1985091180病毒性疾病标本采集要求.ppt

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1、病毒性疾病临床标本采集要求2015.06济南,主要内容,采集临床标本对于实验室检测的意义临床标本的采集及种类采集技术要求标本采集情况及存在的问题建议、要求,一、临床标本对实验室监测的作用和意义,血清学监测：（IgM/IgG）早期诊断(发热出疹症候群、脑膜脑炎症候群等)人群免疫状况评价、疫苗效果评价病毒学监测：病毒学监测与流行病调查资料结合在一起，可以:追溯病毒传播途径鉴定病毒来源，确定本土还是输入区分疫苗、野毒引起的疑似病例（麻疹；VDPV等）监测病毒的变异，开发新疫苗,二、临床标本采集的基本要求,标本是进行一起实验室检测的基础标本采集质量（采集时间、部位）影响实验室检测的结果标本采集应根据不

2、同症候群采集不同种类的标本标本具有不再获得性，采集的量应充分满足检测工作需要采集的标本应有明确标示，并包含疾病所有的基本信息标本的采集、运送、保存都应符合生物安全要求,用于病毒学检测疑似病例标本采集种类,（一）、麻疹、风疹、腮腺炎标本的采集要求,三、标本的采集要求,0,7,14,21,28,35,42,-7,-14,-21,0,2,4,6,8,10,Rash,Onse出疹t,Days after rash onset 出疹天数,Infection感染,Relative levels of antibody 相对抗体水平,必要日期:最后接种日期出疹日期出生日期,用于IgM检测的血清标本要在初次接

3、触病人时马上采集。用于病毒分离及核酸检测检测的标本需在岀疹后5天内采集。对于岀疹3天内的血清标本：大约30%的病例因未产生IgM抗体不能检测到，需要 采集第二份血标本或采用荧光定量PCR检测病毒核酸。,麻疹病毒感染人体后抗体动态和病毒的排泄,1、合格血标本的基本要求是：出疹后28日内采集，血清量不少于0.5ml，无溶血，无污染；28条件下保存、运送。2、监测病例血标本采集率达到80%以上；出疹后3日内血标本麻疹、风疹IgM阴性者，应在出疹后4-28天内采集第二份血，与第一份血采集时间相隔10-20天。第2份血标本的比例达到80%以上。3、麻疹、风疹暴发疫情实验室确诊率达到90%上。4、技术要求

4、：采集病例出疹后28日内静脉血23ml，加入到无菌试管中，标明采集日期和病例姓名、编号。,1、血标本的采集、运送、保存要求（2014版麻疹监测方案）,5、1500rpm/20分钟离心机分离血清。如果没有离心机，在室温下凝固分离血清，或2-8C过夜直到血清完全析出。6、血清标本运送前应可在28保存，如果7日内不能运送的，应置-20以下保存，避免反复冻融（会对IgM抗体的稳定性产生不利影响）。7、全血标本不能冻结。8、标本送检要符合生物安全条件要求。,1、血标本的采集、运送、保存要求（2014版麻疹监测方案）,2、咽拭子、尿液标本的采集、运送、保存要求（2014版麻疹监测方案）,1、采集出疹后5天

5、内病例咽拭子或尿液标本，用于病毒分离或病毒核酸检测。2、努力采集每例散发监测病例病原学标本。当确认为麻疹或风疹暴发疫情时，应至少采集疫情早期5例病例的病原学标本，病例数小于5例者应全部采集。3、麻疹、风疹暴发疫情实验室确诊率达到90%以上；麻疹、风疹暴发疫情采集病原学起数占暴发疫情总起数的比例达到80%以上。,2、咽拭子、尿液标本的采集、运送、保存要求（2014版麻疹监测方案）,4、技术要点：（1）出疹当日至出疹后5日采集。（2）用无菌棉拭子适度用力在咽后部及两侧，反复擦拭，获得上皮细胞。（3）把拭子放入有外螺旋盖并装有2ml病毒运输液的冻存管中。（4）常用的病毒运输液（商用）：pH 7.47

6、.6的Hanks液：在90ml蒸馏水中加入10mlHanks，然后加入10ml牛血清和0.2ml 0.4酚红溶液，过滤消毒。加1ml青/链霉素溶液。分装到无菌管中，于4储存备用。细胞培养液：含2-5%胎牛血清DMEM,2、咽拭子、尿液标本的采集、运送、保存要求（2014版麻疹监测方案）,5、咽拭子等标本采集后48小时内能送达市级实验室者，可在28保存，否则-70保存。无-70保存条件者，可在-20保存并在1周内送达。6、尿液标本采集：出疹后5天内，最好采集晨尿（其他时段也可），用50ml无菌离心管采集3050ml尿液。采集后的标本在2-4C保存，必需在24h内离心处理（1500rpm/20mi

7、n）,用35ml病毒保存液悬浮沉渣，转移到咽拭子保存管，-70保存。未经离心处理不得直接冻存。,3、腮腺炎疑似病例标本采集,1、血清标本采集同上。2、采集时间：发病5天内采集咽拭子、腺管分泌液。3、方法：咽拭子采集同麻疹。腺管分泌液采集：用无菌棉拭子，放患者口腔两边腮腺管开口处，放置10min后，取出放装有病毒保存管中。4、标本保存、运送要求同麻疹。采集后尽快送省级实验室进行病毒分离。,1、血清标本：散发病例，每年以市为单位血清标本合格采集数不少于100份、水疱液标本采集数不少于10份；若散发病例少于100例，血清标本合格采集率应达病例总数的80%以上。2、暴发病例，采集暴发早期510例病例血

8、清标本进行确诊，同时还要采集35例病例水疱液标本，进行病毒分离。3、水泡液采集（用于病毒分离及核酸检测）：选择患者5 10个充盈度较好的水疱，在无菌条件下用注射器抽取疱液，保存于装有2-3mL标本保存液标本管中(同麻疹)。4、疱疹液采集后应在4条件下24小时内运送至省级实验室，未能24小时内送达的，应置-70或以下保存，并于标本采集后7天内送达省级实验室。,（二）、水痘-带状疱疹标本的采集、运送、保存要求,一、AFP病例标本的采集 1.麻痹出现后14天内采集；双份大便；采集时间至少间隔24小时。2.每份标本重量5克（约为成人的大拇指末节大小）。3.麻痹时间超过3个月，可不采集大便标本。4.-2

9、0冰箱储存，冷藏运送至实验室。,（三）、脊髓灰质炎标本采集、运输要求,标本的采集-2,二、AFP病例接触者标本的采集 以下情况应采集AFP病例的5名接触者（原则上5岁以下）大便标本1.每年AFP病例大便标本数少于150份的省。2.未采集到合格大便标本的AFP病例。3.根据临床或流行病学资料高度怀疑为脊灰的AFP病例。4.死亡的AFP病例。,标本的采集-3,三、高变异株AFP病例、VDPV病例、输入性脊灰野病毒病例接触者：标本采集要求见输入性脊灰野病毒病例和脊灰疫苗衍生病毒循环病例应急处理预案,脊灰标本的运送,1.采集后7天内送达省级脊灰实验室。2.冷藏运送，运送时冰袋不少于4个，在送达省脊灰实

10、验室时应带冰且包装完整。3.标本的运送同时要符合实验室生物安全有关要求。4.采集的标本应有完整的登记资料（采样单），一并送达省脊灰实验室。,运输器材,1.单个病例的标本容器应单放在盒或塑料袋内，并做有效的封闭。2.用于运输标本的器材每次用过后毁掉或者消毒后再用。3.Polio标本不能和疫苗同放在一个冷藏器中。4.用于计免中携带疫苗的冷藏箱可用于标本运输，但不可再用于装运疫苗。,1.血清标本采集：发病7天内采集，血液标本量应3ml。如第一份血液标本在发病7天内采集，且乙脑IgM抗体检测阴性，应于7天后采集第二份血液标本。血清装于带螺旋盖的血清管中保存和送检，血清管上贴好写有患者个人资料的标签。血

11、清应低温（-80）保存，避免反复冻融；标本要冷藏运送（最好用干冰或液氮），同时要符合实验室生物安全和相关运输管理要求。,（四）、流行性乙型脑炎检测标本的采集、保存与运输,2、脑脊液标本采集：需要专业的临床医生来完成。发病1周内采集，每份1 2ml。低温（-80）保存，避免反复冻融；标本要冷藏运送（最好用干冰或液氮），同时要符合实验室生物安全和相关运输管理要3、蚊虫样本采集：地点：人房、猪圈、稻田；时间：早晨5点之前和傍晚7 点之后。鉴定分类：将蚊虫于-20冰箱中冷冻半个小时左右，将蚊虫冻晕，以便分拣；对蚊虫分类时，要在冰排上进行；分类完毕，50只为一批，迅速装入冻存管，并立即放入液氮中保存。用

12、液氮进行运输。在蚊虫标本采集的整个过程中都要保持冷链，注意补充液氮。,（四）、流行性乙型脑炎检测标本的采集、保存与运输,（四）、流行性乙型脑炎检测标本的采集、保存与运输,4、猪血样本采集：选择上年11月份以后出生、尚未经历乙脑流行期的仔猪30头作为观察对象。每头猪从流行季节前的3月份开始，连续每旬采耳静脉血一次，直到10月下旬。也可采集屠宰场所宰杀的未经过上一次乙脑流行季节的猪血清，每次不少于30份，从每年的3月份开始采集直到流行季节结束。低温（-20）保存，冷藏运送。,四、标本采集情况、存在的问题,2015.1-5麻疹检测指标完成情况,四、标本采集情况、存在的问题,四、标本采集情况、存在的问

13、题,2014-2015.5麻疹血清标本采集情况,2014-2015.5全省麻疹疑似病例咽拭子标本采集情况,存在问题,1、麻疹标本的采集情况：近年来麻疹疑似病例标本采集率、合格标本采集率以及采集质量有很大改善，但咽拭子病原学标本整体采集率仍较低，岀疹5天后采集的咽拭子仍占较高的比例，采集合格咽拭子标本工作需要进一步加强。麻疹血清标本、咽拭子标本同时采集的问题。麻疹首发病例病原学标本跟踪采样不够、信息不全，难以寻找可能的传播链。标本及时送检、保存问题。,目标：无本土麻疹野毒株传播，至少维持12个月以上。麻疹病毒本土基因型H1a仍持续流行。2014年（30个省）、2015年1-3月（15个省）。输入

14、病毒引起流行的潜在危险。2009-2014年，全国共监测到D8、D9、B3、G3外来输入基因型病毒。其中2014年10个省（D8、D9、B3）；监测到疫苗株病毒，引起疫苗相关病例。2015年1-3月（天津、云南）可能出现新基因型病毒的引起的流行。引起发热岀疹症候群的其他病原体的监测和疾病的鉴别诊断。如B19病毒、登革热病毒、HHV、ECHO、风疹病毒及其他病毒。,消除麻疹面临的挑战,严格按照各疾病监测方案要求，做好标本的采集、运送和保存工作，确保标本的采集质量。提高麻疹咽拭子合格标本采集率。满足岀疹5天内条件下，可考虑血清标本和咽拭子标本同时采集。咽拭子标本采集困难者，可采集尿液标本。加强对首发病例血清、特别是病原学标本的采集，便于追踪病毒传播途径；提高对输入病毒引起流行的意识，加强对外来流动人群（特别是外籍病例）病例标本的采集工作，尤其我省流动人群比较密集的市地。,今后工作要求,联系方式：Email:Tel.:0531-82679698,Thank you！,