培养基性能确认参考文件.docx

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1、培养基性能确认参考文件培养基性能确认方法 1. 目的 培养基性能确认法是为确认培养基的性能而进行的检测，证明培养基的性能，从而可以信赖所检测出的实验结果。 2. 范围 : 配制的培养基，每次培养时，购买的培养基，每次购买时都要确认其性能。 3. 设备及试剂 (1) Incubator 2025, 3035 (2) 平皿 (内直径 9 cm) (3) Loop - 10 (cat No. 251586 ; NUNC) (4) Spreader (cat No. 90050 ; SPL) (5) Micropipet, 灭菌 Tip (1 mL 容量, 0.1 mL 容量) (6) Tube (1

2、0 mL 容量) (7) 铂金线 (8) 70% 乙醇 4. 检测方法 (1) 培养基性能确认使用的标准菌株 1) Staphylococcus aureus NCTC 10788 (ATCC 6538) (金黄色葡萄球菌 ; S. aur) 2) Bacillus subtilis NCTC 10400 (ATCC 6633) (枯草芽孢杆菌 ; B. sub) 3) Escherichia coli NCTC 12923 (ATCC 8739) (大肠埃希菌 ; E. coli ) 4) Candida albicans NCPF 3179 (ATCC 10231) (白色念珠菌 ; C.

3、 alb) 5) Pseudomonas aeruginosa NCTC 12924 (ATCC 9027) (铜绿假单胞菌 ; P. aer) 6) Salmonella abony ACM 5080 (NCTC 6017) (沙门氏菌 ; S. abo) (2) 性能确认 1) 胰蛋白胨大豆琼脂培养基 Tryptic soy agar (TSA) 配制 标准菌种中取 E. coli, B. sub, S. aur 和 C. alb 菌种 Ampoule ，开封后，各倒入平皿中。每株试验菌平行制备 2 个平皿。加灭菌的生理盐水 100，水化(Re-hydrate)检测菌种，30秒后，把事先灭

4、菌的冷却后的温度约为 45 的 TSA，分别倒入每个平皿约1520ml, 混匀，凝固，盖上盖儿，倒置平皿，细菌在30 35培养5日，C. alb在20 25度培养5日。 为确认检测条件，用灭菌生理盐水，在30 35，培养5天，做空白阴性对照实验。 培养后，琼脂平板，接种菌的出现菌落数应为标准化菌液的检测值的1/22倍。 Escherichia coli NCTC 12923 (ATCC 8739) Bacillus subtilis NCTC 10400 (ATCC 标准菌种 6633) Staphylococcus aureus NCTC 10788 (ATCC 6538) Candida

5、albicans NCPF 3179 (ATCC 10231) 培养前 培养后 菌落照片 配制 2) 沙氏葡萄糖琼脂培养基 Sabouraud dextrose agar (SDA) 标准菌种中 C. alb 菌种Ampoule，开封后，倒入平皿中。 每株试验菌平行制备 2 个平皿。加灭菌的生理盐水 100，水化(Re-hydrate)检测菌种，30秒后，把事先灭菌的冷却后的温度约为 45 的 SDA，分别倒入每个平皿约1520ml, 混匀，凝固，盖上盖儿，倒置平皿， 在20 25度培养5日。 为确认检测条件，用灭菌生理盐水，在20 25，培养5天，做空白阴性对照实验。 培养后，琼脂平板，接种

6、菌的出现菌落数应为标准化菌液的检测值的1/22倍。 标准菌种 菌落照片 Candida albicans NCPF 3179 (ATCC 10231) 培养前 培养后 3) 乳糖肉汤培养基 Lactose broth (LB) 标准菌株E. coli，加入10ml 乳糖肉汤培养基中，于培养30 35培养箱中培养18 24h。用接种环蘸取培养液涂布于EMBA平板上，在30 35培养18 24h。 为确认检测条件，用乳糖肉汤培养基做空白实验。 培养后，培养皿出现标准菌种的特征，视为阳性。 标准菌种 选择培养基 菌落特征 金属光泽菌落或透过光下出现黑青色的菌落 培养前 菌落照片 4) 麦康凯琼脂培养

7、基 MacConkey agar (MCA) 培养后 Escherichia coli NCTC 12923 (ATCC 8739) 伊红美蓝琼脂培养基 (EMBA) 标准菌株E. coli，加入10ml 乳糖肉汤培养基中，于培养30 35培养箱中培养18 24h。培养液涂抹于MCA平板上，在30 35培养18 24h，观察结果。 为确认检测条件，用乳糖肉汤培养基做空白实验。 培养后麦康凯琼脂培养基出现标准菌种的特征，判定为阳性。 标准菌种 选择培养基 菌落特征 菌落照片 周围有红色的沉降线带的红色的菌落 培养前 培养后 Escherichia coli NCTC 12923 (ATCC 87

8、39) 麦康凯琼脂培养基 (MCA) 5) 伊红美蓝琼脂培养基 Eosin methylene blue agar (EMBA) 标准菌株E. coli，加在10ml乳糖肉汤培养基中，于30 35培养18 24h。培养液涂抹于EMBA平板上，在30 35培养18 24h，观察结果。 为确认检测条件，用乳糖肉汤培养基做空白实验。 培养后伊红美蓝琼脂培养基出现标准菌种的特征，判定为阳性。 标准菌种 选择培养基 菌落特征 金属光泽菌落或透过光下出现黑青色的菌落 培养前 菌落照片 培养后 Escherichia coli NCTC 12923 (ATCC 8739) 伊红美蓝琼脂培养基 (EMBA)

9、6) 麦康凯肉汤琼脂培养基 MacConkey broth (MCB) 标准菌株E. coli放入10ml TSB中，于30 35培养18 24h。吸取0.1ml培养液加入10ml MCB培养基中，在42 44培养24 48h。把再菌培养液涂抹在麦康凯琼脂培养基平板，在3035培养1872小时。 为确认检测条件，用胰酶大豆蛋白肉汤及麦康凯肉汤琼脂培养基做空白实验。 培养后在平板出现标准菌种的特征，判定为阳性。 标准菌种 选择培养基 菌落特征 菌落照片 Escherichia coli NCTC 12923 (ATCC 8739) 麦康凯琼脂培养基 (MCA) 周围有红色的沉降线带的红褐色集落

10、培养前 培养后 7) 2倍浓度的乳糖肉汤培养基 2X LB 标准菌株E. coli接种在2倍浓度的乳糖部利用发酵管中，于35 37培养24 48h。 培养后2倍浓度的乳糖部利用发酵管发生气体，判定为阳性。 标准菌种 Escherichia coli NCTC 12923 (ATCC 8739) 培养前 培养后 菌落照片 8) 煌绿乳糖胆盐肉汤液体培养基 Brilliant green lactose bile broth (BGLB) 标准菌株E. coli接种在2倍的乳糖肉汤培养基，于35 37培养24 48h。吸取培养液在煌绿乳糖胆盐肉汤液体培养基接种后，于35 37培养24 48h。 为

11、确认检测条件，用2倍的乳糖肉汤培养基，做空白实验。 培养后在煌绿乳糖胆盐肉汤液体培养基发酵管发生气体，判定为阳性。 标准菌种 Escherichia coli NCTC 12923 (ATCC 8739) 培养前 培养后 菌落照片 9) 亚硒酸盐-胱氨酸肉汤 Selenite cystine broth (SCB) 标准菌株S. cho接种在10ml的乳糖肉汤培养基，于30 35培养18 24h。菌培养液0.1ml喷注于亚硒酸盐-胱氨酸肉汤，30 35培养12 24h。再把菌培养液涂抹于木糖赖氨酸脱氧胆盐培养基及亚硫酸铋琼脂平板，于3035培养24 48h。 为确认检测条件，用乳糖肉汤培养基及

12、亚硒酸盐-胱氨酸肉汤，做空白实验。 培养后出现相关特征，判定为阳性。 标准菌种 选择培养基 菌落特征 不显 培养前 菌落照片 10) 连四硫酸盐肉汤 Tetrathionate broth (TB) 标准菌株S. cho接种在10ml的乳糖肉汤培养基，于30 35培养18 24h。菌培养液0.1ml喷注于亚连四硫酸盐肉汤，30 35培养12 24h。 菌培养液再涂抹于木糖赖氨酸脱氧胆盐培养基及亚硫酸铋琼脂平板，30 35培养24 48h。 为确认检测条件，用乳糖肉汤培养基及连四硫酸盐肉汤，做空白实验。 培养后出现相关特征，判定为阳性。 11) 木糖赖氨酸脱氧胆盐培养基 Xylose lysin

13、e deaoxycholate agar (XLDA) 标准菌株S. cho接种在10ml的乳糖肉汤培养基，于30 35培养18 24h。菌培养液涂抹于木糖赖氨酸脱氧胆盐培养基平板，30 35培养24 48h。 为确认检测条件，用乳糖肉汤培养基，做空白实验。 培养后出现相关特征，判定为阳性。 标准菌种 培养基 菌落特征 菌落照片 Salmonella abony ACM 5080 (NCTC 6017) 木糖赖氨酸脱氧胆盐培养基 (XLDA) 红色、中心部可能显示黑色点，或不显示 培养前 培养后 培养后 Salmonella abony ACM 5080 (NCTC 6017) 木糖赖氨酸脱氧

14、胆盐培养基 (XLDA) 红色，中心部显黑色或者黑色或者绿色菌落 培养前 培养后 亚硫酸铋琼脂 (BSA) 12) 亚硫酸铋琼脂 Bithmuth sulfite agar (BSA) 养液涂抹于亚硫酸铋琼脂平板，30 35培养24 48h。 为确认检测条件，用乳糖肉汤培养基，做空白实验。 培养后出现相关特征，判定为阳性。 标准菌种 培养基 菌落特征 亚硫酸铋琼脂 (BSA) 黑色或者绿色菌落 培养前 菌落照片 13) 三糖铁琼脂 Triple sugar iron agar (TSIA) 培养后 Salmonella abony ACM 5080 (NCTC 6017) 标准菌株S. cho

15、接种在10ml的乳糖肉汤培养基，于30 35培养18 24h。菌培 标准菌株S. cho接种在10ml的乳糖肉汤培养基，于30 35培养18 24h。菌培养液用铂金线涂抹于三糖铁琼脂斜面平板的深部和斜面，于35 37培养18 24h。 为确认检测条件，用乳糖肉汤培养基，做空白实验。 培养后出现相关特征，判定为阳性。 标准菌种 培养基 菌落特征 Salmonella abony ACM 5080 (NCTC 6017) 三糖铁琼脂 (TSIA) 深部显黄色，斜面部维持红色 培养前 菌落照片 培养后 14) RVS沙門氏菌增殖培養基 Rappaport Vassiliadis Salmonella

16、 enrichment broth (RVSB) 标准菌株S. cho接种在10ml的胰蛋白胨大豆肉汤 ，于30 35培养18 24h。0.1ml菌培养液喷注于RVSB，于30 35培养12 24h。菌培养液涂抹于XLDA平板后，于30 35培养18 48h。 为确认检测条件，用胰蛋白胨大豆肉汤及RV 沙門氏菌增殖培養基，做空白实验。 培养后出现相关特征，判定为阳性。 标准菌种 培养基 菌落特征 Salmonella abony ACM 5080 (NCTC 6017) 木糖赖氨酸脱氧胆盐培养基 (XLDA) 红色，中心部显示黑点或不显示 培养前 菌落照片 15) 胰蛋白胨大豆肉汤 Trypt

17、ic soy broth (TSB) 培养后 标准菌株S. aur及 P. aer ，各接种在10ml的胰蛋白胨大豆肉汤 ，于30 35培养18 24h。S. aur培养液涂抹于甘露醇食盐琼脂；P. aer培养液涂抹于溴棕三甲铵琼脂，于30 35培养24 48h。 为确认检测条件，用胰蛋白胨大豆肉汤，做空白实验。 培养后出现相关特征，判定为阳性。 Staphylococcus aureus 标准菌种 培养基 菌落特征 NCTC 10788 (ATCC 6538) 甘露醇食盐琼脂 (MSA) 黄色带包围的黄色菌落 培养前 菌落照片 16) 溴棕三甲铵琼脂 Cetrimide agar (CTA)

18、 培养后 Pseudomonas aeruginosa NCTC 12924 (ATCC 9027) 溴棕三甲铵琼脂 (CTA) 绿色荧光物质的菌落 培养前 培养后 标准菌株P. aer 接种在10ml的胰蛋白胨大豆肉汤 ，于30 35培养18 24h。培养液涂抹于溴棕三甲铵琼脂，于30 35培养24 48h。 为确认检测条件，用胰蛋白胨大豆肉汤，做空白实验。 培养后出现相关特征，判定为阳性。 标准菌种 培养基 菌落特征 Pseudomonas aeruginosa NCTC 12924 (ATCC 9027) 溴棕三甲铵琼脂 (CTA) 绿色荧光物质的菌落 培养前 菌落照片 培养后 17)

19、荧光素琼脂 Fluorescein agar (FRA) 标准菌株P. aer 接种在10ml的胰蛋白胨大豆肉汤 ，于30 35培养18 24h。培养液涂抹于荧光素琼脂，于30 35培养24 72h。 为确认检测条件，用胰蛋白胨大豆肉汤，做空白实验。 培养后出现相关特征，判定为阳性。 标准菌种 培养基 菌落特征 培养前 菌落照片 18) 假单胞琼脂(PYA) Pyocyanin agar (PYA) 标准菌株P. aer 接种在10ml的胰蛋白胨大豆肉汤 ，于30 35培养18 24h。培养液涂抹于假单胞琼脂(PYA)，于30 35培养24 72h。 为确认检测条件，用胰蛋白胨大豆肉汤，做空白

20、实验。 培养后出现相关特征，判定为阳性。 Pseudomonas aeruginosa NCTC 12924 (ATCC 9027) 荧光素琼脂 黄色荧光物质菌落 培养后 标准菌种 培养基 菌落特征 Pseudomonas aeruginosa NCTC 12924 (ATCC 9027) 假单胞琼脂 (PYA) 蓝色荧光物质菌落 培养前 培养后 菌落照片 19) 甘露醇食盐琼脂 Manitol salt agar (MSA) 标准菌株S. aur 接种在10ml的胰蛋白胨大豆肉汤 ，于30 35培养18 24h。培养液涂抹于甘露醇食盐琼脂，于30 35培养24 72h。 为确认检测条件，用胰

21、蛋白胨大豆肉汤，做空白实验。 培养后出现相关特征，判定为阳性。 标准菌种 培养基 菌落特征 Staphylococcus aureus NCTC 10788(ATCC 6538) 甘露醇食盐琼脂 (MSA) 黄色带包围的黄色菌落 培养前 菌落照片 20) Baird-Parker 琼脂 Baird-Parker agar (BPA) 标准菌株S. aur 接种在10ml的胰蛋白胨大豆肉汤 ，于30 35培养18 24h。培养液涂抹于 Baird-Parker 琼脂，于30 35培养24 72h。 为确认检测条件，用胰蛋白胨大豆肉汤，做空白实验。 培养后出现相关特征，判定为阳性。 标准菌种 培养

22、基 菌落特征 Staphylococcus aureus NCTC 10788(ATCC 6538) Baird-Parker 琼脂 (BPA) 透明带包围的有光泽的黑色菌落 培养后 培养前 菌落照片 培养后 21) 营养琼脂 Nutrient agar (NA) 标准菌株 B. sub、C. alb、E. coli、S. cho、S. aur、P. aer ，每种菌株，放入两个平皿。用100灭菌生理食盐水水化(Re-hydrate)。营养琼脂配好后，事先灭菌30秒后，冷却至45，倒入上述平皿中，每平皿大约倒入1520ml。摇匀后冷却待凝固，倒放，于30 35培养22 26h。 为确认检测条件

23、，用灭菌生理食盐水，做空白实验。 培养后平板显示的菌落数应是接种菌数的1/2至2倍。 Bacillus subtilis NCTC 10400 (ATCC 6633) Candida albicans NCPF 3179 (ATCC 10231) Escherichia coli NCTC 12923 (ATCC 标准菌种 8739) Salmonella abony ACM 5080 (NCTC 6017) Staphylococcus aureus NCTC 10788 (ATCC 6538) Pseudomonas aeruginosa NCTC 12924 (ATCC 9027) 培养

24、前 培养后 菌落照片 22) 营养肉汁 Nutrient broth (NB) 标准菌株 B. sub、C. alb、E. coli、S. cho、S. aur、P. aer 接种在10ml的 营养肉汁，于30 35培养18 24h。培养液涂抹于下表的平板，于30 35培养18 24h。 为确认检测条件，用营养肉汁，做空白实验。 培养后出现相关特征，判定为阳性。 标准菌株 Bacillus subtilis NCTC 10400 (ATCC 6633) Candida albicans NCPF 3179 (ATCC 10231) Escherichia coli NCTC 12923 (AT

25、CC 8739) Salmonella abony ACM 5080 (NCTC 6017) Salmonella abony ACM 5080 (NCTC 6017) Staphylococcus aureus NCTC 10788 (ATCC 6538) 甘露醇食盐琼脂 (MSA) 黄色带包围者的黄色菌落 培养基 胰蛋白胨大豆琼脂培养基 (TSA) 添加抗生物质的沙氏葡萄糖琼脂培养基 (SDA) 伊红美蓝琼脂培养基 (EMBA) 木糖赖氨酸脱氧胆盐培养基 (XLDA) 亚硫酸铋琼脂 (BSA) 金属光泽菌落或在透明逛下显黑青色的菌落 红色，中心部呈现黑点或不呈现 培养前 黑色或绿色菌落 培

26、养前 培养后 培养后 培养前 培养后 培养前 微白色的菌落 培养后 菌落特征 微白色的稍微透明的菌落 培养前 培养后 菌落照片 培养前 培养后 Pseudomonas Aeruginosa NCTC 12924 (ATCC 9027 培养基中英文对照 Tryptic soy agar (TSA) Sabouraud dextrose agar (SDA) Lactose broth (LB) Eosin methylene blue agar (EMBA) MacConkey agar (MCA) MacConkey broth (MCB) Tryptic Soy Broth(TSB) Bri

27、lliant green lactose bile broth (BGLB) Selenite cystine broth (SCB） Xylose lysine deaoxycholate agar (XLDA) Bithmuth sulfite agar (BSA) Tetrathionate broth (TB) Triple sugar iron agar (TSIA) 培养前 溴棕三甲铵琼脂 (CTA) 绿色荧光物质的菌落 培养后 胰蛋白胨大豆琼脂培养基 沙氏葡萄糖琼脂培养基 乳糖肉汤培养基 伊红美蓝琼脂培养基 麦康凯琼脂培养基 麦康凯肉汤琼脂培养基 胰蛋白胨大豆肉汤 煌绿乳糖胆盐肉

28、汤 亚硒酸盐-胱氨酸肉汤 木糖赖氨酸脱氧胆盐培养基 亚硫酸铋琼脂 连四硫酸盐肉汤 三糖铁琼脂 Rappaport Vassiliadis Salmonella enrichment broth (RVSB) RV 沙門氏菌增殖培養基( RVS) Manitol salt agar (MSA） Cetrimide agar (CTA) Fluorescein agar (FRA) Pyocyanin agar (PYA) Baird-Parker agar (BPA) Nutrient agar (NA) Nutrient broth (NB) 甘露醇食盐琼脂 溴棕三甲铵琼脂 荧光素琼脂 假单胞琼脂(PYA) Baird-Parker 琼脂 营养琼脂 营养肉汁