发酵工程期末考试重点整理.docx
《发酵工程期末考试重点整理.docx》由会员分享,可在线阅读,更多相关《发酵工程期末考试重点整理.docx(14页珍藏版)》请在三一办公上搜索。
1、发酵工程期末考试重点整理发酵工程:以微生物、动植物细胞为生物作用剂进行工业化生产的工程,包括发酵工艺和发酵设备。 主要研究内容:菌种选育与构建、大规模培养基和空气的灭菌、大规模细胞培养过程、细胞生长和产物形成动力学、生物反应器的优化设计和操作、发酵产品的分离纯化过程中的技术问题等。 发酵工程原理:指导发酵产品研究与开发,发酵工厂设计与建设以及发酵生产实践的理论。 初级代谢:是许多生物都具有的生物化学反应,蛋白质、核酸的合成等,均称为初级代谢。 初级代谢产物:指微生物通过代谢活动所产生的、自身生长和繁殖所必需的物质,如氨基酸、多糖等。 次级代谢:微生物以初级代谢产物为前提合成的对微生物本身的生命
2、活动没有明确功能的物质的过程。 自然选育:不经过人工处理,利用菌种的自然突变而进行菌种筛选的过程。 杂交育种:将两个基因型不同的菌株经吻合使遗传物质重新组合,分离和筛选具有新性状的菌株。 诱变育种:利用物理、化学等诱变剂处理均匀而分散的微生物细胞群,在促进其突变率显著提高的基础上,采用简便、高效的筛选方法,从中挑选出少数符合目的的突变株,以供科学实验或生产实践使用。 原生质体融合育种:两个亲本的原生质体在高渗条件下混合,由聚乙二醇作为助融剂,使它们互相凝集,发生细胞融合,接着两个亲本基因组由接触到交换,从而实现遗传重组。 前体:某些化合物加入发酵培养基中,能直接被微生物在生物合成过程中结合到产
3、物中去,而自身结构并没有明显变化,产物的产量却因前体的加入而有较大的提高。 抑制剂:某些化合物可以抑制特定代谢途径的进行,使另一种代谢途径活跃,获得人们所需产物的积累。 如生产甘油加抑制剂亚硫酸钠,它与代谢过程中的乙醛生成加成物。这样使乙醇代谢途径中的乙醛不能成为NADH2(还原型辅酶I)的受氢体,而使NADH2在细胞中积累,从而激活磷酸甘油脱氢酶的活性,使磷酸二羟基丙酮取代乙醛作为NADH2的受氢体而还原为磷酸甘油,其水解后即形成甘油。 促进剂:指那些既不是营养物质又不是前体,但却能提高产量的添加剂,如加巴比妥盐能使利福霉素单位增加,并能使链霉菌推迟自溶,延长分泌期。 灭菌:用化学或物理的方
4、法杀灭或除掉物料及其器皿中所有的生命体。消毒是指杀死病原微生物的过程。 分批灭菌:培养基置于发酵罐中加热,达到预定温度后维持一段时间,再冷却到发酵所需温度的灭菌。 连续灭菌:在发酵罐外连续不断地进行加热、维持和冷却,同时把灭完菌的培养基通入已灭过菌的发酵罐的灭菌方式。 对数残留定律:在微生物死亡过程中的任一时刻,活菌数的减少速率与该时刻残留的活菌数成正比,这就是微生物死亡的对数残留定律。微分式为:-dN/d=kN;积分式为:=log(N0/Ns) N0开始灭菌时的活菌数 Ns灭菌结束时残留菌数。 单种法:一个种子灌接种一只发酵罐的接种方法。 双种法:用两只种子灌接种一只发酵罐的接种方法。 倒种
5、法:从一只发酵罐中倒出适宜的,适量的发酵液给另一个发酵罐做种子的方法。 生长关联型:产物生成与菌体生长之间有平行的准量关系。这样的产品或为菌体本身或初级代谢产物。 部分生长关联型:菌体生长出现两个高峰,第一个生长高峰与产物合成无平行的准量关系,第二个生长高峰与产物合成有平行的准量关系。 非生长关联型:细胞生长与产物合成无平行的准量关系,只与菌体的总量有关。大部分次级代谢产物属于这一类。 凝聚:是在中性盐作用下,由于双电层排斥电位的降低,而使胶体体系不稳定的现象。 絮凝:在某些高分子絮凝剂存在下,基于架桥作用,使胶粒形成粗大的絮凝团的过程,是一种以物理的集合为主的过程。 如何从一个菌种得到另一个
6、菌种: 诱变剂处理:采用辐射、化学试剂等因素处理细菌。 淘汰野生型:抗生素法或菌丝过滤法。 检出缺陷型:用一个培养皿即可检出,有夹层培养法和限量补充培养法;在不同培养皿上分别进行对照和检出的有逐个捡出法和影印检出法。 鉴定缺陷型:可借生长谱法进行。 如何从土壤中筛选芽孢杆菌? 采样-预处理-增殖培养-纯种分离-菌落选择-初筛-复筛-野生菌株-性能鉴定-菌种保藏 采样用取样铲,将表层5cm左右的浮土除去,取5-25cm处的土样1025 g,装入事先准准备好的塑料袋内扎好、编号并记录地点、土壤土质、植被名称、时间及其他环境条件。悬液稀释预处理从土壤中分离芽孢杆菌时,由于芽孢具有耐高温特性,100很
7、难杀死,要在121才能彻底死亡。 分离:培养基营养成分、PH、选择性抑制剂;培养: 注意温度、PH、氧气需求及培养时间; 菌落选择 :铺菌法、复印法;复筛 :生长速率、底物消耗、产物合成的测定。 菌种保藏原理、常用方法 原理:菌种保藏主要是根据菌种的生理生化特点,人工创造条件,使孢子或菌体的生长代谢活动尽量降低,以减少其变异。一般可以通过保持培养基营养成分在最低水平,缺氧状态,干燥和低温,使菌种处于休眠状态,抑制其繁殖能力。 常用方法:斜面冰箱保藏法:三个月。石蜡油封存法:六个月。沙土管保藏法:产孢子或芽孢的微生物。真空冷冻干燥保藏法:需要一定设备,要求比较严格。液氮超低温保藏法:通常在微生物
8、孢子或营养细胞培养物中加入20%的甘油,将其保存在液氮或-80冰箱中,可保藏数年而不死。 培养基主要营养成份及其生理功能 培养基的成分:分为碳源、氮源、生长因子、无机盐及微量元素、水和能源。碳源,细胞及其产物的碳架结构和能量的来源。氮源:主要用于构成菌体细胞物质和含氮代谢物等的氮素来源。生长因子:微生物代谢必不可少且不能用简单的碳源或氮源自行合成。无机盐元素:P、S、Ca、Mg、Na、K、Fe、Cl等。P:核酸、ATP 辅酶、代谢中间体的组成成分。在代谢途径的调节方面,起着重要作用。S:蛋白质、辅酶、生物素、谷光甘肽等组成成分。是含硫氨基酸的组成成分和某些辅酶的活性基。Fe:细胞色素、过氧化氢
9、酶的组成成分。Mg、Ca:酶的辅基、激活剂。K、Na:调节渗透压。微量元素:Zn、Co、Mn、Cu等,主要是酶的辅基和激活剂。水分:是营养物质,因为离开水生命活动即停止;参与代谢活动,如水解与合成多糖、蛋白质等均有水参加反应;是环境条件,许多反应需要在水中进行;是细胞物质的连续相。能源:为微生物提供生长代谢所需的能源。微生物根据其生理类群的不同,其能源物质也不同,有时能源物质是独立于碳源之外的。 发酵工业中常用碳源及其优缺点 常用的碳源:糖类、油脂、有机酸、低碳醇、烃类。在特殊情况下,蛋白质水解产物或氨基酸等也可被某些菌种作为碳源使用。 糖类:a:速效碳源,如葡萄糖等。优点:易于利用。缺点:高
10、浓度会造成抑制,利用过程中产酸速度快,使pH下降。但是过多的葡萄糖会过分加速菌体的呼吸,以致影响某些酶的活性,从而抑制微生物的生长和产物的合成。 b.长效碳源,如淀粉等,优点是长效,边糖化边利用,不会造成高浓度抑制,且价格较便宜。缺点是增大培养基的粘度且有些微生物不具有淀粉酶和糖化酶,不能利用这类碳源。 油脂:优点是高还原态能源和碳源,同时也是消沫剂。缺点是脂肪的分解利用,可造成有机酸积累,使培养液pH下降。 有机酸盐:如乙酸盐等,也可做速效碳源,缺点是成本较高,利用后pH上升。 醇类:如乙醇,低浓度是可被少数微生物作碳源,缺点是成本高。 烃类:石油微生物的碳源,其他微生物一般不能利用。近年来
11、随着石油工业的发展,微生物工业的碳源也有所扩大,一些烃类物质已用于发酵工业中。 如何使培养基有一个适当的PH缓冲能力? 生理酸性、碱性盐和pH缓冲剂的加入和搭配,以使pH值在发酵过程中不易超过一定范围。先要了解该菌的营养类型和生态类型。B)确定培养基的类型和划定培养条件的范围。C)进行培养基成分与培养条件的选择:(a) 要根据供试菌的营养需要,包括生长需要和合成产物的需要。(b) 比例范围,如C:N比。(c)培养基物态。(d) pH缓冲能力。(e)培养温度。(f)溶氧。原料价格、来源、加工方式。2.研究方案设计:选择因子与水平,先选因子后选水平 选择适宜的正交表,或者响应面方法,如爬坡法。填写
12、表格,配制培养基,准备培养条件。建立检验指标与方法。3.操作及注意事项:摇瓶规格要一致,培养基要准确。不能染菌。种子液要混匀,加量要准确。检验结果要准确。4.计算与分析:确定培养基配方与环境条件控制指标。5.验证试验与适当调整 分批灭菌的简要步骤 分批灭菌的操作要点a)配料:将培养基在配制罐中配好后,通过专用管道输入发酵罐中。b)升温阶段:开动搅拌系统,先用夹套或蛇管预热(尾气开),当温度升温到90-100时,停止搅拌,三路进气,同时三路排气。升温过程应尽可能快一些,以利于营养物质的保持。c)保温阶段:温度达到预定温度后,关小进汽、排汽阀门,按照罐温变化情况调节各路进汽与排汽量,使罐温维持在预
13、定灭菌温度之上12度范围内。d)冷却阶段:灭菌时间达到后,关闭所有与发酵罐直接相通的阀门,立即引入无菌空气保压,开搅拌、排气阀,引入冷却水冷却。 典型空气除菌的工艺流程: 采气-前置过滤器-空压机-储气管-冷却器-油水分离器-加热器-总过滤器-分过滤器-发酵罐 a) 采气:高度每上升10米,含菌数下降一个数量级,因此最好采集一定高度的空气。 b) 前置过滤:除去大颗粒沙土、纤维等杂物,以防损伤空压机。 c) 空压机:这是一个空气驱动设备,需要的能耗很大。 d) 储气罐:消除往复式空压机产生的气流脉冲。 e) 冷却器:空气经冷却后才能通入发酵罐。 f) 油水分离器:冷却后的空气温度低于漏点后,即
14、有水滴析出。 g) 加热器:通过加温使相对湿度降下来。 h) 总过滤器:为过滤除菌的主要设备, i) 分过滤器:为了保险起见,还要进行一次过滤。则空气的无菌度、温度、湿度即可达到要求。 常用的灭菌方法及其适应性如何 化学灭菌:一些化学药剂能使微生物中的蛋白质、酶及核酸发生反应而具有杀菌作用。常用的化学药剂有甲醛、氯、高锰酸钾等。化学灭菌法不用于培养基的灭菌。但染菌后的培养基可以用化学药剂处理。 射线灭菌:利用紫外线、高能电磁波或放射性物质产生的射线进行灭菌的方法。最但紫外线的穿透力低,所以仅用于表面消毒和空气的消毒。微波灭菌设备的兴起,为灭菌提供了新的选择。 干热灭菌:干热灭菌常用的干热条件为
15、在160下保温1 h:干热灭菌不如湿热灭菌有效。一些要求保持干燥的实验器具和材料(如培养皿、接种针等)可以用于热灭菌, 湿热灭菌:湿热灭菌即利用饱和水蒸气进行灭菌。容易使蛋白质凝固而杀火各种微生物,同时,蒸汽的价格低廉,来源方便,灭菌效果可靠。所以培养基灭菌、发酵设备及管道的灭菌,普遍采用湿热灭菌。 过滤除菌:过滤除菌即利用过滤方法截留微生物,达到除菌的目的。只适用于澄清流体的除菌。 如何判断菌种的质量。 A)pH;B) 菌体形态、浓度;C) 培养基外观、气味;D) 产物含量、酶活力;E) 无杂菌 生长关联型、部分生长关联型、非生长关联型发酵 生长关联型:产物生成与菌体生长之间有平行的准量关系
16、。产物直接来源于产能的初级代谢,菌体生长与产物形成不分开。氯霉素、杆菌肽等次级代谢产物的发酵也属此类。 部分生长关联型:菌体生长出现两个高峰,第一个生长高峰与产物合成无平行的准量关系,第二个生长高峰与产物合成有平行的准量关系。这类产品有丙酮丁醇、丙酸、延胡索酸、谷氨酸等。 非生长关联型:细胞生长与产物合成无平行的准量关系,只与菌体的总量有关。产物的形成和初级代谢是分开的。大部分次级代谢产物属于这一类。如多数抗生素、色素、毒素、超量分泌的维生素等。 分批发酵、补料分批发酵、连续发酵 分批发酵:指在一封闭培养系统内含有初始限制量的基质的发酵方式。在这一过程中,除了氧气、消泡剂及控制pH的酸或碱外,
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 发酵 工程 期末考试 重点 整理
链接地址:https://www.31ppt.com/p-3353424.html