牛奶中体细胞数及检测课件.ppt

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1、牛奶中体细胞数及检测方法,主要内容,牛奶中的体细胞数牛奶中体细胞数与乳房炎牛奶中体细胞数监控DHI牛奶中体细胞数的检测方法,2,一、牛奶中的体细胞数,牛奶中的体细胞数 Somatic Cell Count,简称SCC。是指每毫升牛奶中的体细胞数。主要由白细胞（巨噬细胞、淋巴细胞、多形核嗜中性白细胞）和少量的乳腺组织上皮细胞组成。大约93%99%的细胞是白细胞。,3,SCC的产生机制,4,SCC的意义,反映奶牛乳房健康状况 正常情况下，牛乳中SCC为20 40 万个/毫升。影响产奶量*陆静，董德宽.牛奶中高体细胞数反应了什么问题.上海奶牛,1998,2:21.,5,6,SCC增高对牛奶质量的影响

2、,影响牛奶SCC的因素,7,关于牛奶中SCC的规定,随着国际乳制品贸易的增加，发达国家和地区对体细胞数制定了严格标准。,8,SCC越低越好？,9,体细胞数不应低于免疫系统能够迅速反应有效抵抗病毒的程度，当感染发生时，迅速由血液转移至乳房，进行免疫。,二、体细胞数与奶牛乳房炎,乳房炎 奶牛乳房受到病原微生物感染或物理、化学等致病因子的刺激引起乳腺发炎的疾病。种类 急性乳房炎 慢性乳房炎 隐性乳房炎 发病率高达31%51%，且隐性乳房炎比例极高。,10,11,乳房炎临床表现及诊断,SCC与乳房炎关系,SCC增高意味着乳房炎的发生,12,预防乳房炎，控制SCC,环境卫生 牛场 牛舍 牛床科学饲养 加

3、强运动 避免机械损伤 日粮营养平衡 围产期护理牛群健康 防疫 养护 及时治疗 隔离病牛 淘汰慢性感染牛挤奶管理 规范使用、维护挤奶设备 正确的挤奶程序,13,三、牛奶中体细胞数的监控DHI,DHI（Dairy Herd Improvement)奶牛群体改良，又称奶牛生产性能测定。是在牛群遗传改良和牛群管理的基础，是进行牛群选育、公牛后裔测定、乳房炎防治、改进饲养管理、提高产奶性能等的关键措施。,14,DHI测试内容,15,DHI报告,16,乳房炎,为牧场管理提供经营管理第一手资料,通过体细胞数的变化,能够反映牧场管理水平及牧场经营情况。,DHI报告对控制乳房炎的指导,17,个体体细胞数 可判断

4、奶牛是否感染乳房炎 措施：及时处理患病牛，防止感染健康牛只群体体细胞数（Bulk Tand Somatic Cell Count，BTSCC）即大贮罐奶体细胞数，反映牛群整体卫生状况 措施：从挤奶设备、挤奶程序、卫生防疫、饲养管理上寻找问题,DHI报告对控制乳房炎的指导,18,前次体细胞数、本次体细胞数 二者的差异程度反应了治疗、管理的效果。1.本次SCC高于上次 治疗、管理效果不好或挤奶过度、挤奶时乳房受损 2.SCC持续升高 牛群中存在着隐性乳房炎，可能与挤奶程序和方法有关，在挤奶过程中不断有健康牛被感染。3.SCC忽高忽低 牛群中存在着临床型乳房炎，多为管理和环境因素造成的，改进管理加强

5、畜舍器械消毒工作即可避免。,间接检测方法 CMT法（加利福尼亚乳腺试验法）WMT法（威斯康辛乳腺炎试验）直接检测方法显微镜计数法 标准显微镜计数法 荧光显微镜计数法体细胞测定仪法 荧光光电计数法 电子粒子计数法,19,四、牛奶中体细胞数的检测方法,20,原理 利用CMT试剂破坏细胞结构，使细胞中的DNA暴露出来并与CMT试剂结合，产生沉淀、凝胶和颜色变化。,CMT试剂 十二烷基磺酸钠20g，氢氧化钠15g，溴甲酚紫0.15g，溶于1000mL蒸馏水中。,操作步骤,21,CMT法（加利福尼亚乳房炎测试法）,CMT点值与体细胞数,22,CMT法（加利福尼亚乳房炎测试法）,原理 与CMT法相类似。试

6、剂 同CMT试剂与CMT法区别 实验结果为测定值，客观性优于CMT法，但测定步骤相对较为复杂，所需时间也较长。,23,WMT法（威斯康辛乳腺炎试验法）,WMT法（威斯康辛乳腺炎试验）,操作步骤将一定量待测牛乳与等量试剂加入带有刻度的试管中混合810s将试管倾斜，让混合物排出15s后恢复垂直位置，等待1min。读取留在试管中的混合物的量，结果以mm记录。WMT数值与体细胞数存在对应关系，牛乳中体细胞越多，形成的胶体越多，读取的沉淀越高。,24,WMT法（威斯康辛乳腺炎试验）,WMT数值与体细胞数关系,25,原理 将待测鲜乳涂抹在载玻片上制成样膜，干燥、染色，显微镜下观察并计数被亚甲基蓝清晰染色的

7、体细胞。试剂 亚甲基蓝染色液：54mL 95%乙醇与40mL四氯乙烷混合摇匀后，于65水浴加热3min，取出后加入0.6g亚甲基蓝，混匀后冰箱冷却至4，加入6mL冰乙酸，混匀后砂芯漏斗过滤，常温保存。,26,标准显微镜计数法,27,标准显微镜计数法,操作步骤,原理 样品使用吖啶橙染色后，体细胞能清晰显示，使荧光细胞和其它荧光颗粒及背景更容易区分。试剂 吖啶橙染色液：0.1%（双蒸水）。缓冲液：以2%甲醛溶液配制四硼酸钠成0.02M。染色液/缓冲液混合液：吖啶橙染色液与缓冲液1:5混合，使用前混合，当天配制当天使用。,28,荧光显微镜计数法,29,荧光显微镜计数法,操作步骤,原理 样品在荧光光电

8、计数体细胞仪中与染色溶液混合后，由感应细胞核内脱氧核糖核酸染色后产生荧光的染色细胞，将其转化为电脉冲，经放大记录，直接显示读数。试剂 染色液、清洗液 均为仪器专用溶液，根据 仪器操作说明书配制。,30,荧光光电体细胞计数法,31,荧光光电计数法,操作步骤,原理 样品中加入甲醛溶液固定体细胞，加入乳化剂电解质混合液，将包含体细胞的脂肪球加热破碎，体细胞经过的狭缝时，由阻抗增值产生的电压脉冲数记录，读出体细胞数。试剂 固定液：0.02 g伊红Y与9.40 mL35%40%甲醛溶液混合，用水溶解后定容至100mL，混匀后用砂芯漏斗过滤，常温保存。乳化剂电解质混合液：125 mL 95%乙醇与20.0

9、 mL曲拉通X-100完全混匀，加入885 mL 0.09 g/LNaCl溶液，混匀后用砂芯漏斗过滤，常温保存。以上试剂也可使用仪器专用的试剂。,32,电子粒子体细胞计数法,33,电子粒子计数法,操作步骤,体细胞检测注意事项,样品的保存 样品采集后在26条件下保存，若6h内无法完成检测则应添加防腐剂，防止样品变质。,34,小结,CMT与WMT CMT法 简单、快速，特别适用牛场现场测定。WMT法 SCC是测定数，相对准确。但方法相对繁琐。标准显微镜法与荧光显微镜法 标准显微镜法 直接、可靠，许多国家列为标准方法。荧光显微镜法 背景更清晰，易于消除干扰。荧光光电体细胞仪法与电子粒子体细胞仪法 两种方法不分伯仲，准确快速，适合于批量样品测定。但荧光光电体细胞计数法干扰少。建议：尽快建立牛奶中体细胞数的标准方法，将牛奶中体细胞数纳入国家的监控中。,35,36,谢谢！,