Agilent1200高效液相色谱仪操作规程.docx

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1、Agilent1200高效液相色谱仪操作规程Agilent1200高效液相色谱仪操作规程 一、Agilent1200化学工作站开机顺序(LAN卡联接) 1、将待测样品按要求前处理，准备HPLC 所需流动相，检查线路是否连接完好，废液瓶是否够用等 2、打开计算机，进入Bootp； 3、打开主机各模块电源，等待Bootp接收,等待各模块就绪后,再双击工作站图标,进入化学工作站； 4、调出一个分析方法，检查各参数的设置； 5、旋开泵上的排气阀，将工作站中的泵流量设到5ml/min，溶剂A设到100%； 6、在工作站中打开泵，排出管线中的气体数分钟； 7、依此切换到B、C、D溶剂分别排气； 8、将工作

2、站中的泵流量设到1ml/min，多元泵则再设定溶剂配比，如A=80%，B=20%； 9、关闭排气阀，检查柱前压力； 10、待柱前压力基本稳定后,打开检测器灯，观察基线情况； 二、数据采集方法编辑 1 由运行控制进入样品信息，设定操作者姓名，样品数据文件名等。 2自动进样器参数设定: 1）选择合适的进样方式, “Standard Injection”-只能输入进样体积，此方式无洗针功能。“Injection with Needle Wash”-可以输入进样体积和洗瓶位置，“UnRegistered”-此方式针从样品瓶抽完样品后，会在洗瓶中洗针。“Use injectorprogram”-可以点击

3、“Edit ”键进行进样程序编辑。 2)单击确定进入下一画面。 3 泵参数设定： 1）在流量处输入流量,如1.5ml/min，在溶剂 B处输入70.0,(A=100-B-C-D) ,也可插入一行时间列表 ,编辑梯度。在最大压力极限处输入柱子的最大耐高压，以保护柱子。 2）单击确定进入下一画面。 4 柱温箱参数设定: 1）在柱温下面的方框内输入所需温度,并选中它,点击更多键,选中与左侧一致，使柱温箱的温度左右一致。 2）单击确定进入下一画面。 5 DAD检测器参数设定: 1）在波长下方的空白处输入所需的检测波长,如254nm,在峰宽 (响应时间)下方点击下拉式三角框,选择合适的响应时间, 如0.

4、1min(2s)。 2）在时间列表中可以插入一行，输入随时间切换的波长，如1min，波长=300nm。 3）点击确定进入下一画面。 6 单击方法菜单，选中保存方法，输入一方法名，如“test”，单击确定。 7、运行序列：新建序列，在序列参数中输入样品信息，在序列表中输入样品位置，方法等，运行该序列，等仪器就绪，基线平稳，从方法菜单中选择运行方法，进样。 三、数据处理操作步骤 1 由主菜单上的视图进入数据分析，到数据处理界面； 2 由主菜单上的文件进入调用信号，调出要分析的数据文件色谱图； 3 由主菜单上的图形进入信号选项，调整谱图坐标: 1)点自定义量程，在时间范围中输入横坐标(时间）(例如0

5、到10)； 2)在响应范围:中输入纵坐标(响应值）(例如-50到800)； 3)在量程框中，调到全部使用相同量程； 4)点击确定退出。 4 由主菜单上的积分进入积分事件，设置、修改积分参数； 1)在斜率灵敏度后，输入斜率值； 2)在峰宽后中，输入最小峰宽值； 3)在最小峰面积后，输入最小峰面积值； 4)在最小峰高后，输入最小峰高值； 5)点击左上方带钩的图标，确认； 5 由主菜单上的报告进入设定报告，设置报告参数： 1)在定量结果栏中，选择计算； 2)在目标栏，选打印机打印，或屏幕打印； 3)点击确定退出。 6 由主菜单上的报告进入打印报告，打印报告； 四、关机 1 关机前，用95%水冲洗柱子

6、和系统0.5-1小时，流量0.51ml/min，再用100%有机溶剂冲0.5小时，然后关泵，。正相色谱柱用适当的溶剂冲洗 2 退出化学工作站，及其它窗口，关闭计算机。 3关闭Agilent 1200各模块电源开关。 五、Agilent 1200 高效液相色谱仪维护保养： 1 氘灯是易耗品，应最后开灯，不分析样品即关灯； 2 开机时，打开排气阀，100%水，泵流量5ml/min，若此时显示压力 10bar，则应更换排气阀内玻璃料。 3流动相使用前必须过滤，不要使用多日存放的蒸馏水。 4流动相使用前必须进行脱气处理，可用超声波振荡10- 15min。 5配制90%水+10%异丙醇，以每分23滴的速度虹吸排出，进行seal-wash，溶剂不能干涸。 6当使用缓冲溶液时，要用水冲洗手动进样器进样口，同时搬动进样阀数次，每次数毫升。 7色谱柱长时间不用，存放时，柱内应充满溶剂，两端封死。