微生物的培养与应用 课件.ppt

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1、一、微生物的实验室培养1培养基(1)培养基即人们按照，配制出供其生长繁殖的基质。(2)按物理状态，可将培养基划分为 培养基和 培养基(如琼脂培养基)。（3）按功能，可将培养基划分为 培养基和 培养基(如琼脂培养基)。(4)培养基一般都含有的成分是：，在此基础上还需满足微生物生长对 的需求。,微生物对营养物质的不同需求,液体,固体,水、碳源、氮源和无机盐,pH、特殊营养物质,及氧气,选择,鉴别,2消毒和灭菌,较为温和,强烈,一部分对人体有害的微生物(不包括芽孢和孢子),所有的微生物，包括芽孢和孢子,煮沸,巴氏,灼烧,干热,高压蒸汽,3大肠杆菌纯化及菌种保藏(1)制备牛肉膏蛋白胨培养基的步骤为：称

2、量溶化(2)微生物纯化的原理及方法：原理：在 培养基上将细菌稀释或分散成，使其长成单个的菌落，这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。方法：，要求无菌操作。,计算,灭菌,固体,单个细胞,倒平板,平板划线法、稀释涂布平板法,(3)菌种保藏：短期保存：上4保藏，缺点是菌种易被污染或产生变异。长期保存：采用 20冷冻箱中保藏。,固体斜面培养基,甘油管藏法,二、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数(1)分离原理：土壤中细菌之所以能分解尿素，是由于它们能合成，这种物质在把尿素分解成无机物的过程中起 作用。使用以 为唯一氮源的培养基能促进 的细菌的生长和繁殖，并抑制或阻止其他微生物的生长，从而分离出目的菌。,脲酶,催

3、化,尿素,分解尿素,(2)统计菌落数目：统计样品中的活菌一般用。(3)实验流程：土壤取样 微生物的培养与观察细菌的计数。,稀释涂布,平板法,制备培养基,三、分解纤维素的微生物的分离1纤维素酶的组成及作用(1)组成：一种 酶，它至少包括三种组分，即。(2)作用：,复合,C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶,纤维二糖 葡萄糖,2筛选方法(1)方法：法，即通过是否产生 来筛选纤维素分解菌。(2)培养基：是以 为唯一碳源的选择培养基。3筛选流程土壤取样 将样品涂布到 的培养基上挑选 的菌落。,刚果红染色,透明圈,纤维素粉,选择培养,梯度稀释,鉴别纤维素分解菌,产生透明圈,做一题例1如下所示为培养某种微生物的培养

4、基的配方，请回答：,(1)依物理状态，该培养基属于_培养基；依用途划分，则属于_培养基。(2)根据培养基的配方可判断出，该培养基所培养微生物的同化作用的类型是_，培养的微生物可能是_。,液体,选择,异养型,酵母菌或霉菌,(3)该培养基中的碳源是_。不论何种培养基，在各成分都溶化后分装前，要进行的是_ 和_；倒平板时，一般需冷却至_左右，并且要在_ 附近操作。,(CH2O),调整pH,灭菌,50,酒精灯火焰,(4)若用该培养液培养纤维素分解菌，应除去的物质是_ 至少应加入的物质是_，为检测纤维素分解菌的存在与否还应加入_，形_色复合物，若产生_，则证明有纤维素分解菌存在。,青霉素和(CH2O),

5、琼脂和纤维素粉,刚果红,红,透明圈,归纳小结：1微生物的营养,2培养基的种类(1)按物理状态分类：,(2)按功能分类：,3.微生物的纯化培养,通一类1右图是微生物平板划线示意图。划线的顺序为12345。下列操作 方法正确的是()A只需操作前将接种环放在火焰旁灼烧灭菌即可B划线操作需在火焰上进行C在5区域中才可以得到所需菌落D在12345区域中画线前后都要对接种环灭菌,D,做一题例2从自然菌样筛选较理想生产菌种的一般步骤是：采集菌样富集培养纯种分离性能测定。(1)不同微生物的生存环境不同，获得理想微生物的第一步是 从合适的环境中采集菌样，然后再按一定的方法分离、纯 化。培养嗜盐菌的菌样应从 _

6、环境中采集。(2)富集培养指创设仅适合待分离微生物旺盛生长的特定环境 条件，使其数量大大增加，从而分离出所需微生物的培养 方法。对产耐高温淀粉酶微生物的富集培养应选择 _ 的培养基，并在 _条件下培养。,海滩等高盐,以淀粉为唯一碳源,高温,(3)下面两图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图解，请分析接种的具体方法。获得图A效果的接种方法是 _，获得图B效果的接种方法是 _。(4)配制培养基时各种成分在溶化后分装前必须进行 _，接种前要进行_，在整个微生物的分离和培养中，一定要注意在 _ 条件下进行。,稀释涂布平板法,平板划线法,pH调整,高压蒸汽灭菌,无菌,1归纳几种典型微生物

7、的筛选方法(1)培养基中加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌。(2)培养基中加入高浓度的食盐可得到金黄色葡萄球菌。(3)培养基中缺乏氮源时，可以分离固氮微生物，因为非固氮微生物不能在此培养基上生存。,(4)当培养基的某种营养成分为特定化学成分时，也具有分离效果。如当石油是唯一碳源时，可以抑制不能利用石油的微生物的生长，使能够利用石油的微生物生存，达到分离能消除石油污染的微生物的目的。(5)改变微生物的培养条件，也可以达到分离微生物的目的，如将培养基放在高温环境中培养只能得到耐高温的微生物。,2微生物筛选过程中必要的两种对照培养基及其作用,关键一点即使使用了选择培养基，所得到的微生物也未必全为“目标

8、微生物”，因此，常需对选择培养基中菌落作进一步鉴定。,2下表为培养某种微生物的培养基配方，下列相关叙述错误的是(),A依物理性质划分，该培养基属于液体培养基B依用途划分，该培养基属于选择培养基C培养基中的唯一碳源是(CH2O)，唯 一氮源是NaNO3D若用该培养基培养纤维素分解菌，则应除去(CH2O)，再添加纤维素,D,3苯酚是工业生产排放的有毒污染物质，自然界中存在着能降解苯酚的微生物。某工厂产生的废水中含有苯酚，为了降解废水中的苯酚，研究人员从土壤中筛选获得了只能降解利用苯酚的细菌菌株，筛选的主要步骤如下图所示，为土壤样品。下列相关叙述错误的是(),A图中培养目的菌株的选择培养基中应加入苯

9、酚作为碳源B如果要测定中活细菌数量，常采用稀释涂布平板法C若图中为对照实验，则其中应以苯酚作为唯一的碳源D使用平板划线法可以在上获得单菌落,C,(1)显微镜直接计数法：原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量。方法：用计数板计数。缺点：不能区分死菌与活菌。,(2)间接计数法(活菌计数法)：原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。计算公式：每克样品中的菌株数(CV)M，其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(

10、mL)，M代表稀释倍数。操作：设置重复组，增强实验的说服力与准确性。同时为了保证结果准确，一般选择菌落数在30300 的平板进行计数。,血球计数板，通常是一块特制的载玻片，其上由四条槽构成三个平台。中间的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分九个大方格，中间的大方格即为计数室，微生物的计数就在计数室中进行。,一个大方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格,每一个大方格中的小方格数，即1625=400小方格。每一个大方格边长为1mm，则每一大方格的面积为1mm2，盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间的高度为01mm，所以计数室的容积为01mm3。,右下、

11、,左上,右上,中央格,左下,在计数时，通常数五个中方格的总菌数，然后求得每个中方格的平均值，再乘上25，就得出一个大方格中的总菌数，然后再换算成1ml菌液中的总菌数。,设五个中方格中总菌数为A，菌液稀释倍数为B，那么，1ml样液的总菌数因1ml=1cm3=1000mm3,=50000AB（个）,例3急性肠胃炎、手足口病分别是由细菌和病毒通过消化道进入人体导致的。因此检验饮用水的细菌含量和病毒含量是有效监控疾病发生的必要措施，请回答下列与检验饮用水有关的问题：(1)检验大肠杆菌的含量时，通常将水样进行一系列的梯度稀 释，然后将不同稀释度的水样用涂布器分别涂布到琼脂固 体培养基的表面进行培养，记录

12、菌落数量，这种方法称为 _。在下面所示的四种菌 落分布图中，不可能是用该方法得到的是_。,稀释涂布平板法,(2)用该方法统计样本菌落数时是否需要设置对照组？_。为什么？_。(3)如分别取0.1 mL已稀释103倍的水样分别涂布到三个琼脂 固体培养基的表面进行培养，培养基记录到大肠杆菌的菌落数分别为55、56、57，则每升原水样中大肠杆菌数为 _。,需要,因为需要判断培养基是否被杂菌污染(培养基灭菌是否合格),5.6108,(4)已知大肠杆菌能发酵乳糖并产酸产气，现提供足量的已灭菌的乳糖蛋白胨培养液和具塞试管，应如何判断待检水样中是否含有大肠杆菌？,通过无菌操作向试管内注入一定量待检水样，再注入

13、已灭菌的乳糖蛋白胨培养液将试管充满，塞上塞子，混匀后置于37恒温箱培养24 h。若试管内有气泡生成，则说明水样中有大肠杆菌,课堂练习(1)根据物理状态的不同，培养基只有液体培养基和固体培养基两种类型。()(2)培养基中一般都含有水、碳源、氮源和无机盐四种成分。()(3)在配制培养基时，除满足营养需求外，还应考虑pH、O2及特殊营养物质的需求。()(4)只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。(),(5)筛选分解尿素的细菌应以尿素作为培养基中的唯一氮源。()(6)统计样品中的活菌一般用平板划线法。()(7)在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，若指示剂变蓝，则说明筛选到分解尿素的细菌。()(8

14、)刚果红能与培养基中的纤维素形成红色复合物。()(9)纤维素酶只包括三种组分：C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶。()(10)筛选分解纤维素的微生物的培养基中是以纤维素为唯一碳源的选择培养基。(),二、在回顾教材图表中强化学科能力下表为筛选分解尿素细菌的培养基，据此回答问题：,(1)在该培养基中尿素的作用是什么？琼脂的作用是什么？答案：尿素作唯一氮源，起选择作用；琼脂作为凝固剂，用于制备固体培养基。(2)对筛选出的细菌要进行进一步的鉴定，如何鉴定？答案：在培养基中再加入酚红指示剂，培养细菌后，pH升高，指示剂将变红。,例1用平板划线法或稀释涂布平板法纯化大肠杆菌时()可以用相同的培养基都需要使用接种针

15、进行接种都需要在火焰旁进行接种都可以用来计数活菌A BC D,C,例2(2012海淀期中)从土壤中分离以尿素为氮源的细菌，下列实验操作不正确的()A将土壤用无菌水稀释，制备103105土壤稀释液 B将不同浓度的土壤稀释液涂布于不同平板上 C用加入刚果红指示剂的选择培养基筛选分解尿素的细菌 D从周围出现红色环带的菌落中挑取能够分泌脲酶的菌株,C,1除了高温加热以外，其他灭菌方法还有()A紫外线照射B真空包装C用保鲜膜密闭 D添加防腐剂,A,2细菌培养过程中分别采用了高压蒸汽、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理，这些方法依次用于杀灭哪些部位的杂菌()A接种环、手、培养基 B高压锅、手、接种环C培养基、手、接种环 D接种环、手、高压锅,C,