荧光原位杂交更新课件.ppt
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1、简 介,原位杂交技术(in situ hybridization,ISH)Gall和Pardue 1969年建立。用标记的DNA或RNA作为探针,对组织细胞内的核酸或有丝分裂中期的染色体进行原位检测和观察。最初的探针大多以同位素3H、32P等标记,但因同位素标记探针对人体有放射损害、实验周期长、放射自显影的分辨率有限、环境污染等缺点,给研究及实际应用带来了诸多不便。,荧光原位杂交技术(Fluorescence in situ hybridization,FISH)利用荧光物质标记探针(直接或间接),再进行杂交,可通过荧光显微镜对靶序列进行定性、定位和定量分析FISH技术的应用已经证实或发现了用
2、经典细胞遗传学方法无法证实或发现的肿瘤染色体改变,成为衔接细胞遗传学和分子遗传学之间的一座桥梁。开创了一个新的学科分子细胞遗传学。,杂交流程,a.两要素:探针和靶序列b.标记探针 直接标记和间接标记c.变性 探针和靶序列成为单链d.混合杂交e.间接标记的探针需连接荧光基团的步骤,F I S H,荧光原位杂交特点,与其它原位杂交技术相比,FISH的优点:经济安全,快速方便;敏感性高,特异性强,背景低;宜于多靶杂交,对同一标本同时进行多个探针杂交,不同的探针可以显示不同的荧光颜色;使用G带玻片可作出回顾性分析;缺点:不能达到100%杂交,特别是在应用较短的cDNA探针时效率明显下降。,基因特异探针
3、靶向每条染色体只有一个拷贝的DNA序列。主要用于间期或中期染色体中识别染色体易位、倒位、重复和缺失、邻近基因综合征、标记染色体和染色体扩增等,可检测基因的扩增和重排。,常用探针类型 基因特异探针,常用探针类型 重复序列探针,重复序列探针的结合位点是基因组中多拷贝的短重复碱基对序列(例如着丝粒和端粒探针)所在的染色体区域。着丝粒常常是A-T丰富区,而端粒已知含有TTAGGG序列。由于重复序列相对容易制备和分辨率较高(0.5Mb),这种FISH被普遍用于筛查一般的染色体非整倍体、亚端粒缺失和标记染色体。,21三体FISH,常用探针类型 WCP探针,全基因组绘画(WCP)探针是一种复合DNA探针。除
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