Nano-ITC安装操作培训.ppt

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1、,非常感谢选择TA产品，有任何问题请不要犹豫联系我们！,Nano-ITC 安装操作培训,Nano-ITC 介绍,第一章 Nano-ITC基本介绍,Why use Nano ITC?,完全通用的技术ITC 测量吸热和放热直接测量焓提供反应热力学的信息亲和测量的选择技术天然的,未改性的配体和基质都可以用固定化方法或标记方法都需要对大分子和小分子同样有效基本上兼容任何缓冲或添加剂可进行任2到80温度范围内的等温反应,Isothermal Titration Calorimetry(ITC),ITC是公认的“测量分子的结合反应的金标准”技术可在一个实验中给出了分子结合反应的完整的热力学分布焓-H镝 S

2、结合常数-Ka化学计量比 nITC仪器的提供了较大灵活性ITC 标准体积-1.0 ml 样品池ITC 小体积-190 L 样品池ITC 技术可持续改进真正的功率补偿型最大的灵敏度和再现性,Nano-ITC 介绍,混合解决方案测量热（Q）适用假设模型拟合数据数据分析 测量参数:Kd,G,H,S,stoichiometry,CMC Cp,H+,Km,kcat解决实现结构变化lead优化,Nano-ITC 介绍,数据拟合:化学计量学Stoichiometry(n)结合系数Binding constant(103 KITC 109)焓值Enthalpy(HITC)热力学参数Thermodynamic

3、parameters:G=-RT ln(K)G=H-T S 热容Heat Capacity Cp=(H/T)p,HITC,n,KITC,dP,H,Nano-ITC开机,第二章 开机顺序,Nano-ITC开机,检查仪器电源线及USB信号线连接正常打开仪器背后的电源开关，观察仪器前面板前TA灯亮,Nano-ITC 开机,等待电脑检测到仪器，点击桌面快捷 软件launch ITCRun界面会弹出以下信息(开机后，滴定头不在起始位置，请确定执行）The buret has not been Home Reset since the instrument was powered,Please click

4、 ok to Home Reset the buret.默认执行“确定”进入下界面,Nano-ITC 开机,根据页面提示检查滴定头（确保滴定注射器取下，重新安装好空的滴定头）点击OK后即可,Nano-ITC 开机,根据页面提示检查滴定头（确保滴定注射器取下，重新安装好空的滴定头）点击OK后即可检查online绿色指示标志，及热流信号，确认联机正常,Nano-ITC仪器操作,第三章 实验测试操作,DSC 控制软件,Nano-ITC 控制软件,搅拌转子 速度 启动/停止,滴定注射器的体积,滴定实验温度,数据采样周期 默认1S,小体积的对应 50uL大体积的对应100uL或250uL,Nano-IT

5、C 控制软件,分次滴定（默认推荐）一次性滴定（适用量大，时间长实验）电子脉冲,实验开始前的平衡设置可以指定具体延迟时间自动平衡（根据基线稳定要求分别可选 小/中/大）,Nano-ITC 样品前处理,样品前处理准备约50mL的缓冲溶液（用来润洗样品池及注射器，或者实验结束后先用缓冲溶液清洗样品池）将样品（滴定物和被滴定物）及上述的缓冲溶液一起放入degassing station 脱气处理Degassing station 设置温度（测试滴定实验温度），真空度400mmHg以上，脱气时间10min,Nano-ITC 装样品,样品池用装样针取准备好的缓冲液（推荐与样品相同的缓冲液）润洗样品池35次

6、抽净样品池内的缓冲溶液，用上样针取样品（小体积池的建议最少300uL，标准体积池的1200uL）加注到样品池内。（注意上样针刚好接触样品池底后加注，以免内部有气泡产生）,Nano-ITC 装样品,参比池用装样针取脱好气的水润洗样品池35次抽净样品池内的润洗水，用上样针取去离子水加注到参比品池内，使水刚好溢出样品池口。用长镊子加持参比管加入参比池内。,Nano-ITC 装样品,滴定注射器装样仔细地将滴定物装载到注射器内，确保注射器内没有气泡（可以先将气泡集中到注射器前端，在用推杆移除）将注射针筒按照螺纹方向悬转安装在滴定头上，将多余的溢出样品擦干净。将组装好的滴定注射器小心的装在仪器上。,Nan

7、o-ITC 实验的软件设置,设定搅拌速率（小体积的搅拌速率推荐300350rpm，标准体积的搅拌速率推荐250350rpm）并点击开始启动搅拌，搅拌马达启动。,Nano-ITC 实验的软件设置,在Setup中设置界面中，分别输入设定试滴定温度，滴定体积，滴定步骤等参数。,Nano-ITC 实验的软件设置,设置平衡模式：start delay指固定平衡时间，时间到无论平衡与否均开始实验Auto Equilibrium指用户可根据反映热大小设置基线噪声平衡灵敏度(small,medium,large),反映热越小基线越要稳定对应small.该参数后面timeout 指自平衡过程最大的等待时间，时间

8、到基线没有满足要求，实验也马上开始基线的设置 一般设置前基线，后基线可以不需要,Nano-ITC仪器维护,第四章 仪器试验后的清洁,Nano-ITC 实验后的清洗,为了确保安全，请检查实验结束后温度降到2030度后在进行以下步骤从主机上移除含有注射针的滴定头，利用上样针将样品从样品池尽量取净将清洁套件小心插入样品池，分别连接degassing station 和装有清洁剂或去离子水的容器。,Nano-ITC 实验后的清洗,所对应的附件连接后，开启Degassing station 后，选择Clean量程，清洗流程开始工作，清洗剂或去离子水流经样品池清洁，而后流入废液容器收集。,Nano-ITC

9、 实验后的清洗,一般情况下，先以300ml的清洗剂（3%SDS或其他市场上的专用清洗剂，如Micro90 Contrad70，Decon90）清洗，再以1公升干净的去离子水清洗。即可完成池体清洗。如实验特殊，无法用常规方式清洗干净，请联系TA仪器咨询协助。,Nano-ITC 数据分析,点击运行Launch NanoAnalyze,Nano-ITC 数据分析,执行File-Open 选择*.csc;*.jet;*.nitc，可能的话同时打开一空实验文件点击左面序列目录中文件，进入Data Columns 页面,Nano-ITC 数据分析,点击Aanlysis，进入Baseline页面,Nano-

10、ITC 数据分析,输入/填全 滴定实验参数,Nano-ITC 数据分析,新版本NanoAnalyze 拟合模型视图,Nano-ITC 数据分析,选择拟合模型，如不确定拟合模型，可能需要根据多个反应尝试选择选择合适的需要的拟合模型的页面,Nano-ITC 数据分析,拟合控制参数界面,Nano-ITC 数据分析,经过很好的拟合后，有些点可能被视为异常值。这些点被放弃，重新再拟合一旦有点被重选或被剔除，先前的拟合结果就被丢弃拟合完成，K,dN,n 值被显示在右上角的视窗中,Nano-ITC 数据分析,叠图处理File-New Overly Graph,Nano-ITC 数据分析,拖动数据文件到右面的

11、原始文件区域,Nano-ITC 数据分析,托动数据文件到右面的第二文件区域。这可以用作原始的相同数据文件，也可以用作不同的量图,Nano-ITC 数据分析,通过右面Graph Setting中Split Graph 生成下图分开显示状态,Nano-ITC 数据分析,通过右面Graph Setting中选不同界面可以对输出图进行编辑,Nano-ITC 数据分析,执行快捷工具条中 Export to Clipboard or Export to file 可以对数据进行导出处理,Nano-ITC 数据分析,执行快捷工具条中 Export to Clipboard-Image 进入对话框，选择好参数，Export 即可输出图谱,Nano-ITC 数据分析,更详细清晰的数据分析请参考计算机中安装在TA Instruments NanoAnalyze-Software Guide对应的 PDF file,Nano-ITC 使用注意事项,1.选择可靠的计算机硬件及正版系统（最好英文），以便通信稳定2.严格按照装样要求，避免滴定头及滴定池中样品产生气泡3.请装卸滴定头时确保滴定头不要被弄弯变形4.实验结束后，炉池必须严格按照流程清洗，否者容易形成污染，造成后续实验的困扰。,Thank You,