核酸提取 氯仿 异丙醇的作用.docx
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核酸提取 氯仿 异丙醇的作用用酚抽提细胞DNA时,有什么作用? 使蛋白质变性,同时抑制了DNase的降解作用。用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与DNA 联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相,而DNA溶于水相。 使用酚的优点:1. 有效变性蛋白质;2. 抑制了DNase的降解作用。 缺点:1. 能溶解10-15%的水,从而溶解一部分polyRNA。2. 不能完全抑制RNase的活性。 氯仿的作用? 氯仿:克服酚的缺点;加速有机相与液相分层。 最后用氯仿抽提:去除核酸溶液中的迹量酚。 用酚氯仿抽提细胞基因组DNA时,通常要在酚-氯仿中加少许异戊醇,为什么? 异戊醇:减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。异戊醇可以降低表面张力,从而减少气泡产生。另外,异戊醇有助于分相,使离心后的上层含DNA的水相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定。 用乙醇沉淀DNA时,为什么加入单价的阳离子? 用乙醇沉淀DNA时,通常要在溶液中加入单价的阳离子,如NaCl 或 NaAc,Na+中和DNA分子上的负电荷,减少DNA分子之间的同性电荷相斥力,而易于聚集沉淀。 氯仿的作用主要是使蛋白变性并有助于液相与有机相的分开,异戊醇的作用是消除抽提过程中出现的泡沫
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