恶性淋巴瘤免疫组化讲课讲诉课件.ppt

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1、恶性淋巴瘤的免疫组化,一、常用抗体,（一）白细胞,1.CD45,，,CD45RB,（,LCA,）,?,出现于白细胞表面的四、五种高分子量,糖蛋白家族（,180,，,190,，,205,，,220kD,）,?,DAKO,产抗体由二种单抗组成：,2B11(180,，,190,，,205,，,220kD)-CD45,抗体,PD7/26(190,，,205,，,220kD)-CD45RB,抗体,?,正常组织：,标记淋巴细胞。细胞膜表面阳性最强，胞浆,内弱阳性也可见。,巨噬细胞和组织细胞不同程度表达。,多核白细胞弱阳性,浆细胞阴性,非造血细胞阴性,?,肿瘤：,大部分淋巴瘤（,B,和,T,）阳性,浆细胞及

2、大细胞淋巴瘤常阴性,毛细胞阳性,粒细胞性或红细胞源性肿瘤细胞阴性,非造血组织肿瘤，如癌，恶性黑色素瘤，尤,文氏肉瘤阴性,?,可用于脱钙骨髓活检组织，鉴别骨肿瘤,2.CD11A/18,（,LFA-,1,和,）,?,表达于大部分淋巴瘤和白血病,?,很多中等和高度恶性,B,细胞淋巴瘤,LFA-1,的,和,/,或,链可缺失。,3.TdT,?,属核酶，参与,T,细胞受体产生和抗体分化,过程。,?,正常组织：,见于小群成人骨髓淋巴细胞和大部分皮质胸,腺细胞。,偶见于反应性淋巴结和脾,髓质胸腺细胞和正常外周血细胞不表达,?,肿瘤：表达于非成熟淋巴细胞来源肿瘤。,高,TdT,活性见于,:,淋巴母细胞性淋巴瘤,

3、慢性粒细胞性白血病淋巴母细胞危象,大部分急性淋巴母细胞性白血病,4.CD30,?,120kD,跨膜糖蛋白,?,CD30,基因位于第,1,号染色体短臂,36,区，,早先称为,Ki-1,，又名,Ber-H2,?,冰冻切片：,霍奇金细胞（单核）和,R-S,细胞（多核）,结节型淋巴细胞为主型：弱阳性或阴性,其它,HL,：强阳性,大部分间变性大细胞淋巴瘤和所有的淋巴样,丘疹强阳性,一些外周多形,T,细胞淋巴瘤（,HTLV-1,+/-,），,包括血管免疫母细胞型，,Lennert,型和极少,数,B,免疫母细胞淋巴瘤阳性。其他淋巴瘤阴,性。,正常淋巴组织中，小群位于,B,细胞滤泡和生,发中心边缘的大细胞阳性

4、,正常淋巴细胞经菜豆凝集素，,HTLV-I/II,或,EB,病毒刺激后，可与,CD30,抗体反应。,淋巴组织外，胰腺腺泡细胞（,+,），胰腺癌偶,（,+,）。胚胎型癌（,+,）。,其他类型或其他部位的癌，恶性黑色素瘤，,横纹肌肉瘤和平滑肌肉瘤，尤文氏肉瘤（）,?,石蜡切片：,与冰冻切片不同，浆细胞（,+,）,余同冰冻切片,（二）,B,细胞,1.,免疫球蛋白（,Ig,）,（,1,）,免疫球蛋白,轻链,（,2,）,免疫球蛋白,轻链,2.,全,B,抗原,（,1,）,CD20,（,L26,）,?,33kD,非糖基化蛋白,?,外周血和淋巴组织中大多数,B,细胞阳性,?,在淋巴组织，生发中心母细胞和,B,

5、免疫母,细胞强阳性。,?,其他造血细胞阴性。,?,?,?,?,非淋巴组织阴性。,大多数,B,细胞淋巴瘤阳性,极少数,T,细胞淋巴瘤阳性,结节型淋巴细胞为主型霍奇金淋巴瘤,的,R-S,细胞可阳性。,（,2,）,CD19,?,95kD,多肽,?,B,细胞阳性。表达于,B,细胞成熟早期，可,能早于前,B,细胞期，持续见于整个,B,细胞,成熟期，直至终末浆细胞期前不久消失。,?,其他造血细胞和非造血细胞阴性。,?,只能用于冰冻切片。,（,3,）,CD22,?,B,细胞分化早期表达于胞浆，后与,Ig,几乎,同时到达细胞表面,?,B,细胞淋巴瘤和白血病阳性,?,大多数浆细胞肿瘤阴性,（,4,）,CD,W,

6、75,（,LN-1,）,?,?,正常细胞：,表达于,SIg,B,细胞,淋巴结和脾白髓的生发中心,B,细胞强（,+,）,套区,B,细胞，巨噬细胞，脾红髓红细胞阳性,更弱,滤泡外,B,细胞散在阳性,浆细胞阴性,外周血,B,淋巴细胞阳性,阳性上皮细胞：腺上皮（子宫内膜、前列腺、,胃），乳腺导管上皮，肾远曲小管，胰腺导,管，结肠表面上皮，支气管呼吸道纤毛柱状,上皮,肝细胞，甲状腺滤泡，平滑肌和唾腺腺泡细,胞弱阳性。,?,肿瘤细胞：,B,细胞性白血病（,+,）：,B,细胞慢性淋巴细胞,性白血病，毛细胞白血病,B,细胞淋巴瘤：,?,滤泡中心细胞淋巴瘤，特别是大裂和大无裂强（,+,）,?,免疫母细胞型也（,

7、+,）,T,细胞淋巴瘤（）,上皮性肿瘤：,?,乳腺、卵巢和结肠腺癌（,+,）,?,喉鳞癌和睾丸生殖细胞癌局灶（,+,）,?,膀胱移行细胞癌和胃腺癌弱（,+,）,间叶性肿瘤：,?,粘液脂肪肉瘤（,+,）,?,未分化肉瘤（,+,）,（,5,）,CD79(mb,-1),?,与,CD79(B29),共同组成,B,细胞抗原受体,?,出现于,B,细胞成熟早期，从前,B,细胞期到,浆细胞期，为细胞间成分。,?,用于识别,B,细胞种系。,?,前,B,细胞性急性白血病，,B,细胞株，,B,细,胞淋巴瘤以及一些骨髓瘤阳性。,?,粒细胞或,T,细胞株以及,T,细胞瘤阴性。,（,6,）,BLA36,?,36kD,糖蛋

8、白,?,正常细胞：,见于早期和活化,B,细胞，但静止和周围,B,细胞,阴性。,大多数小无裂和大无裂细胞及免疫母细胞膜,强阳性。,少数小裂细胞阳性，,巨噬细胞阴性。,30%,套区淋巴细胞膜弱阳性。,滤泡间区散在中等到大淋巴细胞和免疫母细,胞膜强阳性。,T,细胞、粒细胞和巨噬细胞阴性，但正常肝,的枯否氏细胞不同程度阳性。,?,肿瘤细胞：,霍奇金淋巴瘤的,R-S,细胞和霍奇金细胞阳性。,一些反应性和恶性,B,淋巴细胞阳性。,3.B,细胞亚型抗原,（,1,）,CD10,（,CALLA,，急性淋巴,母细胞性白血病共同抗原）,?,100kD,糖蛋白,?,主要用于儿童白血病和,B,细胞淋巴瘤：,表达于淋巴母

9、细胞性，,Burkitt,和滤泡型淋巴,瘤及慢性粒细胞型白血病,?,也见于肾小球上皮细胞、近端肾小管刷,状缘、乳腺肌上皮细胞、胆小管、中性,粒细胞、小群骨髓细胞、胚胎小肠上皮,和正常纤维母细胞。,（,2,）,CD21,?,C3d,受体，,145kD,糖蛋白,?,也具有,Epstein-Barr,病毒受体的功能,?,冰冻切片：,B,细胞中等（）,滤泡树突状细胞（,FDC,）强（）,?,石蜡切片：,B,细胞弱（）,（）,FDC,强（）,?,正常和增生淋巴结及扁桃体：,滤泡套区,FDC,网状结构疏松，不清晰。,生发中心可见,FDC,网状结构，致密，清晰。,?,非霍奇金淋巴瘤：,滤泡型淋巴瘤（,cb/

10、cc,淋巴瘤）：,FDC,网状,结构呈结节型，致密，清晰。,一些弥漫型淋巴瘤（中心细胞性淋巴瘤）：,FDC,网状结构大小不一，疏松，不清晰。,前,B,细胞淋巴瘤（淋巴母,细胞性淋巴瘤），,Burkitt,淋巴瘤，浆细胞瘤和毛细胞白血病,FDC,。,T,细胞淋巴瘤,FDC,限于外周,T,细胞淋巴瘤的,血管免疫母细胞性淋巴结病（,AILD,）型和,一些多形,T,细胞淋巴瘤。与,B,细胞淋巴瘤不,同，,T,细胞淋巴瘤和,AILD,的,FDC,网仅含少,量,B,细胞。,T,淋巴母细胞性淋巴瘤、,T-CLL,和蕈样霉菌,病,FDC,。,霍奇金淋巴瘤：仅结节型淋巴细胞为主型,FDC,。,FDC,网状结构致

11、密，清晰，几乎,占据整个增大的滤泡。,（,3,）,CD23,?,正常细胞：,套区,B,细胞（）,滤泡树突状细胞亚型（）,?,肿瘤：,小淋巴细胞性淋巴瘤,/,白血病（）,套细胞淋巴瘤（）,（,4,）,CD35,?,C3b,受体，单链糖蛋白，,220kD,?,正常组织：,冰冻切片：,人,B,细胞滤泡中大部分强阳性细胞为滤泡树,突状细胞（,FDC,），套细胞阳性较弱。,肾小球上皮细胞,C3b,受体强阳性,巨噬细胞和组织细胞不同程度阳性,?,石蜡切片（蛋白酶消化后）：,FDC,强阳性，滤泡中心和套区的,FDC,网状结,构明显，前者致密，清晰；后者疏松，不清,晰。,?,肿瘤细胞：,滤泡型淋巴瘤（,cb/

12、cc,）：,FDC,网状结构呈,结节状，致密，清晰,弥漫型淋巴瘤（多数为,cc,）：,FDC,网状结,构疏松，不清晰,前,B,细胞淋巴瘤（淋母），,Burkitt,淋巴瘤，,浆细胞瘤和毛细胞性白血病,FDC,非霍奇金淋巴瘤，,FDC,主要限于血管免疫母,细胞性淋巴结病型,T,细胞淋巴瘤,（,5,）,CD38,?,45kD,糖蛋白,?,正常细胞：,浆细胞、单核细胞、早期淋巴样细胞、,和活化的,T,细胞（）,。,?,肿瘤：,浆细胞肿瘤（）,有些,B,和,T,细胞淋巴瘤（）,，特别前驱,细胞来源者。,（,6,）,VS38c,（浆细胞单抗）,?,64kD,胞浆内抗原。,?,表达于正常和肿瘤性浆细胞。,

13、?,上皮细胞（尤其鳞状上皮）弱阳性,（三）,T,细胞,1.,全,T,抗原,（,1,）,CD2,?,正常细胞：,T,细胞（）,NK,细胞（）,?,肿瘤：,大多数,T,细胞淋巴瘤和白血病（）,少数粒细胞白血病（）,（,2,）,CD3,?,16-28kD,5,条多肽链组成,?,抗体与,T,细胞表达的,CD3,抗原的胞浆内部,分反应。,?,最早见于早期胸腺细胞,在皮质胸腺细胞明显存在于胞浆,至髓质胸腺细胞出现于,T,细胞表面,?,为高度特异,T,细胞标记，除,T,细胞外，仅,表达于小脑蒲肯野细胞。,?,正常组织：,表达于胸腺皮质、髓质和周围淋巴组织的,T,细胞。,?,肿瘤：,表达于大多数,T,细胞肿瘤

14、，但高度恶性,T,细,胞淋巴瘤，如大细胞间变性淋巴瘤偶见,（）。,部分恶性组织细胞增生症阳性,有些霍奇金淋巴瘤阳性,（,3,）,CD5,?,表达于多数,T,细胞淋巴瘤和白血病。,?,也可表达于一些肿瘤性,B,细胞，如,B-CLL,，,B-,小淋巴细胞性淋巴瘤和套细胞淋巴瘤。,?,粒细胞和单核细胞阴性。,（,4,）,CD7,?,正常细胞：,大部分,T,细胞（）,NK,细胞（）,?,肿瘤：,很多,T,细胞淋巴瘤和白血病（）,一些粒细胞白血病（）,淋巴母细胞性肿瘤最佳,T,细胞标记之一,胸腺后,T,细胞恶性肿瘤，尤其在,MF,中常缺失,（,5,）,CD43,（,Leu22,）,?,T,细胞和髓系细胞

15、表达的膜,/,浆抗原,?,正常和肿瘤性,T,细胞阳性,?,正常扁桃体和淋巴结的滤泡间区,T,细胞强,阳性,?,少数,B,细胞白血病和淋巴瘤也可表达,通常为小细胞性，如中心细胞性淋巴瘤,（,6,）,OPD4,?,200kD,，表达于辅助,/,诱导,T,细胞,?,强阳性：,淋巴结,T,区淋巴细胞（膜）,扁桃体,*,分布同,CD4,阳性细胞,?,结节病和结核的类上皮细胞弱阳性,?,抑制,/,细胞毒,T,细胞极少阳性,?,阴性：,非造血细胞,B,细胞,单核细胞,粒细胞,?,肿瘤：,见于,50%T,细胞淋巴瘤,辅助,/,诱导表型,的外周,T,细胞淋巴瘤,少数,B,细胞淋巴瘤阳性,（,7,）,CD45RO

16、,（,UCHL-1,）,?,180kD,，出现于,T,细胞分化早期。,?,正常细胞：,大多数胸腺细胞（）,成熟活化,T,细胞（）,少量静止,T,细胞（,CD4/CD8,亚型）（）,粒单核细胞系，如粒细胞和单核细胞（）,多数正常,B,细胞和,NK,细胞（）,?,肿瘤细胞：,T,细胞淋巴瘤（）,极少,B,细胞淋巴瘤：部分中心母细胞性,和免疫母细胞性淋巴瘤胞浆弱（）,组织细胞性淋巴瘤弱（）,?,鉴别,naive T,细胞和记忆,T,细胞,CD45RO,：记忆,T,细胞,CD45RA,：,naive T,细胞,2.T,细胞亚型抗原,（,1,）,CD1A,?,正常细胞：,皮质胸腺细胞（）,郎罕氏细胞（）

17、,?,肿瘤：,很多胸腺,T,淋巴瘤和白血病（）,郎罕氏细胞组织细胞增生症（）,（,2,）,CD4,?,55kD,，出现于大部分,T,辅助,/,诱导细胞。,?,胸腺皮质：,胸腺细胞复合表达,CD4,，,CD8,，,T6,?,胸腺髓质：,胸腺细胞丢失,T6,，分别表达,CD4,，,CD8,。,?,也见于单核,/,巨噬细胞,?,表达,T4,抗原的肿瘤：,多数皮肤,T,细胞淋巴瘤，包括蕈样霉菌病,HTLV-I,相关成人,T,细胞白血病,/,淋巴瘤,部分,T,细胞急性淋巴母细胞性白血病,/,淋巴瘤,*,在淋巴母细胞性淋巴瘤中，,T8,抗原也可存,在于肿瘤细胞。,（,3,）,CD8,?,33kD,，表达于

18、人抑制,/,细胞毒,T,细胞,?,周围淋巴组织中,CD8,T,细胞（滤泡间区,域）仅占,T,细胞,15-20%,?,骨髓和胃肠道上皮,80%T,细胞是,CD8,?,大部分皮质胸腺细胞和约,30%,髓质胸腺,细胞,CD8,（四）,NK,细胞,1.CD56,（,NCAM-1,）,?,神经细胞粘附分子（,NCAM,）表达于：,大部分神经外胚层源性细胞株，组织和肿瘤,（视神经母细胞瘤、髓母细胞瘤、星形胶质,细胞瘤和神经母细胞瘤）,中胚层源性肿瘤：横纹肌肉瘤,NK,细胞,2.CD57,?,110kD,?,表达于,7-35%,正常外周血淋巴细胞：,NK,细胞,CD8,外周血抑制,/,细胞毒,T,细胞,?,

19、也表达于部分神经组织,?,粒细胞、血小板、红细胞和胸腺细,胞阴性。,3.CD16,（,Leu-11,）,?,正常细胞：,NK,细胞,粒细胞,?,表达于许多,NK,细胞增生性疾病,（五）粒细胞和单核吞噬细胞,1.CD11c,（,Leu-M5,）,?,正常细胞：,表达于粒单核细胞,?,肿瘤：,毛细胞白血病（）,单核细胞样,B,细胞淋巴瘤（）,少数,B-SLL/CLL,（）,少数,T,细胞淋巴瘤（）,一些粒细胞白血病，特别是,M4,和,M5,（）,郎罕氏细胞组织细胞增生症（）,2.CD15,（,Leu-M1,）,?,寡糖,?,外周血：,中性粒细胞阳性,单核细胞弱阳性,淋巴细胞和血小板阴性,?,树突网

20、状细胞阳性,?,单核,/,巨噬细胞阴性,?,霍奇金淋巴瘤,R-S,细胞强表达（除,外淋巴细胞为主型，仅小部分阳性）,?,大部分非霍奇金淋巴瘤阴性。,3.,1,-AT,，,1,-ACT,，,lysozyme,?,单核细胞,/,巨噬细胞（,+,）,?,粒细胞（,+,）,4.CD68,?,跨膜糖蛋白，,110kD,?,多种巨噬细胞阳性：包括枯否氏细胞，,脾红髓、胃肠道固有层、肺腺泡和骨,髓的巨噬细胞。,?,抗原呈递细胞，如郎罕氏细胞（）,或弱（）。,?,浆细胞样,T,细胞阳性（见于反应性淋巴,结，被认为是单核,/,巨噬细胞源性）,?,慢性和急性粒细胞性白血病：胞浆阳性。,?,少数真性组织细胞性肿瘤阳

21、性。,?,正常和肿瘤性肥大细胞阳性。,?,恶性黑色素瘤：不同数量细胞阳性。,?,淋巴细胞源性肿瘤阴性，但一些,B,细胞淋,巴瘤（小淋巴细胞性淋巴瘤和毛细胞白,血病）胞浆弱阳性。,5.S-100,蛋白,?,正常细胞：,郎罕氏细胞（,+,）,交指（,IDRC,）和有些滤泡树突状细胞（,+,）,?,造血组织疾病：,郎罕氏细胞组织细胞增生症（,+,）,IDRC,肿瘤（,+,）,少数,T,细胞淋巴瘤（,+,）,6.MAC387,?,（,12kD,）和,（,14kD,）亚单位组成,?,胞浆抗原，表达于：,粒细胞,血单核细胞,各组织的组织细胞：如浸润性或反应性组织,细胞，腺泡巨噬细胞，肿瘤浸润巨噬细胞，,窦

22、组织细胞，上皮样巨细胞和组织细胞增生,症,X,和皮病性淋巴结病的组织细胞。,?,生发中心巨噬细胞（）,?,很多皮肤和扁桃体活检的鳞状上皮,（），但其他上皮（），包括,各类腺上皮。,7.MPO,?,用于鉴别淋巴细胞性和粒细胞性,白血病,（六）其,他,1.EMA,?,浆细胞阳性,?,造血组织肿瘤：表达于,霍奇金淋巴瘤（主要为,NLPHL,）,浆细胞肿瘤,很多间变性大细胞淋巴瘤,一些其他,B,和,T,大细胞淋巴瘤,2.BNH9,?,人红细胞相关抗原,H,（,1,，,2,，,4,型）和,Y,（,2,型）,?,正常组织：,上皮组织：腺上皮和鳞状上皮，包括外、中、,内胚层来源。,非上皮组织：红细胞、红母细

23、胞、巨核细胞,和内皮细胞,?,肿瘤细胞：,50%,间变性大细胞淋巴瘤,且多数,EMA(+),5%,霍奇金淋巴瘤,(,除外淋巴细胞为主型，,21%),6%,其他类型非霍奇金淋巴瘤（,B,、,T,，低度,和高度恶性）,50%,癌,软组织肿瘤：血管肉瘤（包括卡波西肉瘤）,和滑膜肉瘤,3.LMP,?,60kD,膜蛋白，由,EBV,的,BNLF,1,基因编码。,?,强阳性：,EBV,（,+,）的淋巴母细胞样细胞株,传染性单核细胞增多症中,EBV,感染的,B,免疫,母细胞,不典型淋巴细胞增生,免疫缺陷患者发生的多形性,B,细胞感染,?,其他阳性病变,25-50?V,相关的鼻咽未分化癌,90%EBV,相关的

24、霍奇金淋巴瘤,20-3030,间变性大细胞淋巴瘤,急性传染性单核细胞增多症,多种类型外周,T,细胞淋巴瘤,?,阴性：,EBV,（,+,）的,Burkitt,淋巴瘤,?,弱阳性,平滑肌，包括血管,mic2,4.CD99,（,p30/32,）,?,MIC2,基因产物。该基因位于染色体,X,和,Y,的短臂上。,?,正常细胞：,一些淋巴细胞（骨髓、淋巴结和脾）,皮质胸腺细胞,卵巢颗粒细胞,大多数,Langerhan,胰岛细胞,CNS,室管膜细胞,睾丸,Sertoli,细胞,部分血管内皮细胞,?,肿瘤细胞：,淋巴母细胞性淋巴瘤和粒细胞肉瘤（,+,）,ES/PNET,瘤细胞表面强表达，用于和其他小,圆细胞

25、肿瘤鉴别。,CNS,胶质母细胞瘤和室管膜瘤阳性。,胰岛细胞肿瘤阳性。,5.ALK-1,?,间变性大细胞淋巴瘤可见若干种染色体易,位，几乎都累及定位于,2,号染色体的一种,酪氨酸激酶,ALK,（,ALCL kinase,）。,t(2,；,5)(p23,；,q35),易位最常见，涉及的,partner gene,为,NPM,（,nucleophosmin gene,）。,该易位产生融合基因,NPM-ALK,。,?,正常,ALK,蛋白，表达限于中枢神经系统,（散在神经元，胶质细胞和内皮细胞）；,正常淋巴细胞不表达。,?,单抗,ALK-1,可识别正常,ALK,蛋白,(200kD,）,和易位产生的不同融

26、合蛋白，如,NPM-,ALK,蛋白（,80kD,）。由此用于诊断,ALCL,。,?,各种易位导致,ALK,阳性分布不同,Partner Gene,易位,发生率,ALK,阳性分布,t(2;5),t(1;2),Nucleophosmin,Tropomyosin 3,75%,10-20%,胞浆,/,核,胞浆,t(2;3),TRK fused gene(TRG),Inv 2,ATIC(pur H gene),2-5%,2-5%,2-5%,胞浆,胞浆,胞浆,/,颗粒,t(2;22),Clathrin heavy chain,?,目前,RT-PCR,法所用引物为,NPM-ALK,特,异，故不能检测其它易位

27、。因而免疫组,化方法检测,ALK,诊断,ALCL,更具优势。,?,ALCL,好发于儿童和青年。年长的,ALCL,病例,t,（,2,；,5,）和,ALK,常常阴性。,?,ALK,阳性的,ALCL,，预后佳。,?,存在问题：,有报道，,t,（,2,；,5,）,NPM/ALK,可能无,ALCL,特异性，阳性可见于周围,T,细胞淋,巴瘤和,T,免疫母细胞性淋巴瘤（,RT-PCR,法）,15-20%T/null ALCL,见,ALK,阴性。有人认,为这些病例更宜归类为“周围,T,细胞淋巴,瘤，非特殊性，间变变异型（,anaplastic,variant,）”,6.TIA-1,（,T,细胞胞内抗原,-1,

28、）,?,17kD,，一种胞浆颗粒相关蛋白，表达于,有溶细胞潜能的细胞（,CTL,和,NK,细胞），,又称,GMP-17,。,?,和,perforin,、,granzyme B,同属细胞毒颗粒,蛋白。,?,与,FAS,（,CD95,）调节的凋亡有关,?,造血细胞：,9016,，,50-808,，,104,正,常外周血淋巴细胞（,+,）,几乎所有单核细胞和粒细胞（,+,）,CD4,活化,T,细胞株（）,活化,NK,细胞株（）,Con A,活化的胸腺细胞（）,B,淋巴细胞和,B,细胞株（）,?,肿瘤：表达于细胞毒相关,T,细胞肿瘤和,NK,细胞肿瘤,皮下脂膜炎样,T,细胞淋巴瘤（）,肠病型肠道,T,

29、细胞淋巴瘤（）,肝脾,T,细胞淋巴瘤（）,*,很多,周围,T,细胞肿瘤和,NK,细胞肿瘤都表,达细胞毒颗粒蛋白,TIA-1,、,perforin,、和,granzyme B,，但肝脾,T,细胞淋巴瘤仅有,TIA-1,（）。,间变性大细胞淋巴瘤（,）,*,有助于同霍奇金淋巴瘤的鉴别,鼻及鼻型,NK/T,细胞淋巴瘤也有表达,7.Perforin,（穿孔素）,?,66kD,或,70kD,，产生于溶细胞性淋巴细胞，,并储存于这些细胞的胞浆颗粒中。,?,在靶细胞膜上形成跨膜孔道，导致膜完整,性丧失，细胞裂解。其释放过程和裂解功,2,能依赖,Ca,。,?,参与细胞毒,T,细胞诱导凋亡机制。,?,人和鼠,p

30、erforin,基因定位于,10,号染色体。,?,表达具杀伤细胞特异性。,大多数,NK,细胞株，,CD8,CTL,株（）,人,CD3,，,CD56,的,NK,细胞，,CD3,的大颗粒淋巴,细胞和,T,细胞（）,?,肿瘤,皮下脂膜炎样,T,细胞淋巴瘤（）,肝脾,T,细胞淋巴瘤（）,*,表明瘤细胞功能上属非成熟性,T,细胞，不能诱,导凋亡和坏死，不能释放细胞毒蛋白。,间变性大细胞淋巴瘤（,）,*,有助于同霍奇金淋巴瘤的鉴别,鼻及鼻型,NK/T,细胞淋巴瘤可有表达,8.HLA-DR,?,人组织相容性复合物,ClassII,基因至少有,四个区域：,HLA-DP,，,-DO,，,-DR,?,一条,链，一

31、条,链,?,主要标记,B,细胞，指状突网状细胞，郎罕,氏细胞和巨噬细胞。,?,少数上皮细胞，活化,T,细胞和纤维母细胞,样细胞（可能相当于树状突细胞）也有,反应。,?,胸腺：整个皮质的上皮细胞网（）,?,B,和,T,非霍奇金淋巴瘤（）,?,周围血：,B,细胞和大部分单核细胞（）,正常,T,细胞（）,活化,T,细胞（）,9.bcl-2,?,正常细胞：表达于,非生发中心,B,细胞,大多数,T,细胞,浆细胞,?,肿瘤：,过度表达于大多数滤泡性淋巴瘤和一些,弥漫性大,B,细胞淋巴瘤,也表达于很多其他淋巴瘤和白血病,10.Ki-67,?,表达于细胞周期,G0,期外的细胞,?,与淋巴瘤分级有关,11.Cy

32、clinD1,?,分,D,1,、,D,2,和,D,3,亚型，有组织特异性，相,互间同源性达,53.1-63.5%,编码基因,定位,11q,13,氨基酸数,295,CyclinD,1,CCND,1,CyclinD,2,CyclinD,3,CCND,2,CCND,3,12q,13,6p,21,290,292,?,绝大多数套细胞淋巴瘤发生,t,（,11,；,14,）,（,q13,；,q32,）易位，导致,CCND1,（,bcl-1,或,PRAD1,）基因过度表达，从而使,cyclinD1,蛋白表达过度。故套细胞淋巴瘤,cyclinD1,（），并可同阴性的滤泡性淋,巴瘤和小淋巴细胞性淋巴瘤,/,白血病

33、鉴别。,12.CD25,?,T,细胞生长因子受体或,IL-2,，单多肽链，,分子量,55kD,，有时也称为,Tac,抗原。,?,该受体在活化的,T,细胞，,HTLV-1,和,HTLV-2,T,细胞株强表达，活化,B,细胞弱,表达。,?,周围淋巴组织,T,区和生发中心亮区淋巴细,胞不同程度阳性。,?,生发中心巨噬细胞弱阳性，窦区巨噬细,胞强阳性。,?,胸腺：仅在髓质见散在阳性细胞，皮质,阴性。,?,正常周围血,CD25,细胞,5%,。,13.CD34,?,正常细胞：,Progenitor cell,内皮细胞,?,肿瘤：,一些粒细胞白血病,一些淋巴母细胞性白血病,Ventana,自动染色系统在淋巴

34、瘤诊断中的应用,-RED,标记,CD8,CD15,公司,Dako(m),Ventana,产品名,M7103,Clone C8/144B,Cat#250-2604,347540,4G7,M0755,Clone L26,M0751,BerH2,GP1b,nn2/174,250-2515(50),-Lambda(Poly),Z311,稀释度,1:100,预稀释,CD19,CD20,CD30,CD42b,Lambda,S-100,BD,Dako(m),Dako(m),Novocastra(m),Ventana(R),Dako(R),1:25,1:400,1:50,1:100,预稀释,1:2000,Ve

35、ntana,自动染色系统在淋巴瘤诊断中的应用,-,DAB(1),标记,CD1a,CD3,CD4,公司,Immunotech,Dako(R),Ventana(m),产品名,Cat#IM1590,A0452,Cat#250-2712,CNC016,Clone 4C7,M7103,Clone C8/144B,CMC041,Clone 270,Cat#250-2504,Cat#347540,Clone 4G7,稀释度,预稀释,1:100,预稀释,CD5,CD8,CD10,CD15,CD19,Cell Marque(m),Dako(m),Cell Marque(m),Ventana(m),BD(m),1

36、:50,1:100,1:25,1:25,1:25,Ventana,自动染色系统在淋巴瘤诊断中的应用,-,DAB(2),标记,CD20,CD23,公司,Dako(m),Ventana(m),产品名,M0755,Clone1.26,Cat#250-2717,稀释度,1:400,预稀释,1:200,1:50,1:40,1:50,1:100,CD25,CD30,CD31,CD34,CD42b,Neomarkers(m),Dako(m),Dako(m),Immunotech(m),Novocastra(m),Cat#MS-203-P,M0751,BerH2,M0823,Clone,JC/70A,786,

37、QBEND10,GP1b,nn2/174,Ventana,自动染色系统在淋巴瘤诊断中的应用,-,DAB(3),标记,CD43,CD45,公司,Dako(m),Dako(m),产品名,M0786,DF-T1,M701,2B11&PD7/26,250-2510,Clone 148,250-2563,Clone A6,NKH1,347390,Leu7,M3601,稀释度,1:40,1:100,CD45RA,CD45RO,Ventana(m),Ventana(m),预稀释,预稀释,CD56,CD57,CD68,Coulter,Bec/Dick(m),Dako(m),1:20,1:10,1:200,Ve

38、ntana,自动染色系统在淋巴瘤诊断中的应用,-,DAB(4),标记,CD79,产品名,稀释度,M7051,1:20,M3601,CD99,Dako(m),1:50,Clone MIC2,A4502,CD117,Dako(R),1:400,Clone MIC2,M7195,Dako(m),1:20,ALK,蛋白,12025,Vital(m),1:20,抗,-,胰酶,Clone G1996,M887,bcl-2,Dako(m),1:10,Clone 124,M7221,bcl-6,Dako(m),Clone PG-B6p,1:10,Cath-D,Cathepsin D,Ciba-Corning(

39、m),1:20,公司,Dako(m),Ventana,自动染色系统在淋巴瘤诊断中的应用,-,DAB(5),标记,Cyclin-D1,DBA-44,颗粒酶,血型糖蛋白,-A,HLA-DR,IgA,IgG,公司,Dako(m),产品名,M7155,稀释度,1:40,Cat#1069,Immunotech(m),Clone DBA-44,预稀释,Chemicon,Dako(m),Dako(m),Signet(R),Signet(R),MAB3070,M0819,M775,CR3/43,410-13,411-13,1:40,1:200,1:50,预稀释,预稀释,IgM,Signet(R),414-13

40、,预稀释,Ventana,自动染色系统在淋巴瘤诊断中的应用,-,DAB(6),标记,Kappa,Lambda,Macrophage,MIB-1,MPO,MPO,公司,Ventana(R),Ventana(R),Dako(m),Immunotech(m),Dako(R),Dako(m),产品名,250-2514(50),-kappa(Poly),250-2515(50),-kappa(Poly),M814,.0515,Clone MIB-1,A-398,M748,稀释度,预稀释,预稀释,1:200,1:50,1:500,1:100,p-53,Tdt,BioGenex(m),Dako(R),D07

41、,A3524,1:200,1:10,Antibodies Used In The JCML Lab(1),抗体,CD1a,制备,石蜡,特异性,皮质胸腺细胞,CD1a,CD2,冰冻，涂片，,Cytopreps,冰冻，涂片，,Cytopreps,皮质胸腺细胞,T,细胞,T,细胞,T,细胞,T,细胞，辅助,/,诱导,CD3,冰冻，涂片，,Cytopreps,（,UCHT1,）,CD3,石蜡,CD4,（,OPD4,）,CD4,石蜡,冰冻，涂片，,Cytopreps,T,细胞，辅助,/,诱导,Antibodies Used In The JCML Lab(2),抗体,CD5,（,4C7,）,石蜡,CD5

42、,制备,冰冻，涂片，,Cytopreps,T,细胞,特异性,T&B,亚型,CD7,冰冻，涂片，,Cytopreps,T,、,NK,细胞,CD8,石蜡,T,细胞，抑制,/,细胞,（,C8/144B,）,毒,CD8,冰冻，涂片，,Cytopreps,T,细胞,CD10,（,calla,）,CD11c,冰冻，涂片，,Cytopreps,淋巴母细胞,冰冻，涂片，,Cytopreps,巨噬细胞、毛细胞,Antibodies Used In The JCML Lab(3),抗体,CD13,CD14,制备,冰冻，涂片，,Cytopreps,冰冻，涂片，,Cytopreps,特异性,髓样细胞,单核细胞,中性粒

43、细胞，粒细,胞相关,B,细胞,CD15,（,Leu,石蜡，冰冻，涂片，,Cytopreps,M-1,）,CD19,冰冻，涂片，,Cytopreps,CD20,（,B-,Ly1,）,CD22,冰冻，涂片，,Cytopreps,石蜡，冰冻，涂片，,Cytopreps,B,细胞,B,细胞,Antibodies Used In The JCML Lab(4),抗体,CD23,CD25,CD30,（,Ki-1,）,CD31,CD33,制备,冰冻，涂片，,Cytopreps,B,细胞,冰冻，涂片，,Cytopreps,白介素,-2,受体,石蜡，冰冻，涂片，,Cytopreps,石蜡，冰冻，涂片，,Cyto

44、preps,活化,T&B,细胞,内皮细胞,特异性,冰冻，涂片，,Cytopreps,单核细胞，髓样细胞,髓样和淋巴细胞,progenitor,CD34,（,Q,石蜡，冰冻，涂片，,bend 10,）,Cytopreps,Antibodies Used In The JCML Lab(5),抗体,CD35,（,DRCI,）,CD38,制备,冰冻，涂片，,Cytopreps,冰冻，涂片，,Cytopreps,特异性,树突网状细胞,T,细胞,CD42b,CD43,石蜡，冰冻，涂片，,Cytopreps,石蜡，冰冻，涂片，,Cytopreps,血小板糖蛋白,T,细胞,白细胞共同抗原,T,，,B,细胞亚

45、型,CD45,石蜡，冰冻，涂片，,Cytopreps,（,LCA,）,CD45R0,石蜡，冰冻，涂片，,（,UCHL-1,）,Cytopreps,Antibodies Used In The JCML Lab(6),抗体,CD45RA,（,4KB5,）,CD45RA,（,MT2,）,CD56,（,123c3,）,CD56,（,NKH-1,）,CD57,CD61,制备,石蜡，冰冻，涂片，,Cytopreps,石蜡，冰冻，涂片，,Cytopreps,石蜡，冰冻,石蜡，冰冻，涂片，,Cytopreps,特异性,B,、,M,、,T,细胞亚,型,B,，,T,细胞亚型,小细胞肺癌,/N,CAM,NK,细胞

46、,石蜡，冰冻，涂片，,Cytopreps,冰冻，涂片，,Cytopreps,NK,细胞,血小板糖蛋白,IIIa,Antibodies Used In The JCML Lab(7),抗体,CD71,CD74,CD79,制备,石蜡，冰冻,石蜡，冰冻，涂片，,Cytopreps,B,细胞,B,细胞,特异性,冰冻，涂片，,Cytopreps,转铁蛋白受体,CD99,CD103,抗,-,胰酶,石蜡，冰冻，涂片，,Cytopreps,冰冻,石蜡，冰冻，涂片，,Cytopreps,尤因肉瘤,/,细胞膜,上皮内淋巴细胞亚型,肥大细胞,ALK-1,石蜡,ALCL,Antibodies Used In The

47、JCML Lab(8),抗体,BerEP4,石蜡,制备,胞浆,红细胞内的血型糖,蛋白,A,特异性,血型糖蛋白,A,石蜡，冰冻，涂片，,Cytopreps,HLA-DR,（,CR3/43,）,Kappa,KBA-62,Lambda,MDRM,（,JSB-1,）,石蜡，冰冻，涂片，,Cytopreps,石蜡，,IF,石蜡，冰冻,石蜡，,IF,石蜡，冰冻，涂片，,Cytopreps,人组织相容性基因,细胞膜,-,胞浆,细胞膜,/,恶黑,细胞膜,-,胞浆,膜糖蛋白,Antibodies Used In The JCML Lab(9),抗体,MPO,多抗,单抗,TdT,SV 40T,（,Ab-2,）,b

48、cl-2,DBA-44,制备,石蜡,涂片，,Cytopreps,石蜡，,IF,石蜡,特异性,血中性粒细胞和单,核细胞，骨髓粒细,胞前体,核,大,T,细胞抗原,石蜡，冰冻，涂片，,Cytopreps,石蜡，冰冻，涂片，,Cytopreps,滤泡性淋巴瘤,B,细胞，毛细胞,二、淋巴瘤与反应性增生的鉴别,诊断及淋巴瘤的分类,（一）淋巴瘤与反应性增生的鉴别诊断,?,淋巴组织增生是良性还是恶性，可以非,常容易也可以非常困难,?,通过免疫组化发现不成熟的免疫表型、,失常的免疫表型或异常的免疫结构可以,帮助我们区分,1,滤泡性淋巴瘤和反应性滤泡增生,?,免疫球蛋白轻链的多克隆型或单克隆型,表达,bcl-2,

49、为最有用的免疫染色，正常除滤泡,中心细胞外，,T,和,B,细胞均阴性，在滤,泡中心过表达则支持淋巴瘤的诊断。,?,注意的是：,?,有些反应性增生滤泡内有许多反应性小,T,细胞表达,bcl-2,但可用,CD3,免疫染色对,比；,?,bcl-2,阴性并不能完全排除滤泡性淋巴瘤,（仅,80,85%,阳性）,?,Ki-67,低,Ki-67,指数常倾向于滤泡性淋巴瘤的诊,断，但高,Ki-67,指数则不能做结论。,2,套细胞淋巴瘤和套区增生,?,CD5,和,CD43,增生套区,CD20,阳性外，同,时表达,CD5,和,CD43,常提示为套细胞淋巴,瘤,?,滤泡间大量,CD20+B,细胞提示滤泡间侵犯,?,

50、CyclinD1,支持套细胞淋巴瘤最有价值的,标记,3,边缘区,B,细胞淋巴瘤和单核,样,B,细胞增生,?,CD20/CD3,聚合或弥漫成片的,B,细胞倾向于淋巴瘤诊断,?,bcl-2,蛋白,反应性单核样,B,细胞常呈,bcl,阴性，而边缘区,B,细胞淋巴瘤呈阳性,?,免疫球蛋白轻链,多克隆型（增生）或单克隆型（淋巴瘤）,4,副皮质区增生性质,?,CD20/CD3,如果副皮质区有非常显著的,B,细胞成分，,则应怀疑,B,细胞淋巴瘤,?,如怀疑霍奇金淋巴瘤和间变性大细胞淋,巴瘤，可加用,CD30,、,CD15,和,ALK,（二）淋巴瘤分类,淋巴瘤中只有少数类型，包括滤泡性淋,巴瘤、边缘区,B,细