固定液和保存液.docx
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1、固定液和保存液固定液和保存液 用固定液固定动植物整体或它的一部分组织和气管等,能保存组织内细胞的形态、结构及其组成,尽量使它近于生活状态。固定液一般有防腐和保存的作用,分为单纯固定液和混合固定液。单纯固定液中最重要的有乙醇、福尔马林、醋酸、苦味酸、铬酸、重铬酸钾、升汞等,前两种固定液是中学生物实验室常用的。单纯固定液的优点是简便,缺点是有一定的局限性,不易达到理想的固定要求。混合固定液有几种不同的药液按一定的比例混合而成,使各自的优缺点相互补充,成为较完美的固定液。这种固定液的制备虽比较麻烦,但是效果比较好。常用的混合固定液是醋酸-酒精混合液、福尔马林-醋酸-酒精液、包因氏固定液等。 常用的保
2、存液大致跟固定液相同,主要是福尔马林、酒精、甘油以及由这些药物按比例配制成的各种混合液。有时按特殊保存的需要,再保存液中增加某些药品。 1、福尔马林 福尔马林在固定组织标本时杀菌能力强,所以防腐性强,渗透力大,固定得快。永福尔马林固定精细的解剖标本时,要跟甘油、酒精、石炭酸等混合使用。 固定液常用的浓度是510%。 保存液常用的浓度是510%。用福尔马林作保存液,效果好且价格低廉。 在配制福尔马林溶液时,应将3740%的甲醛作为整个溶质来配。例如配制5%福尔马林是取市售3740%甲醛溶液5毫升跟95毫升蒸馏水混合。实际上甲醛含量只有1.92%,这样的配法已成为一般实验室常用的惯例。 注意事项:
3、 福尔马林业在长期贮存中会产生蚁酸,可适量的加入碳酸钙或碳酸镁等碱性物质进行中和。 福尔马林业作为保存液会慢慢挥发而致使浓度降低,并且福尔马林液再保存中往往形成多聚甲醛,使浸液变浊,影响观察。所以,根据一定保存期的情况,可适当增加福尔马林液的浓度或更换新液,以防标本变坏。其中如有白色沉淀物,加热后可使它溶解。 市售的福尔马林液常带有酸性,能腐蚀石灰质,因此,最好不用福尔马林液浸制有石灰质外壳的动物。 2、酒精 酒精也是常用的固定液,它有强烈的杀菌作用,对组织材料的渗透力较大,固定的快。但是,它的脱水作用较强,在高浓度的酒精中容易使材料显著硬化和收缩。一般用于固定浸制标本材料,分一级或二级固定,
4、即70%或50%与70%的酒精。有些小型材料或精细的解剖材料,最好用二级或三级固定,即用50%、70%或50%、60%、70%的酒精,最后再进行保存。从经济效果来考虑,一般酒精应跟福尔马林液等固定液混合使用。 市售的工业用酒精浓度是95%左右,因此用时要重新配制。保存液的浓度通常是70%。 注意事项: 在固定材料时要注意固定的效果,小型材料一般放在固定液中固定。大型材料必须先往体内注射一部分固定液,再放入固定液中,防止材料内部腐怀变质。用福尔马林液固定也是如此。 高浓度的酒精有脱水、脱脂作用。含有多量脂肪或拟脂标本等都不宜用较高浓度的酒精作保存液。 为了防止酒精使标本硬化,保存一些精细的材料或
5、解剖标本时,因加入少量甘油,因为甘油具有润软组织的作用。 忌跟铬酸、锇酸和中铬酸钾等氧化剂配合。 3、醋酸 醋酸即乙酸,纯醋酸在低于16.7摄氏度时会凝成冰状固体,所以叫冰醋酸。醋酸能很快穿透组织,因为它不能沉淀细胞质中的蛋白质,组织不会硬化。一般常跟酒精、福尔马林、铬酸等容易引起组织变硬和收缩的液体混合,以起到相互抵消的作用。 醋酸固定液的常用浓度是0.3%5%。 4、苦味酸 苦味酸是一种黄色结晶,能溶于水、酒精和苯。苦味酸也能沉淀一切蛋白质,穿透较慢,固定后,组织收缩明显,但不使组织硬化。 苦味酸固定液可以在100毫升蒸馏水中加入苦味酸约1.5克,制成饱和水溶液。固体苦味酸易爆,长制成饱和
6、水溶液保存。 5、升汞 升汞又叫氯化汞,是白色粉末,以针状结晶为最纯。通常固定时用饱和水溶液,有时也用70%酒精作溶剂,不单独用作固定剂。升汞的穿透力较弱,通常用于小型材料,对蛋白质有强烈的沉淀作用,硬化程度中等。 固定液用饱和溶液,浓度约为7%。 6、卡尔氏液 配方 95%酒精 170毫升 蒸馏水 280毫升 福尔马林 60毫升 冰醋酸 20毫升 冰醋酸要在临用前加入。 这时极好的昆虫保存液,常用来杀死和保存小型、身体柔软的种类入螨、蜈蚣、马陆等。在这溶液里加入少量甘油,能防止虫体变脆。 7、卡诺氏液 配方 纯酒精 6份 冰醋酸 1份 氯仿 3份 这种固定液能固定细胞质和细胞核,尤其适宜于固
7、定染色体,所以多用于细胞学的质片,还用来固定腺体、淋巴组织以及原生动物的胞壳等。这种固定液穿透得快,因此一般小块组织固定2040分钟,大型材料不超过34小时。固定后用95%或纯酒精洗涤,换液两次,移到石蜡中或用80%酒精保存。 8、吉尔桑氏液 配方 60%酒精 50毫升 冰醋酸 2毫升 80%硝酸 7.5毫升 升汞 10克 蒸馏水 440毫升 这是常用的固定液,适用于肉质菌类,特别是柔软胶质状的材料如木耳等,也广泛用于无脊椎动物和一般组织和蛙胚的固定。固定时间1820小时,然后用50%酒精冲洗材料,除去升汞。如果用水冲洗,会使材料膨胀。混合液保存24小时后失效。 9、福尔马林-醋酸-酒精溶液液
8、 配方 50%酒精 85毫升 福尔马林 10毫升 冰醋酸 5毫升 这种固定液适用于固定一般植物茎、叶组织,昆虫和甲壳类动物。液组织在这溶液里固定12小时,木质化组织要固定1周,材料也可在此液中长期保存。固定后的材料放在50%酒精中冲洗12次。 4、细胞质染色剂 配方一 伊红染液 伊红染液一般配用水溶液和酒精溶液两种。 取1克伊红,溶于99毫升蒸馏水中,即成1%伊红水溶液。 取1克伊红,溶于99毫升70%酒精中,即成1%伊红-酒精溶液。 配方二 甲基蓝染液 取1克甲基蓝,溶于29毫升70%酒精中,加入70毫升蒸馏水,即成1%甲基蓝染液。 配方三 亮绿染液 取0.5克亮绿,溶解在100毫升蒸馏水中
9、,即成0.5%亮绿溶液。 5、细胞核染色剂 配方一 甲基绿染液 取1克甲基绿,溶于99毫升蒸馏水中,加入1毫升冰醋酸。本染液能染细胞核,还用来染木质化细胞壁。 配方二 龙胆紫染液 取1克龙胆紫,溶于少量2%醋酸溶液中,加2%醋酸溶液,直到溶液不呈深紫色止。 配方三 美蓝染液 取0.5克美蓝,溶于30毫升95%酒精中,加100毫升0.01%氢氧化钾溶液,保存在棕色瓶内 。 此溶液能染细胞核,还用来染细菌、血和神经组织等。 配方四 硼砂-洋红染液 取4克硼砂,溶于96毫升蒸馏水中。再加入2克洋红,加热溶解后煮沸30分钟,静置3日,用100毫升70%酒精冲淡,放置24小时后过滤。 此染液能染细胞核,
10、还用来染糊粉粒和一般动物、植物的整体染色,如水螅、血吸虫等整体标本。 配方五 德氏苏木精染液 甲液 取1苏木精,溶于6毫升无水酒精中,即成苏木精-酒精溶液。 乙液 取10克铵矾溶于90毫升蒸馏水中,即成10%铵矾水溶液。 取甲液逐滴加入到乙液中,用纸遮盖,放在阳光明亮处,使它充分氧化。34天后将溶液过滤,在滤液中加入25毫升甘油和25毫升甲醇,保存在密闭玻璃瓶内。静置12个月,待该液颜色变深时过滤,可长久保存。 本染液是染色体的优良染色剂,除能染细胞核外,还用来染纤维素、细胞壁和动植物组织。 配方六 席夫试剂 称取0.5克碱性品红,加到100毫升煮沸的蒸馏水中,再微微加热5分钟,不断搅拌,使它
11、溶解。在溶液冷却到50摄氏度时过滤,滤液中加入10毫升1N盐酸。再冷却到25摄氏度时加入0.5克偏重亚硫酸钠或无水亚硫酸氢钠。把溶液装入棕色试剂瓶内,摇荡后,塞紧瓶塞,放在黑暗中24小时。在溶液颜色退到淡黄色时,加入0.5克活性炭,用力摇荡1分钟,过滤后把滤液贮在棕色试剂瓶内,塞紧瓶塞,滤液应该是无色的。在使用时勿让溶液长时间暴露在空气中和见光。如溶液变成红色,即失去染色能力。 碱性品红是较强的核染色剂,在孚尔根氏反应中作为组织化学试剂,以检查DNA。 6、染色体染色剂 配方一 醋酸-洋红染液 取45毫升冰醋酸,加蒸馏水55毫升,煮沸后徐徐加入洋红1克,搅拌均匀后加入1颗铁锈钉,煮沸10分钟,
12、冷却后过滤,贮存在棕色瓶内。 配方二 醋酸-地衣红染液 取45毫升醋酸,跟55毫升蒸馏水相混,加热,徐徐加入地衣红粉末12克,搅拌溶解后,缓缓煮沸2小时。冷却后过滤,贮存在棕色瓶里。 配方三 龙胆紫染液 取1克龙胆紫,用少量蒸馏水溶解后,加蒸馏水,稀释到100毫升,保存在棕色瓶内。 配方四 甲苯胺蓝染液 取0.5克甲苯胺蓝,溶解在100毫升蒸馏水中,即成0.5%甲苯胺蓝水溶液。 7、线粒体染色剂 配方一 詹钠斯绿B(Janus green B)酒精饱和溶液 取125毫升詹钠斯绿B,加入到62.5毫升无水酒精中,搅拌,即成烟鲁绿B酒精饱和染液。 取詹钠斯绿酒精饱和染液按1:30000比例加蒸馏水
13、稀释,用来染原生动物线粒体。 (2)取詹钠斯绿酒精饱和液,按1:10000比例加蒸馏水稀释,用来染新鲜蛙血线粒体。 配方二 詹钠斯绿B中性红染液 先配制詹钠斯绿B和中性红酒精饱和液。詹钠斯绿酒精饱和液见配方一。中性红酒精饱和液配制方法:取125毫升中性红,加入到50毫升无水酒精中,搅拌。 在10毫升生理盐水中,加入詹钠斯绿B酒精饱和液0.71毫升,中性红酒精饱和液2毫升,混合。 詹钠斯绿B稀释液是活体染液。 8、脂肪染色剂 苏丹染液 取0.1克苏丹,溶于20毫升95%酒精中,即成0.5%苏丹染液。 这染液能染脂肪,还能染木栓、角质层。 9、血液染色剂 配方一 瑞氏染液 取瑞氏染料粉末0.1克和
14、甲醇60毫升。把染料放在研钵内,加少量甲醇研磨,使染料溶解,然后把溶解的染料倒入干净的棕色玻璃瓶。并用完甲醇为止。配制好的染液在室温中保存,即可使用。新鲜配制的染液偏碱性,放置后呈酸性,染液贮存愈久染色愈好。这染液的适宜pH值是6.46.8。因此,染色时加入缓冲液,可维持一定的酸碱度,使染色效果更好。 这种染液除能染血液,还能染疟原虫。 瑞氏染料可以自制。在100毫升0.5%碳酸氢钠水溶液里加入1克美蓝,溶解后放在锅内,蒸上1小时,取出冷却后过滤。在滤液里加入0.1%伊红水溶液500毫升,随加、随搅拌,使混合液呈紫色。静置一夜后,用滤纸过滤。滤纸上的沉淀物,在室内风干或放在干燥箱内,充分干燥后
15、研磨成粉末,即成瑞氏染料。 配方二 甲基紫染液 取甲基紫0.5克,加到100毫升生理盐水中,溶解后加入冰醋酸0.02毫升。 10、吸虫染色剂 梅耶氏明矾-洋红染液 取铵明矾5克,溶于95毫升蒸馏水中,再加入0.5克洋红酸,加热溶解,冷却后过滤。在滤液中加入少量防腐剂,如麝香草酚、樟脑粉、水杨酸钠、苯酚等,以防生霉。 这种染液适合于染小型动物材料,如吸虫等寄生虫的整体,也能染高等植物的表皮和蕨类植物的原叶体。 11、活体染色剂 配方一 中性红染液 先配成1%中性红水溶液。取这种溶液1毫升,用0.6%生理盐水稀释到50毫升,即成0.02%中性红水溶液,贮存在棕色瓶里,放在黑暗处。 本染液用来显示原
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