动物病毒学ppt课件第9章--单链DNA病毒.ppt

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1、第九章 单链DNA(ssDNA)病毒,9.1 细小病毒科（Parvoviridae)9.2 圆环病毒科（Circoviridae),9.1 细小病毒科（Parvoviridae),DNA replication=10-10-10-9RNA transcription=10-5-10-4ssDNA 细小病毒=810-4,病毒的突变速率,细小病毒突变的速率非常大,一、分类,依赖病毒是一种缺陷病毒，只有在腺病毒或疱疹病毒作为辅助病毒存在的情况下才能完成自身的复制,二、细小病毒亚科的特征,无囊膜，呈球形，直径18-26nm，衣壳二十面体对称。基因组为单一分子的线状单股DNA，大小约5kb，大多数病毒的

2、DNA为负股，有些病毒含有少量的正股成份。病毒抵抗力强，绝大多数病毒能耐受65 30min，对脂溶剂有抵抗性。除鹅细小病毒和阿留申病病毒外都有凝集红细胞的性能，尤其对豚鼠和人的O型红细胞。,多数病毒的细胞感染范围较窄，只能在自然易感宿主的相应细胞内增殖。病毒的增殖需要正处于有丝分裂期的细胞的某些机能的辅助，在细胞未长成单层时接种或同步接种（为什么？）。,病毒本身不编码聚合酶，必需利用细胞的DNA聚合酶II合成病毒DNA，形成双链DNA中间体，然后以此为模板转录成mRNA,细小病毒亚科的主要成员及其引起的家畜疾病,四、猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV),1966年Mary

3、和Mahnel在进行猪瘟病毒组织培养时发现，并认为是培养细胞内潜伏感染的病毒，随后相继从一些正常猪肾细胞培养物和感染猪瘟病毒的猪肾细胞中也发现了这种病毒。1969年，Cartwringht从猪流产的胎儿中分离到PPV，首次证明了PPV的致病性我国于1982年由中国兽药监察所分离到该病毒,1.形态和理化学特性病毒外观呈六角形或圆形，无囊膜。直径为20-23nm，病毒体分子量为5.6106D。壳体为二十面体对称，由32个壳粒组成。核酸为线状单股DNA，分子量为1.4106D，G+C含量为48%，大多数病毒的DNA为负股，有些病毒含有少量的正股成份。病毒对热和酸的抵抗力较强，在pH3-9之间稳定。病

4、毒对乙醚、氯仿等脂溶剂有抵抗力。,电镜下PRV与PPV的比较A、PRV B、PPV,A,B,Canine Parvovirus,2.血凝性凝集的红细胞：鼠、豚鼠、恒河猴、鸡、鹅和人的O型红细胞，75以上加热处理后，病毒的血凝效价几乎完全消失，弱酸性到中性的介质适于血凝特性的保持。,猪源cell：原代猪肾、猪睾丸细胞 传代细胞系PK-15、IBRS-2人的某些传代cell系：Hela、Hep-2,3.培养细胞：,接种方式：,同步接种细胞长成单层前接种,病毒的增殖需要正处于有丝分裂期的细胞的某些机能的辅助。,30天以内 胎儿被吸收30-50天 木乃伊60-80天 流产90天以后 死胎或弱仔,4.致

5、病性主要感染初产母猪，并多发生在秋节引起母猪不育、流产、死胎、木乃伊胎，以木乃伊胎多见，死、流产胎儿有脑脊髓炎变化。妊娠母猪不同时期感染PPV，症状有所差别：,PPV引起繁殖障碍的机制PPV对猪繁殖障碍的影响主要是通过两个方面：1.对受精卵细胞的影响：PPV能够顽固地吸附并且穿透受精卵细胞透明层进入卵细胞2.PPV感染导致母猪的黄体萎缩，使之失去正常的功能，造成母猪体内的胎儿处于不利的环境，出现流产、死胎等,5.诊断1、病毒分离鉴定,流、死产胎儿：肾、肺、肝、脑、睾丸、胎盘。感染仔猪：肠系膜淋巴结、肝脏。,2、血清学检查,HA和HI 豚鼠或鸡的红血球中和试验,3、PCR,6.预防灭活苗、弱毒苗

6、基因工程疫苗：活病毒载体疫苗、核酸疫苗,五、猪博卡病毒(porcine bocavirus,PBoV),2009年瑞典学者利用随机多重置换扩增方法(RMDA)在患PMWS的临床样品中扩增出了长为1879bp的片段该段序列与已知病毒序列相比较，发现其序列与牛细小病毒（BPV)同源性最高系统树进化分析与HBoV、MCV、BPV处于同一进化簇，而未发现与经典PPV株有任何亲缘关系由于缺少全基因组序列，故暂将其命名为猪博卡样病毒(Porcine Boca-like virus,PBoV-like),猪博卡样病毒的进化分析,猪博卡样病毒,经典的猪细小病毒,博卡病毒是一类什么样的病毒？,博卡病毒属于细小病

7、毒科，博卡病毒属,人的博卡病毒最早于2005年发现，主要引起2岁以下小孩的呼吸系统疾病在婴幼儿的呼吸系统疾病中，博卡病毒的感染率和发病率仅次于呼吸道合胞病毒最近的研究还发现：人博卡病毒还引起小孩的腹泻目前已经发现并鉴定了4种类型的人博卡病毒,动物的博卡病毒,牛博卡病毒：主要引起犊牛的呼吸系统疾病，还可引起犊牛的腹泻，给养牛业造成了巨大损失,猪博卡样病毒是不是博卡病毒？,由于以前的研究只是通过部分基因片段和进化系统树分析推测并命名为猪博卡样病毒，没有从全基因组水平上证实，因此猪博卡样病毒是否属于博卡病毒还需要进一步验证。,猪博卡样病毒WH-1株的全基因组序列分析,根据报道的1.8kb 的序列从临

8、床上检测到阳性样品，采用简并引物方法获得了WH-1株的全基因组序列WUH-1株全长4.8kb进化分析证实属于博卡病毒,猪博卡病毒与人博卡病毒有更高的基因组结构相似性,PBoV与PPV基因组的核苷酸同源性为52-53%PBoV与PPV VP2基因的核苷酸同源性为56-57%PBoV与PPV VP2基因的氨基酸同源性仅为21%,从理论上讲，现有的猪细小病毒疫苗不能提供对猪博卡病毒的免疫保护,继猪博卡样病毒被发现后，国内外学者相继发现了另外的3种基因型，暂定为：,猪博卡样病毒存在多个基因型,PoBoV1PoBoV2PoBoV3PoBoV4,主要从血清和肺组织中检测到,主要从消化道和粪便中检测到,Zh

9、ang et al.,2011,最近，华中农业大学从粪便中检测到另外一种新的猪博卡病毒基因型（暂定为PoBoV5)，并测定了全基因组序列因此，猪博卡病毒至少存在5个基因型,猪博卡病毒可能与PCV2存在共感染和协同致病,PCV-2、PBoV、TTV共感染严重PBoV在PMWS中扮演重要角色,分离到猪博卡病毒!,最近，英国学者McKillen 等(2011)报道从粪便中分离到猪博卡病毒，该病毒能在PK-15 细胞中增殖，并出现明显的细胞病变,猪博卡病毒的成功分离将为该病毒的致病性以及防控技术研究奠定良好的基础,9.2 圆环病毒科（Circoviridae),本科于1995年确立，成员包括猪、禽及植

10、物的圆环病毒，是已知最小的动植物病毒。,一、分类 本科目前仅圆环病毒属一个属，成员主要有：,猪圆环病毒（PCV）鸡贫血病毒（CAV）长尾鹦鹉喙羽病病毒（PBFDV）,二、科的特征无囊膜，球形病毒粒子，直径17-22nm，衣壳二十面体对称。病毒颗粒常可见于感染细胞，以珍珠串样排列。基因组为单股环状单链DNA，大小约1.7-2.3kb。宿主范围窄。,三、猪圆环病毒（PCV）1.PCV的发现,1974年，Tischer等发现在PK-15细胞系中存在类似于小RNA病毒的颗粒，当时被认为是一种细胞污染物1982年，Tischer 等通过提取病毒粒子和病毒核酸外切核酸酶S1鉴定核酸类型电镜观察,揭示了这种

11、细胞污染物实际上是一种单链环状DNA病毒，并将其命名为猪圆环病毒（Porcine Circovirus，PCV）。,2.PCV的基本特征,病毒基因组为一环状、闭合单链DNA，病毒粒子无囊膜，呈二十面体对称，直径约17nm。不具血凝活性，PK-15细胞上增殖不引起CPE。,PCV感染细胞的过程,PCV的复制,PCV-1：是PK-15细胞的一种污染物，不引起CPE，感染猪不出现临床症状。PCV-2：感染PK-15细胞，也不引起CPE，与断奶仔猪多系统衰竭综合征（Postweaning multisystemic wasting syndrome,PMWS）有关。,3.PCV的血清型与病原性,PCV

12、有两种血清型：,PCV-1 基因组为1759bp，有7个ORF，编码大于5KD的蛋白质。PCV-2 基因组为1768bp。有11个ORF，预计分别编码大于2KD的蛋白，但目前只有6个得到证实。,PCV-1和PCV-2的比较：,基因组结构相似，都含有两个最大的ORF：ORF1和ORF2。其中ORF1变异很小，同源性为85%。ORF2变异较大，编码病毒的结构蛋白，是病毒衣壳蛋白的主要成分。PCV1和PCV2 ORF2同源性约为65%，这表明PCV的型特异性抗原表位可能在相应的ORF2蛋白中。,PMWS通常发生于5-12周龄的仔猪，发病率和死亡率差异很大。,PMWS的主要特征：,淋巴肿大粘膜苍白体表

13、黄疽偶有腹泻,生长缓慢被毛粗乱消瘦衰弱先天震颤呼吸困难,猪黄疸（左）正常猪（右）,患PMWS的生长猪(消瘦),急性期感染后存活猪，后肢出现不规则的斑块,PMWS猪肠系膜淋巴结肿大,PCV-1感染后不引起临床症状，PCV-2感染猪表现的临床症状难于和其他疾病区分。仅根据临床症状难以诊断。,4.诊断,目前用于该病的实验室诊断方法主要有：病毒的分离电镜观察PCRIIFELISAImmunostainingImmunocytochemisry techniquesIn situ hybridization（ISH）,PCV2病毒灭活疫苗PCV1/PCV2嵌合疫苗杆状病毒表达的PCV2 Cap蛋白灭活疫苗,PCV2是十分难以灭活的病毒，全病毒灭活疫苗必须灭活彻底疫苗的佐剂十分重要,5.PCV2的疫苗,推荐阅读的文献,思考题1、核酸为单链DNA的病毒有哪几个科？各科中常见的病毒主要有哪些？2、用细胞培养细小病毒时应注意什么？为什么？3、博卡病毒主要引起哪些疾病？4、PCV分为哪两个血清型？其中哪一型引起PMWS？,