trizol LS 试剂使用中文说明书.doc
《trizol LS 试剂使用中文说明书.doc》由会员分享,可在线阅读,更多相关《trizol LS 试剂使用中文说明书.doc(5页珍藏版)》请在三一办公上搜索。
1、trizol LS 试剂使用中文说明书TRIzol LS 试剂(ambion)(中文说明书)货号 规格 室温贮存10296-010 100ml10296-028 200ml产品描述TRIzol LS试剂适用于液体样品,如人、动植物、酵母、细菌或者病毒来源的液体样品,提取高质量的总RNA(DNA和蛋白质也可以)全过程只需1小时。TRIzol LS试剂里含有酚、异硫氰酸胍和其它成分,由于在摇匀样品过程中能很有效地抑制RNase活性,所以TRIzol LS试剂能维持RNA完整性。TRIzol LS试剂允许同时处理大量的样品。TRIzol LS试剂能从一个样品里有序分离提取RNA、DNA和蛋白质。TR
2、Izol LS试剂均质化样品后,加入氯仿,能看见分层现象,上层是透明的含RNA的水相,中间层,下层是红色的有机相(含有DNA和蛋白质)。水相RNA用异丙醇能沉淀分离;中间层或者下层中的DNA用乙醇沉淀分离;异丙醇沉淀能使蛋白质从酚-醇相的上清液中沉淀出来。沉淀出的RNA、DNA和蛋白质洗脱杂质,重悬后用于下游。分离的RNA可以用于RT-PCR, Northern Blot analysis, Dot Blot hybridization, poly(A)+ selection, in vitro translation, RNase protection assay, and molecula
3、r cloning分离的DNA可以用于PCR, and Restriction Enzyme digestion, and Southern Blots. 分离的蛋白质可以用于Western Blots, recovery of some enzymatic activity, and some immunoprecipitation.注意:TRIzol LS试剂适用于液体样品(如,血液和病毒制品)。TRIzol LS试剂与TRIzol试剂仅在它们成分的含量上不同,TRIzol LS试剂的浓度更高,因此相对于同个样品时,TRIzol LS试剂需要量更少。不要将未稀释的TRIzol LS试剂用于
4、固体样品。处理固体样品时,TRIzol LS试剂没有TRIzol试剂效果好,收率要低些。警告TRIzol LS试剂含有的成分具有毒、腐蚀性和刺激性,如果处理不慎会有危害健康。请在通风橱里操作,并穿好实验服、戴好手套和安全眼镜。避免直接接触TRIzol LS试剂,会导致皮肤、眼睛或者呼吸道等暴露部位的化学灼伤。如果万一接触了皮肤或者眼睛,请立即用大量水冲洗15min,必要时去医院护理。如果吸入了气体,立刻到通风地方呼吸新鲜空气,必要时去医院护理。内容和贮存TRIzol LS试剂有100ml和200ml两种规格的,室温运输和贮存。妥善保管,1年内性质都很稳定。使用目的仅用于研究,不能用于人或动物的
5、诊断或治疗。需要材料分离RNA、DNA和蛋白质还需要下列材料,但是我们未提供分离RNA时,需要:氯仿;异丙醇;75%乙醇(DEPC水处理过);无RNase水或者0.5%SDS;能达到12,000*g的高速离心机;聚丙烯微量离心管;水浴槽(55-60)。分离DNA时,需要:氯仿;100%乙醇;75%乙醇;0.1M柠檬酸钠(10%乙醇);8mM NaOH;能达到12,000*g的高速离心机;聚丙烯微量离心管。分离蛋白质时,需要:氯仿;异丙醇;100%乙醇;0.3M盐酸胍(95%乙醇);1%SDS;能达到12,000*g的高速离心机;聚丙烯微量离心管。样品准备样品均质化1.确定样品类型,在室温下如下
6、表操作。TRIzol LS试剂与样品的体积比为3:1,一定要按指定的量加入TRIzol LS试剂,否则提取RNA会有DNA污染。6注意:当样品少量(<10细胞或者<10mg组织)或者样品体积<0.25mL,为方便提取RNA,需用无RNase水调整样品体积到0.25ml。样品类型为生物液体时,操作步骤:1.每0.25ml样品加入0.75mlTRIzol LS试剂;2.移液器上下吹匀几次,使样品均匀。注意:污染物质含量高的生物液体(如,全血)应该先用无RNase水按1:1稀释。样品类型为组织时,操作步骤:1.每50-100mg组织样品或者0.25ml组织悬液加入0.75mlTRI
7、zol LS试剂;2.高速搅拌器混匀样品。注意:采集样品后要立即处理和冷冻组织样品,不能处理未稀释的固体样品。样品类型为单层贴壁细胞时,操作步骤:1.吸出培养皿中的培养液;2.每10cm2表面积的培养皿加入0.3-0.4mlTRIzol LS试剂,直接加到培养皿里细胞上;3. 移液器上下吹匀几次,在培养皿里直接裂解细胞。注意:不要在培养皿中加水混匀,粘附在皿上的残留培养液足够了。 样品类型为悬浮细胞时,操作步骤:1.离心去除培养液获得细胞;2.每0.25ml样品(来自动植物或者酵母细胞5-10*106,或者细菌细胞1*107)加入0.75mlTRIzol LS试剂;注意:加入TRIzol LS
8、试剂之前切忌洗涤细胞,避免增加mRNA降解机率;3. 移液器上下吹匀几次,裂解细胞,对于酵母或者细菌细胞,可能还需要高速搅拌器来充分裂解。2.(可选)当样品里脂肪、蛋白、多糖或者胞外物质(如,肌肉、脂肪组织或者块茎植物等材料),需要再加个分离步骤,移除样品里难溶物质。注意:如果你还需要回收样品里DNA,就不能做此步。具体步骤:1.混匀样品(如前面步骤1所述)后,4下,12,000*g离心样品10min;注意:离心后沉淀物质包含ECM、多糖和高分子量的DNA,RNA在上清液里,若样品富含脂肪,在上清液上面还有脂肪层;2.移除覆盖的脂肪层;3.将澄清的上清液移到新的离心管中。3.进行相分离,或者储
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- trizol LS 试剂使用中文说明书 试剂 使用 中文说明书
链接地址:https://www.31ppt.com/p-2881501.html