微生物检验.docx

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1、微生物检验高压蒸汽灭菌原理高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽,待水蒸汽急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌器内的压力，从而使沸点增高，得到高于100的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。倒置培养因为平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。为了防止形成的冷凝水滴到培养基上，使菌落蔓延，不容易辨别菌落特征，也不好计数 防止培养基培养过程中水分散失 大肠

2、杆菌测定为什么要用乳糖胆盐发酵管胆盐能抑制革兰氏阳性菌等杂菌生长.在初发酵，培养基已经加入胆盐抑制革兰氏阳性菌生长，并在EMB培养基上进行分离培养，因此复发酵培养时无需乳糖发酵管，以免大肠菌肠受到抑制。胆盐对很多杂菌有抑制作用，但是对大肠杆菌不造成影响大肠杆菌发酵乳糖，产酸产气，是一个很明显的特征。大肠杆菌发酵乳糖，产酸产气，是一个很明显的特征。另外，大肠杆菌不一定需要乳糖胆盐发酵管，而乳糖胆盐发酵管一般是用来做大肠菌群的，大肠菌群包含大肠杆菌，但还有其他一些细菌也属于。 金黄色葡萄球菌在paird-parker平板上的菌落特征如何？为什么？ 特征我已清楚，重要的是我想知道为什么。黑色是因为金

3、黄色葡萄球菌可以还原BP平板中的亚碲酸钾为单质碲，呈黑色。晕圈则是因为金黄色葡萄球菌含有卵磷脂酶，可以分解BP平板中添加的卵黄液所含有的卵磷脂而呈白色浑浊。食品中检出的菌落总数是否代表该食品上的所有细菌数？为什么？答：菌落总数是指食品经过处理，在一定条件下培养后，所得1g或1ml检样中所含细菌菌落总数。菌落总数主要作为判别食品被污染程度的标志，也可以应用这一方法观察细菌在食品中繁殖的动态，以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。菌落总数并不表示样品中实际存在的所有细菌总数，菌落总数并不能区分其中细菌的种类，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数等。3、菌落总数检验时为什么营养琼脂培养基在使用前要保持在

4、的温度？答：因为营养琼脂温度若温度高于，容易将验样中的菌烫死；若温度低于，则营养琼脂会凝固，影响培养效果。5、大肠菌群检验中为什么首先要用乳糖胆盐发酵管？答：因为乳糖胆盐发酵管中的成分有溴甲酚紫，中性时呈蓝紫色，酸性时呈黄色，如果颜色不变，说明无产酸的大肠菌群；如果颜色变黄色，说明可能出现能分解乳糖产酸的大肠菌群；胆盐可以抑制其它细菌生长繁殖；看杜氏小管中是否有气体，判断是否为分解乳糖产酸产气的大肠菌群。沙门氏菌检验有哪5个基本步骤？答：食品中沙门氏菌的检验方法有五个基本步骤： 前增菌；选择性增菌； 选择性平板分离沙门氏菌； 生化试验，鉴定到属； 血清学分型鉴定。8、沙门氏菌在三糖铁培养基上的

5、反应结果如何？解释这些现象？答：三糖铁琼脂斜面培养基含有1乳糖及蔗糖与0.1葡萄糖作为发酵基质，且以酚红作为酸碱指示剂，如培养基由橘红转为黄色，表示有糖类发酵。测试时使用接种针先穿刺至底部，而后于斜面作划线接种，经培养18-24小时后，依情况判断糖类之发酵情形。可能为沙门氏菌的反应结果为： 斜面碱性底部呈黑色产气或不产气：表示仅葡萄糖发酵。因微生物优先分解葡萄糖产酸，使培养基变黄，但因葡萄糖含量低，于斜面产生之微量酸立即氧化而呈碱性反应，同时培养基中的蛋白质也随之利用而产碱，所以斜面表面为红色；三糖铁琼脂培养基中亦含有硫代硫酸钠作为产生硫化氢之基质，且含硫酸亚铁作为检测此无色产物之指示剂，经接

6、种培养后，若微生物有硫化氢产生，会与亚铁离子作用生成不溶性硫化亚铁之沉淀，进而使培养基变黑。金黄色葡萄球菌在血平板或BP平板上的菌落特征如何？答：金黄色葡萄球球菌的单个菌落在血平板上呈金黄色，有时也为白色，大而突出、圆形、不透明、表面光滑，周围有溶血圈。在B-P琼脂平板上菌落呈圆形，表面光滑、凸起、湿润，直径23 mm。灰黑色至黑色，有光泽，常有浅色的边缘，周围绕以不透明圈 ，其外常有一清晰带。当用接种针触及菌落时具有黄油样粘稠感1、电热烘箱和高压灭菌锅如何操作? 各有哪些使用注意事项?2、食品中检出的菌落总数是否代表该食品上的所有细菌数？为什么？3、菌落总数检验时为什么营养琼脂培养基在使用前

7、要保持在的温度？4、试简述革兰氏染色的步骤。5、大肠菌群检验中为什么首先要用乳糖胆盐发酵管？6、简述大肠菌群MPN计数的检验步骤。7、沙门氏菌检验有哪5个基本步骤？8、沙门氏菌在三糖铁培养基上的反应结果如何？解释这些现象？9、志贺氏菌检验有哪5个基本步骤？10、志贺氏菌在三糖铁培养基和葡萄糖半固体培养基上的反应结果如何？解释这些现象？11、志贺氏菌的进一步生化试验的反应结果如何？12、金黄色葡萄球菌在血平板或BP平板上的菌落特征如何？13、金黄色葡萄球菌的血浆凝固酶试验操作过程和反应如何？14、干热空气灭菌法和高压蒸汽法适用范围如何?15、培养基配好后，为什么必须立即灭菌？如何检查灭菌后的培养

8、菌是无菌的？16、高压蒸汽灭菌的原理是什么？是否只要压力表上的指针指到所需的压力时就能达到所需灭菌温度？为什么？17、管口、瓶口为什么要用棉塞？能否用木塞或棉皮塞代替？为什么？18、食品检验为什么要测定细菌菌落总数？19、培养时为什么要把培养皿倒置培养？20、为什么大肠菌群的检验要经过复发酵才能证实？21、食品中能否允许有个别沙门氏菌存在？为什么？22、鉴定致病性金黄色葡萄球菌的重要指标是什么？23、金黄色葡萄球菌在血平板或BP平板上的菌落特征如何？为什么？24、食品中能否允许有个别金黄色葡萄球菌存在？为什1、答:干热空气灭菌法将包扎好的玻璃器皿摆入电热烘箱中，相互间要留有一定的空隙，以便空气

9、流通。关紧箱门，打开排气孔，接上电源。待箱内空气排出到一定程度时，关闭上排气孔，加热至灭菌温度后，固定温度进行灭菌：160165保持2小时。2小时后切断电源。待烘箱内温度自然降温冷却到60以下后，再开门取出玻璃器皿，避免由于温度突然下降而引起玻璃器皿碎裂。高压蒸汽灭菌法 关好排水阀门，放入纯净水或蒸馏水至标度。注意水量一定要加足，否则容易造成事故。将须要灭菌的器材、培养基等装入灭菌锅中，加盖密封。旋紧螺旋时，先将每个螺旋旋转到一定程度，然后再旋紧相对的两个螺旋，以达到平衡旋紧，否则易造成漏气，达不到彻底灭菌的目的。通电加温，打开排气阀门，排尽锅内的空气。通常当压力表指针升至5磅或0.05MPa

10、时，打开排气阀门放气，待压力表指针降至零点一小段时间后，再关闭阀门。即阀门冲出的全部是蒸汽时则表示彻底，此时可关闭排气阀门，如果过早关闭阀门，排气不彻底，也达不到彻底灭菌的目的。恒温灭菌: 0.1MPa 或15磅压力保持2030分钟。压力表的指针上升时，锅内温度也逐渐升高，当压力表指针升至0.1MPa时或15磅时，锅内温度相当于120121，此时开始计算灭菌时间，控制热源，使处于0.1MPa 或15磅压力保持2030分钟，即能达到完全灭菌的目的，然后停止加温。当达到所需温度时开始计时，并在此温度下保持所需的时间。降温：自然降温或打开活门排汽降温。稍微打开一点排气活门，使锅内蒸汽缓慢排除，然后逐

11、渐开大活门，气压徐徐下降，注意勿使排气过快，否则会使锅内的培养基沸腾而冲脱或沾染棉花塞，但排气太慢又使培养基在锅内，受高温处理时间过长，对培养基也是不利的。一般从排气到打开锅盖以10分钟左右为好。当锅内蒸汽完全排尽时即压力表指针降到零时，要立即打开锅盖。取出灭菌物品：当锅内温度下降到60左右时器材或培养基。如培养基需制备固体斜面培养基时，则应趁热将试管斜放在桌上，上面盖上报纸以免落灰尘，冷却后便可收起。最后将高压灭菌器内的剩余水排出。观察灭菌效果。把灭菌培养基放入25温箱中，培养48小时观察灭菌效果。 48小时后不见杂菌生出，便证明培养基已达到灭菌目的，可以使用。注意事项：干热空气灭菌要注意物

12、品不要堆放过紧，先排出冷空气，注意温度的时间控制，70?C以下放物、取物。高压灭菌要注意水要没过发热管；物品不要过多；加热后先排除冷空气；到时排气不能太快；降压回零取物。2、答：菌落总数是指食品经过处理，在一定条件下培养后，所得1g或1ml检样中所含细菌菌落总数。菌落总数主要作为判别食品被污染程度的标志，也可以应用这一方法观察细菌在食品中繁殖的动态，以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。菌落总数并不表示样品中实际存在的所有细菌总数，检测结果只包括一群在计数平板琼脂上生长发育的嗜中温需氧菌或兼性厌氧菌的菌落总数，菌落总数并不能区分其中细菌的种类，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数等。3、答：因为营

13、养琼脂温度若温度高于，容易将验样中的菌烫死；若温度低于，则营养琼脂会凝固，影响培养效果。4、答：革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是： 1）涂片固定。 2）草酸铵结晶紫染1分钟。 3）自来水冲洗。 4）加碘液覆盖涂面染1分钟。 5）水洗，用吸水纸吸去水分。 6）加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，25秒后水洗，吸去水分。 7）蕃红染色液染1分钟后，自来水冲洗。干燥，镜检。 染色的结果，革兰氏正反应菌体都呈紫色，负反应菌体都呈红色。5、答：因为乳糖胆盐发酵管中的成分有溴甲酚紫，中性时呈蓝紫色，酸性时呈黄色，如果颜色不变，说明无产酸的大肠菌群；如果颜色变黄色，说明

14、可能出现能分解乳糖产酸的大肠菌群；胆盐可以抑制其它细菌生长繁殖；看杜氏小管中是否有气体，判断是否为分解乳糖产酸产气的大肠菌群。6、答：检验的稀释 LST肉汤发酵 BGLB肉汤发酵BGLB肉汤发酵 查MPN表-报告结果7、答：食品中沙门氏菌的检验方法有五个基本步骤： 前增菌；选择性增菌； 选择性平板分离沙门氏菌； 生化试验，鉴定到属； 血清学分型鉴定。8、答：三糖铁琼脂斜面培养基含有1乳糖及蔗糖与0.1葡萄糖作为发酵基质，且以酚红作为酸碱指示剂，如培养基由橘红转为黄色，表示有糖类发酵。测试时使用接种针先于斜面作划线，而后穿刺至底部接种，经培养18-24小时后，依情况判断糖类之发酵情形。可能为沙门

15、氏菌的反应结果为： 斜面碱性底部呈黑色产气或不产气：表示仅葡萄糖发酵。因微生物优先分解葡萄糖产酸，使培养基变黄，但因葡萄糖含量低，于斜面产生之微量酸立即氧化而呈碱性反应，同时培养基中的蛋白质也随之利用而产碱，所以斜面表面为红色；三糖铁琼脂培养基中亦含有硫代硫酸钠作为产生硫化氢之基质，且含硫酸亚铁作为检测此无色产物之指示剂，经接种培养后，若微生物有硫化氢产生，会与亚铁离子作用生成不溶性硫化亚铁之沉淀，进而使培养基变黑。9、答：食品中志贺氏菌的检验方法有五个基本步骤： 增菌培养； 分离培养； 初步生化试验；血清学分型；进一步生化试验。10、答：志贺氏菌在三糖铁琼脂上生长的现象：斜面产碱仍为红色或粉

16、红色；底层产酸不产气，变黄色；不产H2S，不出现黑色。志贺氏菌在葡萄糖半固体培养基上生长的现象：沿线生长，无动力。出现这些现象的原因是：志贺氏菌的生化反应特点是乳糖、蔗糖不发酵，葡萄糖产酸不产气(福氏志贺氏菌6型可产生少量气体)，无动力。11、答：葡萄糖铵：阳性者斜面上有正常大小的菌落生长，阴性者不生长或生长极微小的菌落。西蒙氏柠檬酸盐：阳性者斜面上菌落生长，培养基由绿色转为蓝色，阴性者不生长。赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶：阳性者为紫色，阴性者为黄色。pH7.2尿素：阳性者为红色，阴性者为黄色。KCN：浑浊为阳性，澄清为阴性。水杨苷和七叶苷：阳性者产气。12、答：金黄色葡萄球球菌的单个菌落在血平板上呈

17、金黄色，有时也为白色，大而突出、圆形、不透明、表面光滑，周围有溶血圈。在B-P琼脂平板上菌落呈圆形，表面光滑、凸起、湿润，直径23 mm。灰黑色至黑色，有光泽，常有浅色的边缘，周围绕以不透明圈，其外常有一清晰带。当用接种针触及菌落时具有黄油样粘稠感。 13、答：吸取1:4新鲜兔血浆0.5 mL，放入小试管中，再加入培养24 h的金黄色葡萄球菌肉浸液肉汤培养物0.5 mL振荡摇匀，置 361温箱或水浴内，每半小时观察一次，观察6 h，如呈现凝固,即将试管倒置或 倾斜时，呈现凝块者，被认为阳性结果。同时以已知阳性和阴性葡萄球菌株及肉汤作为对照。14、答：干热空气灭菌法 是指用高温干热空气灭菌的方法

18、。该法适用于高温下不变质、不蒸发的物品，如玻璃器皿、瓷器、金属制品以及不允许湿热气体穿透的油脂和耐高温的粉末化学药品的灭菌高压蒸汽法适用于耐高温和不怕潮湿物品的灭菌，如适用于一般培养基、玻璃器皿、无菌水、金属用具等。15、答：配制好后,是要是用于细菌的培养,由于空气及各种配料中的各种各样细菌非常多,如果不先灭菌,在培养时由于本底中的细菌带来了干扰,会使实验失败.要检查培养基的灭效果方法非常简单,将培养基放在将要做实验的温箱中进行培养(时间与培养实验一致,一般是24小时)看灭菌后培养基的菌落就可以判断.有时也为了使用培养更加科学,在做细菌培养时,除在在涂上需要培养的菌种外,同时另外加一个培养基(

19、空白)同时进行同条件培养进行对比.16、答：高压蒸汽灭菌的原理是：在密闭的蒸锅内，其中的蒸汽不能外溢，压力不断上升，使水的沸点不断提高，从而锅内温度也随之增加。在0.1MPa的压力下，锅内温度达121。在此蒸汽温度下，使微生物细胞内的蛋白质凝固变性，可以很快杀死各种细菌及其高度耐热的芽孢。不一定。因为如果锅内有空气存在，那么空气受热急速膨胀，压力上升的速度与温度上升的速度不会成正比，在0.1MPa的压力下，锅内温度还没有达到121。17、答：棉塞是防止外界微生物进入培养基内而造成污染，并保证有良好的通气性能。不能用木塞和橡皮塞，因为无通气性。18、答：菌落总数，主要作为判定食品被污染程度的标志

20、，也可以应用这一方法观察细菌对食品被污染程序的标志，也可以应用这一方法观察细菌在食品繁殖的动态，以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。19、答：一则培养时培养皿中会产生较多的水蒸气，水蒸气在皿盖上凝结会产生水滴，如果培养皿正置，水滴滴下会将菌落冲散，这样的话一个大菌落可能会分散开成为很多小菌落，对细菌的培养和计数都造成很大的麻烦。如果倒置的话，培养基在上，皿盖在下，水滴滴下不会滴到菌落上。二则如果培养皿正置，空气中的细菌会沉降到培养基上而造成污染。20、答：初发酵是样品的发酵结果，不是大肠菌群纯菌的发酵试验，有可能受其它杂菌影响判断结果。进行证实试验避免假阳性结果。21、答：不允许。因为沙门

21、氏菌是致病菌。若检出则食品不合格。22、答：金黄色葡萄球菌能产生凝固酶，使血浆凝固，多数致病菌株能产生溶血毒素，使血琼脂平板菌落周围出现溶血环，在试管中出现溶血反应，在BP平板产生磷脂环。这些是鉴定致病性金黄色葡萄球菌的重要指标。23、答：在血平板上典型菌落：呈金黄色，有时也为白色，大而突起，圆形，不透明，表面光滑，有溶血环。 因为大多数菌株产生类胡罗卜素，使细胞团呈现出深橙色到浅黄色，金黄色葡萄球菌可以产生溶血素，因此在血平板上产生明显的溶血环。在BP平板上典型菌落为：灰色到黑玉色，圆形，光滑突起，湿润，直径2-3mm，边缘常为淡色，周围为一混浊带，在其外缘常有一透明圈。用接种针接触菌落似有黄油树胶的粘稠感。因为亚碲酸盐对除金黄色葡萄球外的其他能分解卵黄的菌株有毒性，并使菌落产生黑色。金黄色葡萄球菌产生磷脂酶、蛋白酶、脂肪酶和溶菌酶等，大多数菌株可水解天然的动物蛋白并释放脂肪酸，在BP平板产生磷脂环。24、答：不允许。因为金黄色葡萄球菌为条件致病菌。若检出则食品不合格。