫处理,检疫中发现鸡马立克氏病时,应及时分群隔离,彻底淘汰病鸡、阳性鸡和可疑鸡,做好清洁、消毒和饲养管理。,8.1.4 鸡产蛋下降综合症,产蛋下降综合症是由禽腺病毒引起的鸡的一种病毒性传染病。其特征主要表现为鸡群产蛋量骤然下降,同时出现大量软壳蛋、畸形蛋、白皮蛋和沙皮蛋。,1)临诊检疫要点,(1)主要感染鸡,各品种鸡都易感,产褐壳蛋的鸡敏感性最高。主要侵害2532周龄鸡,35周龄以上较少发病,幼龄鸡感染后不表现病状,只有在性成熟开始产蛋后
16、才表现发病。水平传播较慢,且呈间断性。(2)主要表现为无明显原因产蛋量骤然下降,一般减少2030,严重者可达50,同时蛋壳粗糙,壳色变浅,大量薄壳蛋、软壳蛋、无壳蛋、畸形蛋、蛋质下降。(3)缺乏特征性病变。仅见生殖器官的炎症,如子宫及输卵管粘膜水肿,部分卵泡变性,卵黄松散,有的卵巢或输卵管萎缩。,2)实验检疫主要方法,(1)病原分离和鉴定 取病鸡的输卵管、子宫、卵巢等病料,经无菌处理后,以尿囊腔接种1012日龄鸭胚。无菌收72120h死亡和存活的鸭胚尿囊液,测其血凝活性,如为阳性,即可确检。如为阴性,盲目传3代,仍为阴性者,判为阴性。(2)血清学试验 血凝抑制试验(HIT)HIT是诊断EDS7
17、6最常用的方法,多采用微量法。试验所用抗原以鸭胚或细胞培养制备,采用4个血凝单位(4HAU)的抗原,以PH7.2PBS配制1(0.8或0.5)鸡红细胞悬液作指示系统,按微量常规方法进行。琼脂扩散试验(AGPT)该法可用于检测EDS76病毒抗原或抗体,但敏感性较HIT低。病毒中和试验(VNT)EDS76病毒能致CPE,并产生核内包涵体,这种作用可被特异性抗血清所中和,因此本法也用于检验EDS76病毒抗原或血清抗体,而且其敏感性强,特异性高。酶联免疫吸附试验(ELISA)至今国内外学者已建立了常规ELISA,竞争性ELISA和斑点ELISA(Dot-ELISA)用于EDS76的诊断。,3)检疫后处
18、理,对检出的病鸡应及时淘汰、急宰,剔除病变部分的胴体及内脏,经高热处理后利用,对同群其他鸡紧急免疫,并做全面彻底消毒。,8.1.5 鸡传染性支气管炎,鸡传染性支气管炎是由鸡传染性支气管炎病毒引起的鸡的一种急性、高度接触性传染病。其特征是病鸡咳嗽、喷嚏和气管发生罗音。在雏鸡还可出现流鼻涕,蛋鸡产蛋量减少和质量恶劣,肾病变型肾肿大,有尿酸盐沉积。,1)临诊检疫要点,(1)仅发生于鸡,各种年龄的鸡都可发病,但以雏鸡最为严重,发病率、死亡率均很高。一年四季均可发生,但冬季到早春期间多发,传播迅速,一旦发病,迅速蔓延全群。(2)潜伏期36h或更长一些。雏鸡看不到前驱症状而突然出现呼吸道症状,并迅速波及全
19、群。病鸡伸颈张口呼吸,喷嚏,气管罗音,精神不振,羽毛松乱,翅下垂。产蛋鸡产蛋突然下降,出现畸形蛋、薄壳蛋、软壳蛋、蛋清稀薄如水样。肾型传支除轻微呼吸道症状外,还表现为白色米汤样稀粪,鸡爪干瘪,机体严重脱水。(3)剖检可见气管、支气管、鼻腔中有浆液性、卡他性或士酪性分泌物,气囊浑浊或含有黄白色纤维素性渗出物;产蛋鸡卵泡充血、变形、输卵管水肿,有的发育异常或萎缩。肾型病例肾脏肿大苍白,输尿管变粗,内有大量白色尿酸盐沉积,直肠后段沉积大量白色粪便。,鸡传染性支气管炎 畸形蛋、薄壳蛋、蛋色发白,鸡传染性支气管炎 输卵管萎缩、水肿,肾型传支 肾脏肿大苍白、内含大量尿酸盐,2)实验检疫主要方法,(1)病毒
20、分离 无菌取急性期病鸡气管渗出物和肺组织,制成悬浮液,双抗处理后,经尿囊腔接种于1011日龄的鸡胚,初代接种的鸡胚,孵化至19d,可使少数鸡胚发育受阻,而多数鸡胚能存活,这是本病毒的特征。若在鸡胚中连续传代几次,则可使鸡呈现规律性死亡,并出现传染性支气管炎的典型病变。收集尿囊液再经气管内接种易感鸡,如有本病毒存在,则被接种的鸡在1836h后可出现病状,发生气管罗音。也可将尿囊液经1胰蛋白酶37作用4h,再作血凝及血凝抑制试验进行初步鉴定。,2)实验检疫主要方法,(2)血清学检验 中和试验 中和试验是鉴定本病毒较为常用的方法,用已知的抗传染性支气管炎血清与新分离的被检毒株在911日龄鸡胚上进行中
21、和试验。出现中和反应即可证实其同一性,否则就说明是不同血清型的传染性支气管炎病毒或不是传染性支气管炎病毒。荧光抗体试验 本法常用于快速检测急性病鸡气管涂片中的传染性支气管炎病毒。在荧光显微镜下检查,如发现特异性荧光,即可诊断为本病。免疫琼扩试验 用已知病毒接种鸡胚,取受感染鸡胚的尿囊膜制备琼扩抗原。采集病鸡发病7天后的血清,按常规做琼脂扩散试验。出现沉淀线(同时要有阴性对照)即可判为本病。,8.1.6 鸡传染性喉气管炎,鸡传染性喉气管炎是由传染性喉气管炎病毒引起的鸡的一种急性、高度接触性呼吸道传染病,其特征是呼吸困难、咳嗽和咳出含血的分泌物、喉头和气管粘膜肿胀、出血和糜烂。,1)临诊检疫要点,
22、(1)主要侵害鸡,不同年龄的鸡均易感,但以成年鸡多发。一年四季均可发生,秋末冬初多发。在易感鸡群内传播迅速,感染率可达90,病死率1020。(2)潜伏期612d,病鸡中以成年鸡症状最为特征。早期症状是鼻孔有分泌物,呼吸湿性罗音、继而咳嗽和喘气。严重病例呈现明显的呼吸困难,咳出带血的分泌物,有的蹲伏在地,伸颈举头喘息,鸡冠发紫。检查口腔时可见喉头有黄白色附着物,多因窒息而死亡。温和性病例,则生长发育不良,产蛋下降,有轻微的咳嗽和罗音、流泪、结膜炎、有的眶下窦肿胀,发病率低,多在1014d内恢复。(3)主要病变为喉头和气管粘膜充血和出血。喉头及气管粘膜肿胀、潮红、有针尖状出血点,并附着粘液性分泌物
23、,有时这种分泌物呈干酪样假膜,可能将气管完全堵塞。炎症也可扩散至支气管、肺和气囊或眶下窦,比较缓和的病例仅见结膜和窦内上皮水肿和充血。,鸡传染性喉气管炎 病鸡呼吸困难,鸡传染性喉气管炎 喉头、气管黏膜充血、出血,2)实验检疫的主要方法,(1)病毒的分离培养 采取病鸡的喉、气管粘液或其组织悬液经抗菌素处理后,接种于911日龄鸡胚绒毛尿囊膜,接种后35天,绒毛尿囊膜发生水肿并形成直径约45mm、边缘隆起、中心低陷的灰白色痘疱样坏死灶。(2)包涵体检查 在疾病的早期,取病鸡的喉和气管粘膜上皮或有灰白色坏死灶的绒毛尿囊膜做包涵体检查,可见细胞核内包涵体。(3)血清学检查 琼脂扩散试验(AGDT)气管抗
24、原来源于死于ILT或出现症状后1周内扑杀的鸡,即以喉头、气管和肺外支气管壁上收集的渗出物,若渗出物较干,可用生理盐水稀释。将制备好的抗原与特异性抗体,加入琼脂板孔中。若气管渗出物中的抗原浓度适当,则在抗原和抗体孔之间于24小时内出现一条或多条沉淀线。,2)实验检疫的主要方法,病毒中和试验(VNT)中和试验(NT)可检测ILTV抗原或抗体。将未经稀释的血清分别与10倍稀释的病毒液混匀,置室温1小时,然后接种912日龄鸡胚的CAM或CEK细胞培养,以此法可检出自然或人工感染鸡血清中的抗体。荧光抗体试验(FAT)取发病后28天病鸡气管涂片或切片,用异硫氰酸荧光素标记的抗ILT特异性抗体进行直接或间接
25、荧光抗体试验均可检出病毒抗原。在接种ILTV的CEK培养物中,接种后16小时,有些多核细胞的核周区内可见狭窄的荧光带。随着感染的进行,胞浆和胞核内均可见到荧光。酶联免疫吸附试验(ELISA)Adair等(1985)建立了ELISA法,于接种后7天可检出特异性抗体。该方法比病毒中和试验更敏感,是流行病学调查的理想方法。,3)检疫后处理,检疫中发现鸡传染性喉气管炎时,病鸡严格隔离对症治疗,病死鸡剔除病变部分,经高温处理后利用。同群假定健康鸡紧急免疫接种。,8.1.7 病毒性关节炎,鸡病毒性关节炎是由传染性关节炎病毒引起的鸡的一种关节异常性传染病。其特征是肉仔鸡胫跗关节腱鞘肿胀、发炎、跛行。,1)临
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