细菌菌落总数的测定ppt课件.ppt

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1、细菌菌落总数的测定周小林副教授,水处理微生物,教学内容,1.细菌总数是水质污染的重要指标；2.稀释平板培养法；3.检测各环节操作规范。,细菌菌落总数的测定,教学目标,（1）知识目标,水质污染与细菌总数的关系；平板培养计数原理；样品稀释的方法；平板制作与培养方法计数与报告方式。,（2）技能目标,掌握样品稀释的操作方法；熟练进行无菌操作；规范制作平板；能正确控制培养条件；能正确计数与报告。,（3）素质态度要求,态度端正，积极主动学习，严守操作规范，团结协作。,细菌菌落总数的测定,一、细菌总数是水质污染的重要指标,细菌数量与污染程度间具有相关性。水体污染主要涉及生活污水、人畜粪便、农业生产污染、工业

2、污染等，污染物质中除去部分工业污染物外大多利于细菌的生长。污染物质的直接检测有较大的困难，而细菌检测相对容易，因此常用细菌数量作为水质状况的主要指标之一。对于不利于细菌生长的污染物，常需检测对应专门微生物及污染物含量的直接检测。,细菌菌落总数的测定,二、稀释平板培养计数法,细菌的个体微小，直接观察、计数困难；单个细菌经过培养可长成肉眼可见的菌落；要设法避免多个细菌长成1个菌落，常需对样品进行稀释处理。,稀释平板培养菌落,细菌菌落总数的测定,1.测定的程序：样品稀释接种平板培养菌落计数报告,细菌菌落总数的测定,2.材料准备：培养皿、试管、移液管、锥形瓶等玻璃器皿的灭菌；制作营养琼脂培养基：蛋白胨

3、10g、牛肉膏3g、氯化钠5g、琼脂15g，水1000mL；pH7.47.6，121灭菌15min。制备无菌水。,细菌菌落总数的测定,3.无菌操作（1）保证除样品外所有需使用的材料无菌（2）无菌操作环境净化工作台：紫外灯提前开放0.5h以上，放入样品与材料需70%酒精表面消毒开放空间：减小空气流通（闭窗、减少人员走动等）；喷洒70%酒精净化空间；在酒精灯火焰上方无菌区操作（高度以不烫手为宜）,净化工作台,酒精灯无菌区操作,细菌菌落总数的测定,（3）无菌操作规范试管、锥形瓶等无菌用具在无菌区打开，在此范围外必需封闭（基本原则），在无菌区外污染后不得再次使用；接种工具、涂抹棒等灭菌后即时在无菌区使

4、用，区外污染后需再灭菌使用（注意灭菌后需在无菌区冷却后使用，以免烫死微生物而取不到到活的微生物）。,细菌菌落总数的测定,1.分装无菌水取数支无菌试管，标记101、102、,每试管分装9ml无菌水或无菌生理盐水。（也可分装好后再灭菌）稀释所需的数量级根据样品中微生物量的估计而定，一般轻度污染水稀释到103，重度污染水可稀释到105、106。,三、样品的稀释,主要针对样品中含较多微生物的水样（水源水、污水）；自来水、饮用水一般不需稀释，可直接取样培养。,细菌菌落总数的测定,2.梯次稀释取混匀水样1ml放入标记101试管中，充分振荡混匀，得101稀释液；取101稀释液1ml放入标记102试管中，充分

5、振荡混匀，得102稀释液；，依次稀释到所需稀释浓度。,细菌菌落总数的测定,3.注意事项取液量保证准确；稀释样要充分混匀；保证无菌操作（防止外源污染），但加样时注意不要太近火焰（杀死其中微生物）。,混匀器,细菌菌落总数的测定,1.培养数量不稀释样：样品、无菌水（无菌对照），共2个培养，每个培养需培养3个平板（重复）；需稀释样：最大稀释样及前两个稀释样、无菌水，共4个培养，每个培养需培养3个平板（重复）；预先在培养皿底面标记清楚培养稀释度、操作人、时间等信息。,四、接种培养,培养皿标记,细菌菌落总数的测定,2.接种平板2.1 混合平板法取各稀释样（无菌水）1ml放入无菌培养皿中，3个重复（可在稀释

6、的操作同时取）；倒入适温培养基（50左右，冷却到不烫手为宜），每皿培养基倒入量一般9cm培养皿15ml左右（培养皿平放时倒入一半至2/3面积左右）；混匀（倒培养基时培养皿适度倾斜，桌面适度旋转，但不得使培养基附着到培养皿侧面）；静置冷却成平板，翻转放置。,细菌菌落总数的测定,2.2 平板涂布法先制作平板；取样品（无菌水）0.1ml放入平板上，涂抹棒均匀涂抹平板表面，直至无残存样品（无菌水）；翻转放置。,平板涂布,细菌菌落总数的测定,2.3注意事项保证无菌操作要求，同时注意不得影响样品中的微生物（培养基不得太烫，取样时不要离火焰太近）；制作平板时培养基不得沾附底面之外的侧面甚至盖上，未凝固前不得

7、翻转；不同稀释度不得使用同一移液管，防止交叉影响及污染；平板涂布法中，最好先在净化工作台中提前制作平板，并放置一段时间（2d左右），以使表面稍干燥便于涂布。,细菌菌落总数的测定,3.培养培养温度为36，培养时间24h；选用普通电热恒温培养箱，也可选用生化培养箱或霉菌培养箱；平板培养基一面朝上，不可颠倒；根据培养时间要求及时取出进行后续处理。,细菌菌落总数的测定,1.菌落计数方法观察方法：直接肉眼观察计数，必要时用放大镜、菌落计数仪观察，防止遗漏。特殊情况的处理：若某平板有较大片状菌落生长且超过一半面积时，此平板则不宜作计数用；片状菌落小于一半面积，且其余菌落分布又很均匀时，可取平板一半面积计菌落数，再乘以2得本平板菌落数。,五、菌落计数与报告,细菌菌落总数的测定,2.不同稀释度的选择与报告,细菌菌落总数的测定,3.报告方式菌落数在100以内，按实际数据报告；大于100时，采用2位有效数字，在有效数字后的位数，以四舍五入方法计算；数值较大时，数字后可用10的指数表示。,细菌菌落总数的测定,四、任务考核,细菌菌落总数的测定,谢谢！,