临床免疫学检验第五课后题重点.docx

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1、临床免疫学检验第五课后题重点第四章 1. 杂交瘤技术原理：以聚乙二醇为细胞融合剂，使免疫后能产生抗体的小鼠脾细胞与能在体外长期繁殖的小鼠骨髓瘤细胞融合产生杂交瘤细胞，通过次黄嘌呤、氨基蝶呤和胸腺嘧啶核苷 选择性培养基的作用，只让融合成功的杂交瘤细胞生长，经反复的免疫学检测筛选和单个细胞培养，最终获得机能产生所需单克隆抗体又能长期体外繁殖的杂交瘤细胞系。将这种细胞扩大培养，接种于小鼠腹腔，可从小鼠腹水中得到高效价的单克隆抗体。 2.细胞株冻融的原则：快冻慢融。目前均采用液氮保存杂交瘤细胞。细胞放入液氮前需要逐步降温，如果冻存管放置于-80摄氏度低温冰箱过夜后再放入液氮中，可长期保存。复苏细胞时，

2、冻存管取出后，立即37摄氏度水浴，使之融化。 第五章 1.凝集反应：是指细菌和红细胞或红细胞等颗粒性抗原或表面包被可溶性抗原的颗粒性载体与相应抗体特异性结合后，在适当电解质存在下，出现肉眼可见的凝集现象。 直接凝集反应：在适当电解质参与下，细菌、螺旋体和红细胞等颗粒性抗原直接与相应抗体结合后出现肉眼可见的凝集现象，称为。 间接凝集反应：可溶性抗原先吸附于适当大小的颗粒性载体的表面，然后与相应抗体作用，在适宜的电解质存在条件下出现特异性凝集现象，称为。其敏感度高于直接凝集反应和沉淀反应。 正向间接凝集反应：用可溶性抗原致敏载体以检测标本中的待检抗体。 反向间接凝集反应：用特异性抗体致敏载体以检测

3、标本中的待检抗原。 间接凝集抑制反应：用抗原致敏的载体颗粒及相应的抗体作为诊断试剂，检测标本中是否存在与致敏抗原相同的抗原。 2.抗人球蛋白试验的类型及其原理。 原理：Coombs试验又称抗人球蛋白试验，用于检测红细胞不完全抗体，其原理是：不完全抗体多半是7S的IgG类抗体，能与相应的抗原牢固结合，但因其分子量较小，体积小，不能起到桥联作用，在一般条件下不出现可见反应，利用抗球蛋白抗体作为第二抗体，连接与红细胞表面抗原结合的特异抗体，可使红细胞凝集。 Coombs试验有二种类型：(1)直接Coombs试验：用于检测红细胞结合的不完全抗体。将抗人球蛋白试剂直接加到表面结合抗体的受检红细胞中，即可

4、见细胞凝集。常用于检测新生儿溶血症，自身免疫性溶血症，特发性自身免疫性贫血的患者红细胞上不完全抗体。 (2)间接Coombs试验：用于检测血清中游离的不完全抗体。将受检血清和具有相应抗原性的红细胞相结合，再加入抗人球蛋白抗体即可出现可见的红细胞凝集。多用于检测母体RhD抗体，红细胞不相容输血后产生的血型抗体。 3.沉淀反应：是指可溶性抗原与相应抗体在适当条件下发生特异性结合而出现可见的沉淀现象。 4双向免疫扩散试验： 原理：是将抗原核抗体加在同一琼脂板的对应孔中，各自向对方扩散，在浓度比例恰当处形成沉淀线。观察沉淀线的位置、形状及对比关系，可对抗原或抗体进行定性分析。 应用：1.判断抗原或抗体

5、的存在以及估计相对含量。沉淀线靠近抗原孔，说明抗体浓度较大；靠近抗体孔则说明抗原浓度大。2.分析抗原或抗体相对分子量。形成的沉淀线弯向分子量大的一方。3.分析抗原的性质。两条沉淀线互相吻合相连，两抗原中存在相同表位；两条沉淀线交叉，说明两抗原完全不同；两条沉淀线相切，提示两抗原之间有部分相同。4.抗体效价的滴定。5鉴定抗体或抗原纯度。 5.免疫固定电泳： 原理：实质是区带电泳和沉淀反应相结合。先将血清蛋白质置于琼脂凝胶中进行区带电泳分离，再将固定剂和各型免疫球蛋白及轻链抗血清加于凝胶表面的泳道上，经过孵育，固定剂和抗血清在凝胶内渗透、扩散，抗原抗体直接发生沉淀反应，洗脱游离的抗体，形成的抗原抗

6、体复合物则保留在凝胶中。经氨基黑，参考泳道和抗原抗体沉淀区被着色，根据电泳移动距离分离单克隆组分，可对各类Ig及其轻链进行分型。 应用：最常用于M蛋白的鉴定与分型。 荧光免疫技术：是将抗原抗体反应与荧光技术相结合而建立的一种免疫荧光技术，具有高度特异性、敏感性和直观性。 第七章 1.荧光：荧光物质吸收激发光的能量后，使原来处于基态的电子跃迁到激发态，当其回复至基态时，激发态的电子以发射光的形式释放出能量，这种发射光称为。 发射光谱：是指固定激发光波长，在不同波长下所记录到的样品发射荧光的谱图 激发光谱：是指固定检测发射光波长，用不同波长的激发光照射样品得到的荧光的谱图。 荧光效率：是指荧光分子

7、将吸收的光能转变成荧光的百分率，与发射荧光光量子的数值成正比。 荧光效率发射荧光的光量分子数吸收光的光量子数 荧光猝灭：荧光分子的辐射能力在受到激发光较长时间的照射后会减弱的现象。 2.荧光色素： 异硫氰酸荧光素FITC，黄绿色荧光，应用最广泛。 RB200：四乙基罗丹明，橘红色。 PE：藻红蛋白，红色，流式荧光免疫技术中PE与FITC可用于双标记免疫荧光染色。 3. 荧光显微技术原理 原理：又称荧光抗体技术，采用荧光素标记抗体与标本片中组织或细胞抗原反应，经洗涤分离后，在荧光显微镜下观察呈现特异性荧光的抗原抗体复合物及其存在部位，借此对组织细胞抗原进行定性和定位检测或对自身抗体进行定性和低度

8、检测，此技术亦称荧光免疫组织化学技术。 第八章 1常用的酶：1.辣根过氧化物酶，应用最广泛，强酸是其强烈抑制剂，采用硫酸作为反应终止剂。避免使用叠氮钠作为酶标复合物的防腐剂。 2.碱性磷酸酶，含磷酸盐的缓冲液对酶具有抑制作用，不能用磷酸盐缓冲液PBS 3.-半乳糖苷酶 常用的底物：1.HRP有邻苯二胺，最敏感，显橙黄色，硫酸终止后呈棕黄色、四甲基联苯胺，最常用，作用后显蓝色，终止后变为黄色。 2.ALP有对-硝基苯磷酸酯，用NaO H 作为反应终止剂。 3.-Gal有4-甲基伞形酮-D半乳糖苷。 常用的标记方法：交联法和直接法 固相载体的选择：塑料制品、微粒、膜载体 2.酶联免疫吸附试验 原理

9、：把抗原或抗体结合到某种固相载体表面并保持其免疫活性，即形成固相抗原或抗体；将抗原或抗体与酶连接成酶标记抗原或抗体，它既保留了免疫活性，又保留了酶的活性；在测定时，把受检标本和酶标抗原或抗体按一定程序与结合在固相载体表面的抗原或抗体起反应形成固相化抗原抗体-酶复合物，用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体-酶复合物与其它成分分离，结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例，加入酶反应的底物后，底物被固相载体上的酶催化生为有色产物，通过定性或定量检测有色产物的量即可确定样品中待测物质的含量。 方法类型：ELISA检测抗原的方法主要有： 双抗体夹心法：适用于至少两个抗原决定簇的Ag。

10、先将特异性抗体与固相载体结合，形成固相抗体，加入待测标本并温育，使标本中的抗原与固相抗体充分反应，形成固相抗体抗原复合物，洗涤去除其他游离成分；然后加入酶标记抗体并温育，使固相抗体抗原复合物与酶标记抗体结合，形成 固相抗体-待测抗原-酶标记抗体 复合物，为“双抗体夹心”；洗涤去除游离酶标记抗体。加入底物，固相载体结合的酶可催化底物成为有色产物，根据产物的显色程度进行抗原的定性或定量检测。 临床上常用于乙肝表面抗原HBsAg、甲胎蛋白AFP、人绒毛膜促性腺激素HCG等项目的检测。 双位点一步法：该法是针对抗原分子上两个不同且空间距离较远的抗原决定簇， 分别制备两种单克隆抗体，在包被时使用一种单抗

11、，酶标记时使用另一种单抗。测定时将含待测抗原标本和酶标记抗体同时加入反应体系，两种抗体分别与不同的抗原决定簇结合，只进行一次温育，在洗涤后即可加底物进行显色反应。担当待测抗原浓度过高时，可出现钩状效应，甚至出现假阴性结果，必要时可将标本适当稀释后重新测定。） 竞争法： 原理：先用特异性抗体包被固相载体，然后同时加入待测抗原和酶标记的抗原，待测样本中的抗原与酶标记抗原 竞争性的与固相载体上的特异性抗体结合，温育一段时间后洗涤，加入底物显色。 应用：适用于小分子Ag或半抗原。 ELISA检测抗体的方法主要有： 间接法：检测Ab最常用的方法。 常用酶标记羊抗人IgG。 双抗原夹心法：灵敏度和特异性高

12、于间接法， 原理类似双抗体夹心法，操作步骤也基本相同，也可采用一步法，但一般不会出现钩状效应。 临床上乙型肝炎表面抗体HBsAb的测定常用此法。 竞争法：当相应抗原材料中含有难以去除的杂质，不易得到足够的纯化抗原或抗原性质不稳定时，可采用此方法。主要用于测定HBcAb和HBeAb。原理见下： HBcAb的竞争法：先将核心抗原包被在固相载体上形成固相抗原，然后加入待测标本和酶标记的特异性核心抗体，此时待测标本中的HBcAb与酶标记HBcAb竞争性地与固相载体上的核心抗原结合，温育后洗涤，加入底物显色，显色的强弱与待测标本中的HBcAb的含量负相关。 HBeAb的竞争法：先将HBeAb包被在固相载

13、体上形成固相抗体，同时加入待测标本和中和抗原HBeAg，此时待测标本中的HBeAb和固相抗体竞争性地结合中和抗原HBeAg，温育后洗涤，加入酶标记的HBeAb，酶标记抗体与结合于固相抗体上的特异性抗原结合，温育后洗涤，加入底物显色，显色强弱与待测标本中HBeAb的含量呈负相关。 捕获法：又称反向间接法，主要用于血清中特定Ig类别的测定，最常用于病原体急性感染诊断中IgM型抗体检测。 原理：首先将针对IgM的第二抗体包被于固相载体形成固相抗体，加入待测标本后，标本中所有的IgM即可被固相抗体捕获。第二步加入特异性抗原，其与固相载体上捕获的IgM特异性抗体结合，再加入针对特异性抗原的酶标记抗体，形

14、成 固相抗人链IgM-抗原-酶标记抗体 复合物，最后加入底物显色，即可对待测标本中抗原特异性IgM进行定性或定量测定。此法临床上常用于病原体急性感染的实验室诊断，如急性甲肝时可检测HAV-IgM抗体，急性乙型肝炎时可检测抗HBc-IgM抗体。 第九章 1.发光免疫分析：是将发光分析和免疫反应相结合而建立起来的一种检测微量抗原或抗体的新型标记免疫分析技术。兼有高灵敏性和高特异性。 2化学发光剂：在化学发光反应中参与能量转移并最终以发射光子的形式释放能量的化合物，成为或发光底物。 能作为化学发光剂的有机化合物必须具备下列条件：1.发光的量子产率高。2.它的物理化学特性要与被标记或测定的物质相匹配。

15、3.能与抗原或抗体形成稳定的偶联化合物。4.其化学发光常是反应的结果。5.在所使用的浓度范围内多生物体没有毒性。 3.直接化学发光剂：鲁米诺和吖啶酯 间接化学发光剂：酶促反应的发光剂：鲁米诺及其衍生物、AMPPD。 酞菁/二甲基噻吩衍生物/Eu螯合物 4.发光剂的标记技术 常用标记方法：碳二亚胺缩合法、过碘酸钠氧化法、重氮盐偶联法 影响标记的因素：发光剂的选择、被标记蛋白质的性质、标记方法的选择、原料比、标记率、温度、纯化与保存。 5.电化学发光免疫分析 ：三丙胺作为电子供体，三联吡啶钌在电场中因不断得到三丙胺提供的电子，可周而复始的发光，持续时间长，信号强度高，容易测定、控制；三联吡啶钌直接

16、标记抗原或抗体，结合稳定，不影响标记物的理化特性；试剂灵敏度高，稳定性好。 吖啶酯及酶促反应发光剂的原理自己看 第十章 生物素-亲合素系统 ：高特异性、高敏感性、稳定强、实用性强 ：在标记免疫技术中可应用于标记信号放大环节，也可用于固相包被环节 一、应用于固相载体的包被环节 二、应用于检测系统的信号放大 第十一章 1.固相膜免疫分析技术：是以微孔膜作为固相载体，利用液体可以流过微孔膜也可以通过毛细管作用在膜上向前移行的特性，以酶标记或各种有色微粒子标记抗体或抗原作为标记物，通过抗原抗体反应进行抗原或抗体检测的快速检验方法。 2.胶体金免疫技术：是以胶体金作为示踪标记物或显色剂，应用于抗原抗体反

17、应的一种标记免疫测定技术。技术类型：斑点金免疫渗滤试验、斑点金免疫层析试验 3.胶体金：也称金溶胶，是金盐被还原为金原子后形成的金颗粒悬液。胶体金颗粒由一个基础金核及包围在外的双离子层构成。由于静电作用，金颗粒之间相互排斥而悬浮成为一种稳定的胶体状态，形成带负电的疏水胶溶液，故称胶体金。 制备原理：胶体金世氯金酸在还原剂作用下，聚合成一定大小的金颗粒，形成带负电荷的疏水胶溶液。目前常用的还原剂有柠檬酸钠、鞣酸、维生素C、白磷、硼氢化钠等。根据还原剂的类型以及还原作用的强弱，可以制备0.8150nm不等的胶体金。 技术要点：最常用的方法为柠檬酸三钠还原法 胶体金的主要鉴定指标：粒径大小、粒径的均

18、一程度和有无凝集颗粒 4.免疫金：是指胶体金与抗原或抗体等大分子物质的结合物。其制备过程实质上是抗体蛋白等大分子被吸附到胶体金颗粒表面的包被过程。 免疫金制备的技术要点：胶体金溶液pH的调整、标记蛋白质最适标记量的确定、标记过程、金标记物的纯化。 5.斑点金免疫渗滤试验 原理：是在以硝酸纤维素膜为载体并包被了抗原或抗体的渗滤装置中，依次滴加标本、免疫金及洗涤液，因微孔滤膜贴置于吸水材料上，故溶液流经渗滤装置时与膜上的抗原或抗体快速结合并起到浓缩作用，达到快速检测目的阳性反应在膜上呈现红色斑点。 本法简化了操作步骤，达到简便的目的，已成为“床旁检测”的主要方法之一。 ： 双抗体夹心法：将抗体包被

19、在硝酸纤维素膜中央，滴加待检标本，若标本中有待测抗原则在渗滤过程中与膜上抗体结合，然后滴加胶体金标记抗体，加洗涤液洗涤后，阳性者即在膜中央呈红色斑点。 间接法：将抗原包被在硝酸纤维素膜上，依次滴加待测标本、洗涤液和胶体金标记抗人IgG抗体，再加洗涤液洗涤， 阳性者即在膜中央呈红色斑点。本法因受非目的IgG的干扰，易产生假阳性，临床上较少使用。 6.斑点金免疫层析试验 原理：是将胶体金标记和蛋白质层析 技术相结合的，以硝酸纤维素膜为载体的快速固相膜免疫分析技术。在DICA中，滴加在膜一端的标本溶液受载体末的毛细管作用向另一端移动，犹如层析一般，在移动过程中被分析物与固定于载体膜上某一区域的抗体或

20、抗原结合而被固相化，无关物则越过该区域而被分离，然后通过胶体金的呈色条带来判读实验结果。 方法类型：双抗体夹心法、竞争法、间接法 7.斑点酶免疫吸附试验 原理：与常规的ELISA相同，不同之处在于斑点-ELISA所用载体为对蛋白质具有极强吸附力的硝酸纤维素膜，此外酶作用底物后形成有色的沉淀物，使NC染色。 1、抗原包被膜：加少量抗原于膜上。由于NC膜吸附力强，故需在包被后进行封闭。 2、抗原抗体反应：滴加样品血清，其中的待检抗体即与NC膜上抗原结合；洗涤后再滴加酶标二抗。 3、显色反应：滴加能形成不溶有色沉淀的底物溶液；阳性者即可在膜上出现肉眼可见的染色斑点。 斑点-ELISA的优点为：NC膜

21、吸附蛋白力强，微量抗原吸附完全，故检出灵敏度可较普通ELISA高68倍；试剂用量较ELISA约节约10倍；操作简单，实验及结果判断不需特殊设备条件；吸附抗原或已有结果的NC膜可长期保存，不影响其活性。 8.免疫印迹试验 亦称酶联免疫电转移印迹法，通常又称Western-blot。 原理：是一种将高分辨率凝胶电泳和免疫化学分析相结合的技术，具有分析容量大、敏感性高、特异性强等优点，是检测蛋白质特性、表达与分布的一种常用方法，如组织抗原的定性定量检测、多肽分子的质量测定及病毒的抗体或抗原检测等。 第十二章 1.免疫组织化学技术：又称免疫细胞化学技术，是指用标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体

22、反应和组织化学的呈色反应，对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项免疫检测方法。 种类：荧光免疫组织化学技术、酶免疫组织化学技术、免疫金组织化学技术、亲和组织化学技术、免疫电竞组织化学技术等 基本过程：1.抗原的提取和纯化2.免疫动物或细胞融合，制备特异性抗体以及抗体的纯化3.将标记物与抗体结合形成标记抗体4.标本的处理与制备5.抗原抗体免疫学反应以及标记物呈色反应6.观察结果 2.非标记抗体酶免疫组织化学染色 酶桥法 抗酶抗体作为第三抗体，通过桥抗体将特异性识别组织抗原的第一抗体连接，形成酶联的 抗原-抗体 复合物，加底物显色。 本法较酶标法的敏感性有所提高，但操作分四步较为复杂。 过氧化物

23、酶抗过氧化物酶酶法 是在酶桥法的基础上加以改良。本法首先将酶桥法的第三抗体与酶组成可溶性复合物。该复合物由两个抗酶抗体和三个过氧化物酶分子组成，呈五角形结构，非常稳定。 通过桥抗体，将特异性识别组织抗原的第一抗体与PAP复合物的抗酶抗体连接起来，此时要求特异性第一抗体与第三抗体的动物种属相同 双桥PAP法 该法建立在PAP法的基础上。其基本原理是在PAP法中通过两次连接桥抗体和PAP复合物而建立起来的，通过双桥可结合更多的PAP复合物于抗原分子上，以增强敏感性。这种放大方式重复使用桥抗体，使桥抗体与PAP复合物中抗酶抗体的未饱和Fc段结合，或桥抗体与特异性第一抗体未饱和的Fc段结合。如此对抗原

24、有明显放大作用，对于组织细胞微量抗原的检测又实用价值。 碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶法法 因部分组织细胞内含内源性过氧化物酶，限制了HRP的广泛应用，需选用其他酶免疫组织化学反应。本法是用碱性磷酸酶代替HRP建立的碱性磷酸酶-抗碱性磷酸酶法，简称APAAP。其技术要点与PAP法相似。 最常用的是辣根过氧化物酶，常用的供氢体有二氨基联苯胺，反应产物呈棕色。其他有：氨基乙基卡巴唑，反应产物为橘红色；4-氯-1-萘酚，反应产物为灰蓝色。 碱性磷酸酶为磷酸酯的水解酶，可通过两种反应显色：偶氮偶联反应，最终与重氮化合物作用生成不溶沉淀，如快蓝为深蓝色，快红为红色。靛蓝四唑反应，最终形成紫蓝色不溶沉淀。 3.亲

25、和组织化学类型：生物素-亲和素法、葡萄球菌蛋白A法、凝集素法、链霉亲和素-生物素法。 第十三章 1.外周血单个核细胞：包括淋巴细胞和单核细胞，其比重在1.0751.090，而红细胞和多核白细胞比重在1.092左右。分离淋巴细胞以密度1.0770.001的分层液为佳。 分离方法：Ficoll分离液法，是一种单次差速密度梯度离心法。聚蔗糖-泛影葡胺是一种较理想的细胞分层液，商品名Ficoll。 2.淋巴细胞分离方法：贴壁黏附法、吸附柱过滤法、Percoll分离法 T、B细胞和T细胞亚群的分离方法：磁性微球分离法、荧光激活细胞分离仪分离法 3.淋巴细胞分类：T细胞、B细胞、NK细胞 4.辅助性T细胞

26、的典型表面标志：CD3+CD4+CD8+。 细胞毒性T细胞的典型表面标志是CD3+CD4-CD8+。 调节性T细胞：自然存在的，其典型标志为CD4+CD25+Foxp3+ 成熟B细胞均表达CD19，B1细胞CD19+CD5+，B2细胞CD19+CD5-，B1主要分布在腹腔和胸腔，与机体的免疫调节，自身免疫病及B细胞源性肿瘤密切相关。B2主要分布在周围免疫器官，是执行体液免疫的主要细胞。 NK细胞的典型标志：CD3-CD16+CD56+。 单核-巨噬细胞的典型表面标志为CD14。 人成熟DC的主要特征表面标志为CD1a、CD11c和CD83，但不表达MPS、T/B/NK细胞的典型表面标志。 5T

27、细胞增殖试验有：形态学检查法，3H-TdR掺入法、MTT比色法 6溶血空斑实验：将经SRBC免疫过的小鼠脾细胞与一定量的SRBC混合，在补体参与下，使抗体形成细胞周围那些受到抗体分子致敏的绵羊红细胞溶解，形成肉眼可见的溶血空斑，每一个空斑中央含一个抗体形成细胞，空斑数目即为抗体形成细胞数目。 第十四章 1细胞因子：是由机体活化的免疫细胞及某些基质细胞分泌的小分子蛋白质，通过结合细胞表面的相应受体发挥生物学效应。主要的生物学功能是介导和调节免疫应答及炎症反应。 特性：多效性、重叠性、拮抗性、协同性 2细胞粘附分子：是由细胞产生、介导细胞与细胞间或细胞与基质间相互接触和结合的分子。黏附分子大多为糖

28、蛋白，分布于细胞表面，以配体-受体相结合的形式发挥作用，介导细胞与细胞间、细胞与基质间或细胞-基质-细胞之间的黏附，参与细胞的识别、细胞的信号转导与活化、细胞的伸展与移动、细胞的增殖与分化，在免疫应答、炎症发生、血栓形成、创伤愈合以及肿瘤转移等重要的生理与病理过程中发挥重要作用。 第十六章 3.M蛋白：是B淋巴细胞或浆细胞单克隆异常增殖所产生的一种在氨基酸组成及顺序上十分均一的异常单克隆Ig。 临床上多见于：多发性骨髓瘤、高丙种球蛋白血症、恶性淋巴瘤、重链病、轻链病等 检测方法：血清蛋白区带电泳，是筛选M蛋白的最基本方法，为定性试验。血清免疫球蛋白定量测定可作为M蛋白的初筛试验，常用方法有单扩

29、和免疫比浊法。免疫电泳是鉴定M蛋白的常规方法之一，M蛋白与相应抗体结合时沉淀弧宽厚，并向抗体槽凸出呈弓形。免疫固定电泳是临床鉴定M蛋白最常用的方法。 第十七章 1.补体：是存在于人和动物血清、组织液和某些细胞膜上的一组经激活后具有酶活性的、不耐热的蛋白质。 理化特性：血液中大部分补体由肝脏合成，均为糖蛋白，多为球蛋白，少数为/球蛋白；其中C3含量最高，D因子含量最低。补体应保存于-20以下 2补体三条激活途径的比较 激活物质 起始分子 参与成分 共同末端 所需离子 C3转化酶 C5转化酶 是否依赖Ab 生物学作用 经典途径 抗原抗体复合物 C1q C1、C4、C2、C3 C5C9 Ca2+，M

30、g2+ C4b2b C4b2b3b 是 MBL途径 酶 C2、C4 C5C9 Ca2+ C4b2b C4b2b3b 否 旁路途径 多糖 C3 C5C9 Mg2+ C3bBb C3bnBb 否 MBL相关丝氨酸蛋白肽聚糖、酵母多糖、脂C4、C2、C3、MASP C3、B因子、D因子 参与特异性免疫的效参与非特异性免疫的参与非特异性免疫的应阶段，于感染后期发效应阶段，于感染早期效应阶段，于感染早期挥作用 发挥作用 发挥作用 3.补体的生物学功能： 溶解细胞/细菌/病毒、调理作用、清除免疫复合物、引起炎症反应、免疫调节作用 4血清总补体活性测定 补体CH50实验：补体与抗体致敏的羊红细胞接触后，被激

31、活，从而使致敏的SRBC溶解，在特定体系中，其溶血程度与补体量呈正比。因此，将新鲜待检血清做不同稀释后，与致敏红细胞反应，测定溶血程度，以50%溶血时的最小血清量判定终点，可测知补体总溶血活性。以50%溶血判断结果比100%溶血灵敏、准确。 5.补体结合试验利用抗原抗体复合物可激活补体的特点，用一定量的补体和致敏的SRBC来检测有无抗原抗体特异性结合的方法。 试验中有5种成分参与反应，分属3个系统： 1、反应系统：已知抗原与待测抗体 2、指示系统：绵羊红细胞与相应溶血素结合，成为致敏绵羊红细胞。 3、补体系统 常用豚鼠新鲜血清。反应系统与补体系统先发生反应，然后再加入指示系统，根据致敏绵羊红细

32、胞有无溶血来判断实验结果。 第二十章 甲型肝炎病毒感染 主要经粪-口传播，其实验室诊断主要依赖血清中特异性抗体的检测， 通常呈采用ELISA和化学发光技术对HAV IgG及IgM进行检测。HAV IgM在急性感染时出现较早，上升快，高峰效价高，持续时间短，是急性HAV感染或复发的可靠指标，并且有助于区分现症感染和既往感染。HAV IgG一般于感染4周后出现，24周达高峰，可维持多年甚至终生。 乙型肝炎病毒感染 1、HBsAg：是乙型肝炎早期诊断的重要指标。血清中检出HBsAg是乙肝的早期诊断指标之一 临床意义：1.是乙肝患者血清中首先出现的病毒标志物，可作为乙型肝炎的早期诊断和普查指标2.仅为

33、HBV感染的标志，不反映病毒有无复制、复制程度及预后3.仅变现为HBsAg阳性，传染性较弱。 2、HBsAb：是一种保护性抗体，也是机体感染或接种乙肝疫苗的标志。 临床意义：1.HBsAb阳性可提示急性感染后的恢复期。2.在接受HBsAb阳性血液的受血者中，可出现短暂的HBsAb阳性3.接受HBV疫苗接种后，血清中可出现HBsAb阳性4.同时出现HBsAg和HBsAb阳性为少见模式，可能为不同亚型重复感染或病患正处于血清转换期 3、HBeAg：为病毒复制标志，多存在于HBsAg阳性的标本中，急性乙肝患者血清HBeAg持续阳性3个月以上，则有疾病慢性化倾向。 在血清中的出现时间稍后于HBsAg，

34、是HBV复制活跃的血清学指标，其水平与病毒复制、肝脏损害程度成正比，因此HBeAg是乙肝患者有较强传染性的标志。 4、HBeAb：多出现于急性肝炎恢复期的患者中，比HBsAb转阳要早，常在HBsAg即将消失或已经消失时检出，可长期存在。 当血清HBeAg转阴后，可出现抗HBe，说明病毒复制减少，传染性弱。 HBeAg的血清学转换是指HBeAg含量消失同时伴HBeAb出现，是目前临床上慢性乙肝治疗的近期目标。 5、HBcAb是乙肝急性感染的早期标志，在血清中存在的时间长，包括IgM和IgG。抗HBc IgM是机体感染后最早在血液中出现的特异抗体，是新近感染或病毒复制的标志。抗HBc-IgG在感染

35、后逐步产生。 高滴度的HBcAb存在常表示体内有HBV复制。HBcAb阳性时表示乙肝现症感染或既往感染。抗HBc不是保护性抗体，高滴度抗HBc-IgM是急性或近期感染的重要指标，在慢性肝炎活动期也可呈阳性，标志着乙肝病毒在复制，有传染性。抗HBc-IgG可持续存在数年至数十年，是既往感染的标志。 大三阳：以上指标中的1、3、5为阳性；小三阳：以上指标中的1、4、5为阳性。 7、pre-S1：即乙肝病毒前S1抗原，作为病毒外膜蛋白成分存在于HBV Dane颗粒和管形颗粒上，在病毒感染、装配、复制和刺激机体产生免疫反应等方面有着十分重要的意义。 前S1抗原与HBV-DNA、HBeAg检测率高度符合

36、，是一项十分重要的病毒复制指标。可反应病毒的复制和传染性 8、pre-S2：即乙肝病毒前S2抗原，其上具有高免疫性的抗原决定簇和多聚蛋白受体，为人类T/B淋巴细胞的识别表位，pre-S2与HBV的感染和复制有密切的关系，对临床早期诊断，了解预后及制备乙肝高效疫苗有重要意义。 以上指标中的1、2、3、4、5、7、8项，在临床上称为乙肝七项 HbsAg HbsAb HbeAg HbeAb HbcAb + + + - - - - - - - + + - + + + - - - - - - - + + - - - - + + + + + - 临床意义 潜伏期或急性乙肝早期 急性或慢性感染，以HbcAb

37、-IgM鉴别； 病毒复制活跃，传染性强 急性HBV感染趋于恢复； 慢性乙肝携带者 急性HBV感染恢复期，有免疫力 乙肝恢复期，已有免疫力 过去感染，但无法检出HbsAg； 低水平慢性感染；无症状携带者 成功接种过乙肝疫苗， 或以前感染过HBV，现已康复，有免疫力 先天性感染疾病的病原体及感染后果 TORCH：弓形虫TOX，引起胎儿先天性弓形虫病 风疹病毒RUV，胎儿出生后患心脏病、耳聋、失明、智力障碍等先天性风疹综合症 巨细胞病毒HCMV，是先天性和围产期感染最为常见和重要的病原体。母体在妊娠3个月时如发生HCMV感染，可造成胎儿在宫内发育迟缓即中枢神经系统功能受损。 单纯疱疹病毒HSV，可分

38、为HSV-1和HSV-2两个亚型。HSV-1主要引起生殖器以外的皮肤、粘膜和器官的感染。HSV-2主要引起生殖器部位皮肤粘膜的感染 第二十二章 正常情况下，机体能识别“自我”，对自身成分不产生免疫应答，或仅产生微弱的免疫应答，这种现象称为自身免疫耐受。某些情况下，自身耐受受到破坏，机体免疫系统对自身成分发生免疫应答，这种现象称为自身免疫 第二十三章 免疫增殖性疾病：免疫器官、组织或免疫细胞异常增生所致的一组疾病。主要表现为Ig异常和免疫功能异常。 可见于：慢性肝病、肝硬化、结缔组织病、慢性感染、恶性肿瘤、AIDS淋巴母细胞性淋巴结病。 第二十四章 1.免疫缺陷病：是指由于遗传因素或其他原因造成

39、的免疫系统发育或免疫应答障碍而导致的一种或多种免疫功能缺陷或不全所致的临床综合征。 临床表现有反复、持续性、机会性感染，可伴发过敏性疾病和自身免疫病，并有发生恶性肿瘤的倾向。 原发/继发性 免疫缺陷病好均具有某些共同的临床特点： 1、反复感染。IDD患者对各种病原体的易感性增加，易发生反复感染且难以控制，是造成死亡的主要原因。感染的性质和严重程度取决于IDD的类型和程度 2、肿瘤。IDD患者尤其是T细胞免疫缺陷患者，恶性肿瘤的发生率比正常人高100300倍，以白血病和淋巴系统肿瘤居多。 3、自身免疫病。IDD患者有高度伴发自身免疫病的倾向，其自身免疫病的发生率比正常人高约1000倍，以类风湿性

40、关节炎和恶性贫血等多见。 4、遗传倾向：多数PIDD具有遗传倾向性，约1/3为常染色体遗传，1/5为性染色体隐性遗传。 5、临床表现和病理损伤多种多样：IDD患者因其免疫系统受损的组分不同，临床表现各异，并可同时累及多系统、多器官，从而出现复杂的功能障碍和症状。另外，患同种免疫缺陷病的不同患者，也可有不同的临床表现。 2.获得性免疫缺陷综合症：又称艾滋病，是人类免疫缺陷病毒感染引起的一组综合征，患者的CD4+T细胞减少，同时伴反复机会性感染、恶性肿瘤及中枢神经系统退行性病变。 1、HIV入侵靶细胞的机制：CD4分子是HIV糖蛋白的特异性受体，故其主要侵犯CD4+T细胞。HIV通过gp120与靶

41、细胞表面的CD4分子高亲和性结合，同时也与表达在靶细胞表面的趋化因子受体结合，再由gp41介导病毒包膜与细胞膜融合，使病毒得以进入细胞。 2、HIV损伤感染的CD4+T细胞：HIV在靶细胞中复制，可通过直接或间接途径损伤CD4+T细胞。 3、HIV可通过各种机制逃避免疫识别攻击 1、CD4+T细胞数量显著减少、功能严重障碍，CD4+/CD8+比例倒置，低于0.5。 2、Th1与Th2细胞平衡失调。感染的无症状阶段以Th1细胞占优势，分泌IL-2刺激CD4+T细胞增殖；至AIDS期则以Th2细胞占优势，分泌IL-4/10抑制Th1细胞分泌IL-2，从而削弱CTL的细胞毒效应。 3、抗原提呈细胞功能降低。HIV感染巨噬/树突状 细胞后，可损伤其抗原处理和呈递能力，反而使之成为HIV的庇护所，成为晚期AIDS患者血中高水平病毒的主要来源。 4、B细胞功能异常。因gp120属于超抗原，能激活多克隆B细胞所致，表现为多克隆激活、高Ig血症和产生多种自身抗体。 典型的有： 机会性感染：是AIDS患者死亡的主要原因。常见的病原体为卡氏肺囊虫和白色念珠菌；恶性肿瘤：AIDS患者易伴发卡波西肉瘤和恶性淋巴瘤，也是患者死亡的常见原因；神经系统损害：约60%的AIDS患者出现AIDS痴呆症。