BCA法测定蛋白质浓度的方法.docx
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1、BCA法测定蛋白质浓度的方法1. 根据样品数量,按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B配制适量BCA工作液,充分混匀。BCA工作液室温24小时内稳定。 2. 完全溶解蛋白标准品,取10微升稀释至100微升 ,使终浓度为0.5mg/ml。蛋白样品在什么溶液中,标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见,也可以用0.9%NaCl或PBS稀释标准品。 3. 将标准品按0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20微升加到96孔板的标准品孔中,加标准品稀释液补足到20微升。 4. 加适当体积样品到96孔板的样品空中,加标准品稀释液到20微升。 5. 各孔加入200微升BCA工作液,37放置30
2、分钟。 注:也可以在室温放置2小时,或60放置30分钟。BCA法测定蛋白浓度时,吸光度会随着时间的延长不断加深。并且显色反应会因温度升高而加快。如果浓度较低,适合在较高温度孵育,或延长孵育时间。 6. 测定A562,540-595nm之间的波长也可接受。根据标准曲线计算出蛋白浓度。 混匀的问题,可以在参数中选择快速震荡,30s就可以了做的好的话可以达到4个九 事先配好各个浓度的bsa标准品, step 1 A液和B液按 50:1混合, step2 每孔加200ul混合液,然后标准曲线孔加入25ul标准品 ,样品稀释到合适的比例,也加入25ul step3 37度孵育30min step4 测 od 565,附近也行
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