肿瘤免疫治疗.ppt

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1、 Cytokine-induced killer Cell（CIK）,肿瘤免疫治疗,1 相关免疫概念2 CIK细胞已知的主要细胞表型及相应功能3 自体/异体CIK细胞免疫治疗流程和注意事项4 DC-CIK细胞5 小结,主要内容,机体的抗肿瘤免疫效应机制,逃逸,体液免疫细胞免疫,肿瘤,机体：监视、抗瘤,体液免疫机制：激活补体系统溶解肿瘤细胞；抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用；抗体的调理作用；抗体封闭肿瘤细胞上的某些受体；抗体使肿瘤细胞的粘附特性改变或丧失；不是机体主要的抗肿瘤途径,机体的抗肿瘤免疫效应机制,细胞免疫机制：T细胞 CD3-TCR Ag+MHC-I 抗原活化T细胞 CD8+带相应抗原的

2、肿瘤细胞 辅助分子 辅助分子（CD28）（B7）CD8+主要效应细胞 溶细胞；分泌TNF,IFN-CD4+诱导抗瘤细胞免疫，免疫记忆维持，释放IL-2 NK细胞 直接杀伤，ADCC（无Ag特异性，无MHC限制性）巨噬细胞 APC，溶肿瘤细胞，释放TNF，是机体主要的抗肿瘤途径,机体的抗肿瘤免疫效应机制,肿瘤相关因素 抗原缺失和调变；MHC-I类分子表达低下；缺乏协同刺激信号；“漏逸”现象；分泌CK致机体免疫抑制 宿主相关因素 免疫功能低下/免疫耐受；APC功能低下；存在“增强抗体”,肿瘤的免疫逃逸机制,逃避免疫监视；逃避免疫攻击；抑制机体抗瘤效应,肿瘤的治疗手段,肿瘤发生、发展中 机体防御系统

3、 肿瘤组织 失去平衡 目前主要手段：手术，化疗，放疗其他手段：介入、热疗、中医、生物治疗 肿瘤生物治疗：调动机体固有能力去抵御肿瘤，主要是指来自生物体自身的一些分子和细胞。包括肿瘤的免疫治疗和基因治疗。,过继细胞免疫治疗,非特异性免疫刺激：免疫增强调节剂（BCG）,肿瘤免疫治疗策略,免疫细胞,IFN,TNF,CSF,定义 给患者转输免疫效应细胞以发挥其免疫效应，达到 治疗肿瘤和其他疾病目的2层意思：体外培养条件能突破体内免疫调节网络，大量扩增免疫效应细胞；回输免疫细胞后能弥补或纠正细胞免疫功能低下，直接和间接参与杀伤肿瘤。,过继细胞免疫治疗,分为 非特异性免疫效应细胞 淋巴因子激活的杀伤细胞（

4、LAK）细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）CD3单抗激活的杀伤细胞（CD3AK）自然杀伤细胞（NK）自然杀伤T细胞（NK T）rT细胞 巨噬细胞 特异性免疫效应细胞 特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）B淋巴细胞,过继细胞免疫治疗,1981年 IL-2名为T细胞生长因子 IL-2 人外周血/脾细胞悬液 单个核细胞 淋巴因子激活的杀伤细胞（LAK）人类自体淋巴细胞溶解新鲜实体瘤细胞-2000年 CD3-CD3+CD16+CD56+CD11b+只攻击肿瘤细胞，不攻击自身细胞；识别肿瘤细胞上的抗原簇不详；体内联用大剂量IL-2，不良反应严重,1986年 肿瘤细胞悬液 单个核细胞

5、 IL-2 肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）T NK B 抗瘤效价为LAK的50-100倍 培养过程繁冗不易稳定获取，不常用此法,1987年 IL-2+抗CD3,IL-1,IFN-增殖 溶瘤活性,1991年 建立经典CIK培养体系；CIK细胞增殖力，活性均显著强于LAK,TIL,CD3AK；肿瘤建模小鼠，CIK生存时间明显延长，且有30%（LAK为0%）长期存活率 1995年 日本一项随机试验 CIK降低肝癌术后的复发率，并延长术后无复发生存时间，但是不能提高整体生存率。此法开始多用。,各类过继性免疫治疗的淋巴样细胞的特点,表型及功能 混杂细胞群；对肿瘤细胞的杀伤机制不是完全清楚 CD3+细胞群（9

6、0%）CD3+CD56+细胞群（30%）效能最强 CD3+CD56-细胞群（60%）CD3-CD56+NK细胞群（2%）,Cytokine-induced killer Cell（CIK细胞）,其他：CD45RA(+)淋巴细胞信号转导、增殖、活化 CCR7(-)趋化肿瘤细胞转移 CD62L-弱阳性 粘附分子 CD11a(+)粘附分子 CD27(+)TNFR超家族，促进T细胞增殖、分化 CD28(-)协同刺激因子-B7 巨噬细胞炎症蛋白(+)穿孔素(+)Fas配体(+)NKG2D,CD3+CD56+CIK,LFA-1,肿瘤细胞,ICAM,NKG2D,DNAM-1(CD226),NKp30（CD3

7、37）,抗原簇,MIC,CD112/CD155,乙酰硫酸多聚糖,Dual functional capability of CD3+CD56+CIK cells,a T-cell subset that acquires NK function and retains TCR-mediated specific cytotoxicity.Pievani A，Blood.2011 Aug 5.,CD4+,IFN-,DC,T,B,穿孔素,Fas,凋亡溶解,IL-2,IL-6,CD56+,NK,M,自体CIK细胞免疫治疗流程,伦理原则：科学性原则，不伤害原则，知情同意原则，对病人有利原则，尊重原则

8、治疗前患者及家属应享有充分的知情权，应当向患者和家属告知治疗目的、治疗风险、治疗后注意事项、可能发生的并发症及预防措施等，并签署知情同意书。属第三类医疗技术 涉及重大伦理问题，安全性、有效性尚需经规范的临床试验研究进一步验证的医疗技术，风险性高，安全性、有效性尚需验证或者安全性、有效性确切的医疗技术。严格遵守细胞治疗治疗技术操作规范和诊疗指南，根据患者病情、可选择的治疗方案、患者经济承受能力等因素综合判断治疗措施，因病施治，合理治疗，严格掌握细胞治疗治疗技术临床应用适应证和禁忌证。尚无技术管理规范。,自体CIK细胞免疫治疗临床应用原则,每例患者培养的免疫细胞均进行：细菌、真菌、支原体和内毒素检

9、测 无菌试验：每批培养的细胞在患者输注前均进行无菌试验。在培养第10 天起取培养液样品，包括患者回输前48 小时取样，按现行版中 国药典生物制品无菌试验规程进行。进行长期培养的细胞，进行支原体检查。对每一批细胞终制剂应留样检测。如果留样发现阳性结果或发现几次阳性结果后，应及时对生产过程进行检查。如果在细胞制备的早期发现有污染的情况，终止该批细胞制品的继续制备。细胞质量指标：每批细胞均注明来源并加以标记或确定批号；每次回输细胞数量均达到1109 以上，存活率不低于90%。,自体CIK细胞免疫治疗实验室质控标准,选择病例 1 有明确临床诊断的肿瘤病人，并有病理学诊断。2 患者预期生存期3 个月。3

10、 生存质量评分（KPS）60。4 重要生命器官功能 血胆红素 3.5109/L，血小板计数 80109/L，红细胞压积 0.20（仅供参考）5 无严重的病毒、细菌感染。6 非妊娠及哺乳期患者。7 对生物制品无过敏反应者。,自体CIK细胞免疫治疗临床流程,适应症 除T细胞淋巴瘤外任何一期肿瘤的综合治疗计划 1 手术后患者；2 无法进行手术、放疗、化疗的中晚期患者；3 放疗、化疗失败的患者；4 放疗或化疗后患者的综合治疗；5 骨髓移植后或化疗缓解后的白血病患者；6 癌性胸、腹腔积液患者。禁忌症 T细胞淋巴瘤排除标准 1 无临床明确诊断，无病理学诊断者。2 哺乳期及妊娠期患者。3 预期生存期3 个月

11、，KPS 评分60。4 严重过敏体质。5 严重病毒、细菌感染。6 重要脏器功能严重损伤、衰竭（心、肝、肺、肾）。,自体CIK细胞免疫治疗临床流程,治疗时机：残余肿瘤少，不与放化疗同时进行，结合患者自身情况，规避风险 术后1周，尽早开展；放疗前，放疗结束2w-28d后行免疫治疗；化疗间歇期，结合化疗药物半衰期，约化疗后9-14d行免疫治疗；放化疗后复发转移者，自身条件允许的患者。,自体CIK细胞免疫治疗临床流程,检查项目 作为客观指标，治疗前后对比 病理诊断资料；影像学资料；基础指标：生命体征、KPS、三大常规、肝肾功、血糖、血脂、电解质、凝血功能、肝炎系列、输血系列、肿瘤标志物、T细胞亚群、血

12、型/Rh，心电图、心脏彩超、胸片、生活质 量评分；血常规 淋巴细胞总数和比例正常,自体CIK细胞免疫治疗临床流程,医患谈话，签知情同意书 给患者合理期望值疗程安排 1 每次回输CIK细胞量1袋=100ml（1-2）x109，每次输注后IL-2 100 万U 皮下注射 1/日；2 1个疗程回输CIK细胞量 1010；3 疗程间隔为1-3个月,自体CIK细胞免疫治疗临床流程,采血前准备及采集外周血 采血前24h，清淡饮食，不输液；采血袋到实验室取，采血时间安排在上午；采患者外周血约50ml-100ml，与“CIK细胞治疗申请单”送至实验室；运送条件：2-8 保存和避免震荡,自体CIK细胞免疫治疗临

13、床流程,回输CIK 除过敏性休克外，治疗期间禁用激素 约10-12d左右，实验室送“CIK细胞输注通知单“，并取回CIK细胞；保存和运输：1h内输注者常温（25）不用特殊处理；1h 需低温（2-8）保存，避免剧烈震荡，输注时室温放置 医嘱：一级护理（按输注血制品护理，注意IL-2反应）心电监护 非那根 25mg 回输前30min 肌注 0.9%氯化钠 50ml 静点 40滴/分 CIK细胞混悬液 100ml 静点 40滴/分 1h内输完 输血器（7号针头）0.9%氯化钠 20ml 洗袋2-3次 0.9%氯化钠 50ml 静点 40滴/分 回输结束1h后 IL-2 50-100万IU/日 皮下注

14、射,自体CIK细胞免疫治疗临床流程,复查与评估：疗效评估的主要指标：形态学检查（肿瘤大小变化），肿瘤标志检测，免疫功能检测，生命质量评价，以及生存期观察等。（回输当日复查血常规等必要项目，余观察指标于7-14d后开始复查）副作用：寒战；发热：常在治疗后4-8h，T38 左右，2-4h可自行缓解，39者对症处理；乏力；恶心等消化道症状；皮疹等过敏反应；IL-2毒副反应；大剂量静脉输入细胞可能造成细胞滞留某脏器（如肺），需谨慎。,自体CIK细胞免疫治疗临床流程,回输中、回输后注意评估：穿刺点有无药外渗；使用输血器输入，8-9 号头皮针，(太细针头CIK 细胞无法通过)；选择大血管，严格按照无菌操作

15、的原则开放静脉通路；回输时必须保证针头完全在血管内方可输入CIK；回输后反复冲洗瓶中CIK 细胞液，用空针抽取生理盐水冲洗瓶子中残余液体数次直至装CIK 瓶子的壁清亮，避免细胞丢失；回输时，如发现输血器过滤网中有成团细胞，可予生理盐水冲洗后再输入，并可使用加热器加热至37，使细胞团散开后输入；回输结束拔针后按压穿刺点10 分钟以上；患者有无寒战、发热、心慌、胸闷、气急、食欲不振、疲乏无力、恶心、呕吐、全身疼痛、腹泻等现象发生；皮肤粘膜有无瘙痒、皮疹，观察有无毛细血管渗漏综合症的出现；如果病人发热(回输后1-3h 发生的，4-8h 后自然消退)，必要时口服百服宁1 片，并嘱咐患者多饮水、多食新鲜

16、蔬菜、水果；提供轻松愉快的环境，保证患者情绪稳定。注意休息，保证充足的睡眠；特别要给予患者心理疏导，保证患者有良好的心态完成治疗；连续静脉输液时，最好给予患者留置静脉针，减少穿刺次数，减少疼痛。,自体CIK细胞免疫治疗临床护理,一些中晚期肿瘤患者或接受放化疗后的患者，机体免疫低下，外周血中的单个核细胞无法进行扩增，因此可用同种异体细胞进行培养。异体CIK不需配型，但需血型、交叉配血相合，其余过程相同,异体CIK细胞免疫治疗,DC-CIK细胞制备,手术切除标本,外周血,单个核细胞,贴壁细胞,悬浮细胞,未成熟DC,成熟DC,CIK细胞,DC-CIK共培养,DC-CIK大量扩增,GM-CSFIL-4,肿瘤细胞裂解物,IFN-r anti-CD3 IL-2,CIK细胞是是一种新型的免疫活性细胞，具有增殖速度快、杀瘤活性高、杀瘤谱广及非MHC限制性杀瘤的优点。回输体内后达到杀灭癌细胞、抑制肿瘤生长及清除残留微小病灶的作用。由于CIK细胞对人体细胞、免疫系统毒无明显副作用，而且对一些多重耐药的肿瘤敏感，可进一步临床研究，成为肿瘤治疗的辅助手段。,小结,谢谢大家,