2010年版药典中药材、饮片简介(1).ppt

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1、2010年版中国药典（药材、饮片）介绍,2010年9月,2010版药典中药材、饮片,2010版药典中药材、饮片,主要内容一、基本情况二、品种收载大幅增加三、饮片定义明确，标准数量大幅提高四、标准更具科学、可控、合理、实用与进展性五、其他内容,2010版药典中药材、饮片,一 基本情况中华人民共和国药典2010年版（一部）（以下简称“新版药典”），是按第九届药典委员会确定的编制大纲的目标和要求编制而成的，经中华人民共和国卫生部批准颁布实施。于2010年10月1日起正式执行，是建国以来第九版药典。,2010版药典中药材、饮片,2010年版药典编制的六个坚持1.坚持保障药品质量、维护人民健康的原则。2

2、.坚持继承、发展、创新的原则。3.坚持科学、实用、规范的原则。4.坚持质量可控性原则。5.多企业生产同一品种，其标准的制定坚持标准先进性原则。6.坚持标准发展的国际化原则。,2010版药典中药材、饮片,一部编制目标 1.全面提高和完善中药材（包括民族药）、中药饮片质量标准，重点研究道地药材与非道地药材、野生与栽培药材品质的特异性和常用中药材专属性检测方法，深入研究并建立能有效控制中药材及中药饮片质量的方法。,2010版药典中药材、饮片,2.建立符合中医药特点的质量标准体系，逐步由单一指标性成分定性定量向活性、有效成分及生物测定的综合检测过渡，向多成分及和指纹或特征图谱整体质量控制模式转化。3.

3、重点增加和完善中药安全性检测方法；增强检测方法的专属性；建立科学合理的控制指标。,2010版药典中药材、饮片,新版药典在凡例、正文、附录等方面均有整体性改进，较大的发展和提高。特别是在药品安全性、有效性和质量可控性方面尤为关注和重视。在品种收载数量，特别是中药饮片质量标准的收载数量、现代分析新技术和方法的应用等各方面，均比历版药典有长足发展和提高。,2010版药典中药材、饮片,二、品种收载大幅增加 大纲要求 1.中国药典收载的中药品种应能覆盖临床各科常用中药，满足临床常见、多发性疾病的需要，要能真实反映我国传统特色和现代中药产业的情况，使用安全、应用广泛、疗效确切、质量可控的品种。2.遴选重点

4、为使用频度较高或中成药中使用但尚未建立国家药品标准的中药材品种，以及常用进口药材品种；常用中药饮片；,2010版药典中药材、饮片,3.国家标准中已收载的有效部位、有效成分等天然药物及须产地加工或可规模化、集约化生产的供中成药企业使用的提取物；标准提高行动计划中已全面提高质量标准的中成药品种。4.调出安全性和有效性存在问题或以野生濒危动植物为原料的中成药以及商品匮乏的中药材。,1.历版收载品种数,版本 药材及饮片 油脂和提取物制剂 合计1953 65 46 1111963 446 197 6431977 882 270 1152 1985 506 207 7131990 509 275 7841

5、995 522 398 9202000 534 458 9922005 551 31 564 1146 2010 1055 47 1063 2165,2.药材、饮片品种概况,新增药材（65）：冬凌草、木棉花、龙脷叶、巫山淫羊藿、高山辣根菜等。单列饮片:制天南星、清半夏,2.标准物质概况,三、饮片定义明确，标准数量大幅提高,1.凡例第十三条：“饮片系指药材经过炮制后可直接用于中医临床或制剂生产使用的处方药品”。2.解决了长期以来饮片缺乏国家标准的问题 饮片标准数量大幅度增加，饮片标准达到822个，解决了长期以来中药材饮片标准欠缺和不足的问题。基本覆盖了中医临床常用饮片目录。,2010版药典中药材

6、、饮片,3.解决了配方和投料究竟是用药材还是饮片问题，明确入药者均为饮片，中成药处方中药味全部改用饮片名表述。4.从标准收载体例上明确了【性味与归经】【功能与主治】【用法与用量】为饮片的属性。,2010版药典中药材、饮片,中药饮片包含以下三类（共计822种）1.单列的饮片：共计25种。如制何首乌 2.附于药材之后的非单列品种，大约436种。如大黄后附饮片包括大黄、酒大黄、熟大黄、大黄炭共4个饮片。3.部分药材不需炮制的，药材本身即是饮片，大约361种。如玫瑰花等。,问题:由于在进行标准研究时，药材和饮片不同步，有的还不协调。如甘草项下甘草切片后没有标准。饮片【炮制】除去杂质，洗净，润透，切厚片

7、，干燥。,2010版药典中药材、饮片,四、标准更具科学、可控、合理、实用与进展性,（一）新版药典修订项目是历版药典最广泛、最全面。（二）测定指标更趋合理，更具专属性。（三）药品的安全性保障得到进一步加强。（四）新的检测方法和技术得到广泛应用。（五）检测方法不断改进、完善、可控。,（一）新版药典修订项目是历版药典最广泛、最全面,首次对原标准（包括拟新增品种和2005年版全部修订品种）收载的项目进行了全面验证和复核，使质量标准整体水平和系统性、可行性、规范性大大提高。2005年版药典收载中药材551种，2010年版修订的品种达359种；修订总的覆盖率达到55.2%。,2010版药典中药材、饮片,纠

8、正了过去的一些错误，如千金子霜历版药典脂肪油含量测定所用溶媒均为乙醇，是错误的，本版更正为乙醚。,药材饮片检测项目概况,1.药材拉丁名称与国际接轨,药品的拉丁名是国际通用名称，为了与国际接轨，新版药典首次将拉丁名的词序变更，即把表示“药用部位”的词后移，把表示“植物（动物）的属名或种名”的词提到最前面的命名原则。,2010版药典中药材、饮片,2005版属名或属名+种加词在后，药用部位在前2010版属名或属名+种加词在前，药用部位在后 例如甘草拉丁名由Radix et Rhizoma Glycyrrhizae修订为Glycyrrhizae Radix et Rhizoma。地黄的拉丁名由Radi

9、x Rehmanniae改为Rehmanniae Radix。,炮制品附子：原标准：Radix Aconiti Lateralis Praeparata 修订为：Aconiti Lateralis Radix Praeparata川乌Aconiti Radix 制川乌Aconiti Radix Praeparata草乌Aconiti Kusnezoffii Radix制草乌Aconiti Kusnezoffii Radix Praeparata,2010版药典中药材、饮片,2.对原植物学名进行修订,随着学科的发展，植物学名亦在不断修订，新版药典依据Flora of China、中国高等植物、中

10、国植物志等植物分类权威著作收载的植物拉丁学名，对29种原植物的拉丁学名，包括属名或种名应用错误、拼写错误等进行更正，如罗汉果由苦瓜属(Momordica)改为罗汉果属（Siraitia)，赤小豆由菜豆属(Phaseolus)改为豇豆属(Vigna)等。,2010版药典中药材、饮片,修订29种原植物的拉丁学名（拼写错误16处，定名人错误2处，删除1处，异名10处）铁皮石斛：05版：Dendrobium candidum Wall.ex Lindl.修订为：Dendrobium officinale Kimura et Migo吴茱萸:05版：Evodia rutaecarpa(Juss.)Ben

11、th.修订为：Euodia rutaecarpa(Juss.)Benth.,甘松,2005年版为败酱科植物甘松Nardostachys chinensis Batal或匙叶甘松Nardostachys jatamansi DC的干燥根及根茎。2010年版为败酱科植物甘松Nardostachys jatamansi DC的干燥根及根茎。,3.显微特征进行系统修订,显微鉴别的定义：系指利用显微镜对药材(饮片)切片、粉末、解离组织或表面以及含有药材粉末的制剂进行观察，并根据组织、细胞或内含物等特征进行相应药材鉴别的一种方法。历史：生药显微鉴别来源于植物解剖学。我国生药显微鉴别研究始于上世纪五十年代初

12、，经历了几十年的研究发展，特别是近年来显微鉴定技术与计算机多媒体技术结合，显微鉴定技术发生了质的飞跃，显微特征不再微小、难以掌握；现今显微鉴别已成为我国药典药材和中成药鉴别的重要方法之一。显微鉴定作为生药标准：中国药典、香港中药材标准、日本药局方、印度草药典、英国药典、美国药典、European Pharmacopoeia(欧洲药典)。,中国药典对显微鉴别的要求,凡有下列情况的药材，应尽量规定显微鉴别：药材组织构造特殊或有明显特征，可以区别外形相似或破碎不易识别的类似品、伪品；某些常以粉末入药、而又无专属性理化鉴别方法的药材，尤其是毒性或贵重药材。成方制剂显微鉴别：原则上应对处方中所有以粉末投

13、料的药材逐一进行研究，选择特征性强、与处方中其它药味无交叉干扰的显微特征作为鉴别依据，所收载的特征应明显、易于检出。,历版中国药典收载中药显微鉴别情况,2010版药典中药材、饮片,新版药典结合药典丛书中药材显微鉴别彩色图鉴编写，对38种中药材显微特征错误或缺陷进行修订，同时还完善中成药显微鉴别特征的表述，以往药典只规定显微特征，无药材归属，准确性差，使用不方便。新版药典首次将显微特征后标明药材名称，例如六味地黄丸标准中熟地黄的显微归属，“薄壁组织灰棕色至黑棕色，细胞多皱缩，内含棕色核状物（熟地黄）”。,2010版药典中药材、饮片,显微粉末鉴别技术国际领先2005年版收载显微鉴别620项2010

14、年版新增显微鉴别633项（含成药）,显微特征 本品根横切面：木栓层为数列细胞。栓内层窄。韧皮部外侧有裂隙，内侧薄壁细胞排列较紧密，有树脂道散在，内含黄色分泌物。形成层成环。木质部射线宽广，导管单个散在或数个相聚，断续排列成放射状，导管旁偶有非木化的纤维。薄壁细胞含草酸钙簇晶。（图1、2）,图2 示树脂道Fig 2 Showing resin canals,人 参Renshen,图1 人参(Panax ginseng 根)横切面Fig 1 Transverse section of root from Panax ginseng1.木栓层(Cork)2.栓内层(Phelloderm)3.韧皮射线

15、(Phloem ray)4.裂隙(Cleft)5.树脂道(Resin canals)6.韧皮部(Phloem)7.形成层(Cambium)8.木射线(Xylem ray)9.草酸钙簇晶(Clusters of calcium oxalate)10.木质部(Xylem),图1 丁香(Eugenia caryophyllata 花蕾)横切面Fig1Transverse section of flower bud from Eugenia caryophyllata1.表皮(Epidermis)2.皮层(Cortex)3.油室(Oil cavities)4.双韧维管束(Bicollateral va

16、scular bundles)5.通气组织(Aerenchyma)6.中心轴柱维管束(Stele vascular bundles),丁 香DingxiangFLOS CARYOPHYLLI,图2 双韧维管束放大Fig 2 Bicollateral vascular bundle magnified1.纤维(Fibres)2.韧皮部(Phloem)3.木质部(Xylem),图4 丁香(Eugenia caryophyllata花蕾)粉末图Fig 4 Powder of flower bud from Eugenia caryophyllata1.纤维(Fibres)2.花粉粒(Pollen g

17、rains)3.草酸钙簇晶(Clusters of calcium oxalate)4.油室(Oil cavities),4.填平补齐,对标准中的杂质、水分、灰分、酸不溶性灰分、有关物质等有可能影响中药质量和安全的一般检查项目全面增补完善，标准不缺项。2005年版收载各类检查1645项 2010年版新增各类检查1868项,5.薄层色谱鉴别技术更加广泛应用,薄层色谱可将中药内含成分通过分离达到直观、可视化，具有承载信息大、专属性强、快速、经济、操作简便等优点，因此为中药鉴别的首选方法。2005年版收载薄层色谱鉴别1507项2010年版新增薄层色谱鉴别2494项 薄层色谱鉴别技术可傲视各国,味连

18、雅连 云连,3种黄连的薄层色谱图像,白芷RADIX ANGELICAE DAHURICAE,异欧前胡素,欧前胡素,1 2 3 s 4 5 6,1白芷（浙江）2白芷（磐安）3白芷（杭州）4白芷对照药材5、6白芷（四川遂宁）,北五味子与南五味子的薄层色谱鉴别,北五味子Fructus Schisandriae chineses,南五味子FructusSchisandriae sphenantherae,Reference,g-schisandrin（五味子乙素）Schizandrin（五味子甲素）Schisantherin(Gomisin C)（五味子酯甲）Schisandrin(五味子醇甲）,（二

19、）测定指标更趋合理，更具专属性。,中药标准现状指标成分与药效、毒性不相关,难以有效控制中药质量；指标单一、缺乏专属性、无法有效鉴别代用品和混伪品；药材、饮片、制剂质量标准脱节，忽略质量传递规律分析方法不科学、不规范，重现性差，曲高和寡,牡丹皮的薄层色谱图-ChP2005,徐长卿的薄层色谱图-ChP2005,决明子,决明子为历版药典收载品种，2005年版药典采用HPLC法测定大黄酚的含量，并规定其含量不得少于0.080%，大黄酚为游离蒽醌类物质，具有药理活性，是决明子的主要活性成分之一。但非决明子的专属性成分，此成分为大黄、何首乌、虎杖、芦荟等多种药材的共有活性成分，不能体现决明子的特异性和专属

20、性，故新版药典用HPLC测定大黄酚和橙黄决明素含量，规定大黄酚和橙黄决明素含量不得少于0.20%和0.080%。其中橙黄决明子素为决明子特征性成分，使质量标准更具专属性。,独一味为藏药原标准测定的木犀草素为水解后的黄酮苷元类成分，既无专属性又无质量控制意义现改测专属的有效成分山栀苷甲酯和8-O-乙酰山栀苷甲酯，并规定二者含量之和不低于0.50%,金果榄,2005版药典采用薄层色谱扫描测定盐酸巴马汀含量。盐酸巴马汀不是金果榄的特征性成分。研究筛选了金果榄的药理活性，证实古伦宾是抗炎镇痛的活性成分。制备了古伦宾标准品，纯度大于98%。建立古伦宾的TLC鉴别法和HPLC含量测定方法。2010年版改为

21、含古伦宾不得少于1.0%,远志,有效成分：皂苷类、口山酮类、寡糖酯类原标准：05版(107）测定远志酸，水解后结构变化，副产物很多现测定：细叶远志皂苷（碱水解后产物单一）、远志口山酮III、3,6-二芥子酰基蔗糖,polygalaxanthone III,3,6-disinapoyl sucrose,含量限度：含皂苷以细叶远志皂苷计，不得少于2.00%。含远志口山酮III不得少于0.15%，3,6二芥子酰基蔗糖不得少于0.50%。,板蓝根,具有抗病毒活性，2010年版规定不得少于0.020%。,表告依春 goitrin,2005年版仅有依精氨酸为对照的TLC，无含量测定,板蓝根药材TLC鉴别,

22、板蓝根与南板蓝根薄层色谱图1.板蓝根（2006072505）；2.板蓝根（2006072502）；3.板蓝根（2006072503）；4.板蓝根（2006072501）；5.板蓝根（2006072504）；6.板蓝根（2006072506）；7.板蓝根（2006030101）；8.板蓝根（2006030102）；9.板蓝根（H2006041302）；10.板蓝根（H2006091901）；11.南板蓝根（2006070801）；12.南板蓝根（2006070802）；S.表告依春对照品,结果：板蓝根供试品色谱中，可检出表告依春。南板蓝根供试品色谱中无表告依春斑点。作为板蓝根中表告依春成分的定性

23、鉴别，具有专属性。,板蓝根药材中表告依春HPLC法含量测定,表告依春对照品,板蓝根样品高效液相色谱图,样品提取方法：取本品粉末2.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加50%甲醇20 mL，称重，超声提取30 min，再称定重量，补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。色谱条件与系统适应性试验：色谱柱：Ultimate XB-C18（250 mm4.6 mm，5 m）；流动相：甲醇-0.02%磷酸(7:93)；检测波长245 nm；流速1.0 mL.min-1；柱温30；进样量10 L。理论板数按表告依春色谱峰计算应不低于3000。,含量测定结果（n=3),苍术,(1)苍术素（AN）、(2)

24、苍术素醇(AL)、(3)(4E，6E，12E)-十四癸三烯-8，10-二炔-1，3-二乙酸酯(TD),三个化合物均为苍术的专属性成分，且为活性成分,苍术药材中多炔类成分HPLC法含量测定结果（n=3）（mg/g）,车前子,无薄层鉴别项、HPLC含量测定项,穿山龙,穿山龙主要有效成分为甾体皂苷成分，其中薯蓣皂苷是甾体皂苷类主要成分之一，具有抗动脉粥样硬化、降血脂、平喘抗炎和抗肿瘤的作用。主要存在于薯蓣科、百合科、豆科等植物中，其中薯蓣科植物中含量丰富，如穿山龙、黄山药、盾叶薯蓣等，其中穿山龙薯蓣皂苷的含量较高。2005版药典测定薯蓣皂苷的水解产物薯蓣皂苷元（不少于1.1%），此法测定的实际是穿山

25、龙所含的总苷元不具专属性，本版药典测定薯蓣皂苷（不少于1.3%），具有较强的专属性。,图 1 穿山龙药材薄层色谱图1.供试品溶液（080721）3.供试品溶液（080723）2.供试品溶液（080722）4.薯蓣皂苷元对照品溶液,2010版药典中药材、饮片,其他,过去历版药典大多以齐墩果酸为指标，对女贞子的质量进行评价，新版药典改测特女贞苷，夏枯草由熊果酸改测迷迭香酸，知母由菝葜皂苷元改测知母皂苷B。,（三）药品的安全性保障得到进一步加强,新版药典首次在附录中新增黄曲霉毒素测定法、二氧化硫残留测定法，除总体要求外，在品种正文标准中明确增加或完善安全性检查项目，例如对易霉变的桃仁、酸枣仁、陈皮、

26、胖大海、僵蚕等5种规定黄曲霉毒素测定，并规定每1000g含黄曲霉毒素B1不得过5g，含黄曲霉毒素G2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素B2和黄曲霉毒素B1的总量不得过10g。,黄曲霉毒素测定,黄曲霉毒素（AFT）是一类化学结构类似的化合物，均为二氢呋喃香豆素的衍生物。黄曲霉毒素是主要由黄曲霉(aspergillus flavus)寄生曲霉(a.parasiticus)产生的次生代谢产物，在湿热地区食品和饲料中出现黄曲霉毒素的机率最高。,1993年黄曲霉毒素被世界卫生组织(WHO)的癌症研究机构划定为1类致癌物,是一种毒性极强的剧毒物质.黄曲霉毒素的危害性在于对人及动物肝脏组织有破坏作用,严重时,可导

27、致肝癌甚至死亡.在天然污染的食品中以黄曲霉毒素B1最为多见,其毒性和致癌性也最强.,2010版药典中药材、饮片,黄曲霉毒素Bl的半数致死量为0.36毫克/公斤体重,属特剧毒的毒物范围(动物半数致死量10毫克/公斤=它的毒性比氰化钾大10倍,比砒霜大68倍).它引起人的中毒主要是损害肝脏,发生肝炎,肝硬化,肝坏死等.临床表现有胃部不适,食欲减退,恶心,呕吐,腹胀及肝区触痛等;严重者出现水肿,昏迷,以至抽搐而死.黄曲霉毒素是目前发现的最强的致癌物质.其致癌力是奶油黄的900倍,比二甲基亚硝胺诱发肝癌的能力大75倍,比3,4苯并芘大4000倍.它主要诱使动物发生肝癌,也能诱发胃癌,肾癌,直肠癌及乳腺

28、,卵巢,小肠等部位的癌症.,2010版药典中药材、饮片,B1是最危险的致癌物，经常在玉米，花生，棉花种子，一些干果中常能检测到。它们在紫外线照射下能产生荧光，根据荧光颜色不同，将其分为B族和G族两大类及其衍生物。AFT目前已发现20余种。AFT主要污染粮油食品、动植物食品、部分中药材等。其中以花生和玉米污染最严重。家庭自制发酵食品也能检出黄曲霉毒素，尤其是高温高湿地区的粮油及制品种捡出率更高。,黄曲霉毒素,样品的确定,限量建议,检测方法的选择,易生霉国外规定品种含发酵类药材国内常用生料粉投药,免疫亲和柱层析高效液相色谱荧光检测器（IAC-HPLC-FLD）技术 国际通用方法专属性强,参照欧洲药

29、典的限量标准拟定中药材及中成药的限量,黄曲霉毒素高效液相色谱图,黄曲霉毒素检测标准的研究,完善了国家标准与国外药品标准水平相当；,国内外标准现状,桃仁（黄曲霉毒素）,【检查】黄曲霉毒素 照黄曲霉毒素测定法（附录 V）测定。供试品溶液的制备 取本品粉末（过二号筛）5g，精密称定，加入3g氯化钠，70%甲醇75ml，高速搅拌2分钟（搅拌速度大于11，000转/分），离心5分钟（离心速度2500转/分），精密吸取上清液10ml，用水稀释至50ml，摇匀，离心5分钟，上清液用玻璃纤维滤纸滤过，取续滤液20ml，通过免疫亲合柱（流速3ml/min.），随后用水20ml洗脱（流速6ml/min.），洗脱液

30、弃去，再用1.5ml甲醇洗脱（流速1ml/min.），收集甲醇洗脱液，用水稀释至2ml，摇匀，即得。本品每1000g含黄曲霉毒素B1不得过5g，含黄曲霉毒素G2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素B2和黄曲霉毒素B1的总量不得过10g。,2010版药典中药材、饮片,对于有毒药材，为了保障临床使用，又保证安全，新版药典采用LC-MS方法对毒性成分进行限量检查，例如千里光规定阿多尼弗林碱不得过0.004%，采用同样方法的还有川楝子和苦楝皮中规定川楝素限量检查，同时细辛也规定马兜铃酸的限量检查，并规定为不得过0.001%。,2010版药典中药材、饮片,对用药时间较长、或儿童常用药品增加重金属和有害元素检查。

31、中药注射剂增加重金属和有害元素检查,中药材中二氧化硫残留,1.亚硫酸盐对人体健康的影响 中药材经硫磺熏蒸后，在这个处理过程中单质硫生成二氧化硫与中药材中无机元素生成亚硫酸盐。亚硫酸盐因其具有还原作用，可阻断微生物的正常生理氧化过程。因而可以抑制微生物繁殖，可抑制水果中氧化酶的活力，防止氧化酶对营养成分的破坏和颜色的改变。故中药材长期以来被用硫磺熏蒸，用于药材的漂白、脱色、抗氧化和防腐。是有一定的科学依据，但尚若硫磺熏蒸操作随意、无序过量使用，人体在摄入过多亚硫酸盐时对肠胃、肝脏有损害，使红血球红蛋白减少。,2010版药典中药材、饮片,2.国际上对粮食、食品中的亚硫酸盐其残留量的检测均有严格的限

32、量控制，并附有标准的检测方法。2004年韩国食品医药品安全厅发出立案预告，对进口的中药材中的二氧化硫的残留作了较严格的限量。本版药典虽然收载了中药材中二氧化硫残留测定法，但无具体品种，还没有对硫磺熏蒸药材的二氧化硫的残留量作限度控制,2010版药典中药材、饮片,以白芍为例：中检所曾检测10批药材,其中一批最高的二氧化硫残留是2998mg/kg，最低的一批为0.0688mg/kg两批相差5-6个数量级.以板蓝根为例:检测10批样品,最高可达1967mg/kg最低0.0292 mg/kg，其中6批未检出二氧化硫残留。说明10批样品中有四批被硫磺熏蒸过，其它6批未被硫磺熏蒸。板蓝根药材传统上不熏蒸，

33、检出二氧化硫残留可能是商家为使药材外观颜色好看，以次充好，这样就可以提高价格.,二氧化硫残留的测定方法1.比色法和蒸馏法 食品中亚硫酸盐（亚硫酸盐以二氧化硫计）的测定,通行的方法是第一法盐酸付玫瑰苯胺法和第二法蒸馏法。第一法盐酸付玫瑰苯胺比色法是四氯汞钠吸收，而吸收液中汞的残留高，使用后废液处理不当，对环境造成新的污染。第二法蒸馏法为经典的方法其简便、灵敏、快速易于普及。(GB/T5009.34-2003),2010版药典中药材、饮片,二氧化硫残留的测定方法,2.离子色谱法 离子色谱仪器性能先进，选择性强。但仪器较昂贵，目前尚未普及、涉及中药材，应用的分析领域较窄。针对中药材中的二氧化硫残留测

34、定仅在做一些实验基础研究工作。,2010版药典中药材、饮片,2010年版二氧化硫残留量测定法 鉴于中药材经硫磺熏蒸后在药材中多以亚硫酸，亚硫酸钠，或亚硫酸钾的形式存在的特征。借鉴国际国内环境、食品相关标准，药典采用的是蒸馏法，碘液滴定。,测定方法,取药材或饮片细粉10g，置两颈的 圆底烧瓶中，加水300400mL和盐酸溶液（6mol/L）10mL，从其中一颈导入氮气至瓶底，另颈连接回流冷凝管，在冷凝管的上端E口处连接一导气管导入一个250mL三角烧瓶底部,三角烧瓶内加入水125mL和淀粉指示液1mL作为吸收液，置于磁力搅拌器上不断搅拌，加热两颈烧瓶内的溶液至沸，并保持微沸约3分钟后开始用碘滴定

35、液（0.01 mol/L）滴定，至吸收液显蓝色且在20秒内蓝色或蓝紫色不完全消退，并将滴定结果用空白试验校正。每1mL碘滴定液（0.01 mol/L）相当于0.032g的硫（S）。照下式计算：X=(A-B)C0.0321000/W式中 X为供试品中的二氧化硫总含量，mg/g；A为供试品消耗碘滴定液的体积，mL；B为空白消耗碘滴定液的体积，mL；C为碘滴定液浓度，0.01mol/L；W为供试品的重量，g。0.032为每1mL碘滴定液（1 mol/L）相当的二氧化硫的重量,g,（四）新的检测方法和技术得到广泛应用。,新版药典结合中药的实际，在质量标准中引进了许多新的检测方法和技术，如LC-MS（液

36、相色谱-质谱联用技术）、DNA分子鉴定技术、薄层-生物自显影技术、特征与指纹图谱、一测多评技术。,液相色谱质谱联用技术,优点快速：不必过度依赖色谱分离效果灵敏：ng,pg级，特别适合于微量、痕量毒性成分的检测分析高选择性：SIM、MRM简便：不需复杂的样品前处理过程应用特征指纹蜂的鉴定导向分离、制备指标成分体内分析含量测定,有毒中药的安全标准研究：千里光、川楝子、苦楝皮,液质联用技术(HPLC-MS),千里光(新增品种),千里光 SenecioscandensBuch.-Ham.,基原：菊科千里光属植物(SenecioscandensBuch.-Ham.)的干燥全草，为中国药典1977版收录，

37、典型的“倒挂药材”。含有千里光的复方制剂：千柏鼻炎片（胶囊）、千喜片、肺宁颗粒（麻叶千里光）等。化学成分：吡咯里西啶生物碱、倍半萜、黄酮、有机酸,广泛分布于6000余种植物中（菊科、紫草科、豆科等90种中草药）大部分在肝脏代谢活化后产生毒性。急性肝毒性:肝脏的静脉闭塞症(Veno-Occlusive Disease,VOD)慢性肝毒性:肝巨红细胞症和肝纤维化坏死其它毒性：肺毒性，神经毒性，致癌，致突变毒性不可逆，在临床上尚无有效的预防和治疗药物,吡咯里西啶生物碱(pyrrolizidine alkaloids,PAs),以千里光为对象，将LC/MS技术应用于微量毒性生物碱的定量分析,千里光生物

38、碱毒性强，含量低，无紫外吸收，HPLC等常规方法无法检测,含量测定指标成分：金丝桃苷，HPLC法限量检查：阿多尼弗林碱(adonifoline),LC/MS法,参考WHO对含HPAS制品规定及HPAS毒性实验:WHO：0.015 mg/kg/day,可能致 VOD的最低剂量;小鼠口服adonifolineLD5为118.6 mg/kg；换算成人的致毒剂量为9.88 mg/kg，以人LD5剂量的1/50计为0.19mg/kg;人平均体重按70 kg计;每人每天摄入量不得高于1.05mg;按千里光药材的最大用量30g;阿多尼弗林碱的安全限度:按干燥品计不得超过0.004%,儿童递减。,千里光中阿多

39、尼弗林碱的含量及限度制定,中国药典2010年版方法,阿多尼弗林碱 照高效液相色谱-质谱法测定。色谱、质谱条件与系统适应性实验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.5%甲酸溶液（7:93）为流动相；采用单级四极杆质谱检测器，电喷雾离子化(ESI)正离子模式下选择阿多尼弗林碱的m/z 366.4离子和内标野百合碱的m/z 326.4离子进行检测。理论板数按阿多尼弗林碱峰计算应不低于8000。内标溶液的制备 精密称取野百合碱对照品适量，加0.5%甲酸溶液制成每1 ml含200 ng的溶液，即得。对照品溶液的制备 精密称取阿多尼弗林碱对照品适量，加0.5%甲酸溶液制成每1 ml 含50 ng的

40、溶液。即得。供试品溶液制备 取本品粉末（过50目）约0.2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入0.5%甲酸溶液100 m1，称定重量，超声处理（功率250W，频率40kHz）40分钟，放冷，再称定重量，用0.5%甲酸溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，精密吸取内标溶液1ml置5 ml量瓶中，加续滤液至刻度，摇匀，滤过，即得。测定法 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各2 ml注入液相色谱-质谱联用仪，按内标法以阿多尼弗林碱峰面积计算，即得。本品按干燥品计算，含阿多尼弗林碱(C18H23NO7）应不得高于0.004%。,川楝子质量标准研究,川楝子为有小毒药材，川楝素为其特征性的毒性成分，未见相关

41、的安全标准,川楝子/苦楝皮,川楝子、苦楝皮为较常用中药，因其舒肝行气止痛、驱虫的功效，在多种消化系统疾病、急慢性炎症、疼痛及蛔虫病的治疗上应用广泛。川楝子、苦楝皮均有小毒，对人和牲畜致毒的报道较为常见，主要表现为胃肠道副反应、中枢神经抑制、呼吸抑制，及肝毒性。,川楝素（toosendanin）,川楝子/苦楝皮活性及毒性成分研究：川楝素为驱虫作用的主要有效成分，研究表明川楝素具有抗炎、镇痛等活性。同时，川楝素为川楝子中的毒性成分。川楝子的质量标准及安全用药范围的研究亟待建立。,2010版中国药典修订项目川楝子/苦楝皮,川楝子药材的薄层色谱图.对照品：川楝素,HPLC-UV,HPLC-MS,川楝素

42、定量分析方法的选择,薄层色谱鉴别,苦楝皮药材的薄层色谱图.对照品：儿茶素,HPLC-MS定量分析川楝素,川楝素（toosendanin）两种结构的互变,对照品及药材SIR色谱图,川楝子 Toosendan Fuctus 苦楝皮Cortex Meliae,单四级杆质谱，负离子模式扫描；以选择离子监测模式(SIR)定量分析；灵敏度高，线性范围宽；以川楝素两个互变异构体峰面积之和计,含量限度：川楝子药材：按干燥品计算含川楝素应为0.06-0.2%；炒川楝子：按干燥品计算含川楝素应为0.04-0.2%；苦楝皮药材：按干燥品计算含川楝素应为0.01-0.2%。,DNA分子鉴定技术,DNA分子鉴定技术是利

43、用一种分子生物引物，引导DNA聚合酶在引物识别位点之间两条互补链上进行DNA合成，经过模板变形、引物复性及引物延伸三步反应的多次循环，可是特定DNA片段呈指数增加，即使待测品只有微量DNA 分子，都可充分扩增至数百个分子供鉴别和测定。,DNA分子鉴定技术,首次用于中药标准中新版药典对于蛇类药材物种鉴定采用了DNA分子鉴定技术研究采用了试剂盒使操作时间大大缩短，精度提高该方法的采用有力的遏制了困扰市场和监督多年的假冒伪品问题。,2010版药典中药材、饮片,【鉴别】聚合酶链式反应法(PCR)模板DNA提取 取本品粉末约0.5g，液氮中充分研磨使成粉末，取适量（约0.1g）至1.5mL离心管中，加入

44、275l消化液（细胞核裂解液200 l，0.5M EDTA 50l，蛋白酶K（20mg/ml）20l，RNA酶溶液 5l），55温育1小时，入250l Wizard SV Lysis Buffer混匀，加到柱中，10000r/min离心3分钟；弃掉过滤液，加入800l洗脱液（醋酸钾162.8mM，Tris-HCl 22.6mM（pH7.5），EDTA 0.019mM（pH8.0），60%乙醇），10000r/min离心1分钟；弃掉过滤液，用洗脱液反复洗脱3次，每次10000r/min离心1分钟；弃掉最后一次过滤液后再离心2分钟，将过滤柱转移入新的离心管中，加入100l无菌双蒸水，室温放置2分钟

45、后，10000r/min离心2分钟，滤液-20保存备用。取对照药材粉末约0.5g，同法制成对照药材模板DNA溶液。,2010版药典中药材、饮片,PCR反应 鉴别引物：5GGCAATTCACTACACAGCCAACATCAACT3和5CCATAGTCAGGTGGTTAGTGATAC3。PCR反应体系：25l反应体系包括10PCR缓冲液2.5l，dNTP（2.5mM）2l，鉴别引物（10M）各0.5l，高保真Taq DNA聚合酶（5U./l）0.2l，模板0.5l，无菌双蒸水19.3l。PCR反应参数：95预变性5分钟后，进行30次循环（95 30秒，63 45秒），后延伸72 5分钟。电泳检测

46、用琼脂糖凝胶电泳法，胶浓度为1，胶中加入核酸凝胶染色剂GelRed；供试品与对照药材鉴别PCR产物的上样量分别为8l，DNA分子量标记上样量为2l（0.5g/l）。电泳结束后，凝胶在凝胶成像仪上或紫外透射仪上观察，供试品与对照药材凝胶电泳图谱在300-400bp之间应有单一条带。供试品凝胶电泳图谱中，在300-400bp之间应有单一条带。,乌梢蛇PCR分子鉴定,10个不同批次的乌梢蛇药材PCR鉴别结果1.阳性对照 2-11.乌梢蛇12.阴性对照 13.空白,乌梢蛇药材及其混淆品PCR鉴别结果 阳性对照 2.乌梢蛇3.虎斑颈槽蛇 4.三索锦蛇5.双全白花蛇 6.灰鼠蛇7.滑鼠蛇 8.红点锦蛇 9

47、.王锦蛇10.赤链华游蛇 11.中国水蛇 12.短吻蝮蛇 13.百花锦蛇 14.眼镜蛇 15.赤练蛇 16.铅色水蛇 17.金环蛇 18.山烙铁头蛇19.黑眉锦蛇20.环纹华游蛇21.蕲蛇22.金钱白花蛇23.阴性对照 24.空白,乌梢蛇,酒乌梢蛇PCR分子鉴定,10个不同批次的乌梢蛇炮制品PCR鉴别结果1.阳性对照；2-11乌梢蛇；12.阴性对照；13.空白,薄层-生物自显影技术,TLC生物自显影是一种将薄层色谱分离和生物活性测定相结合的药物筛选方法,具有操作简单、耗费低、灵敏度和专属性高等优点,是一种快速测定生物活性的方法.可用于对具有抗菌/真菌,抑制胆碱酯酶以及清除自由基和抗氧化等活性的

48、天然产物的筛选,可实现活性指导的提取分离.利用TLC生物自显影,可测定单体活性化合物的最小抑制浓度(MID),通过与对照品的MID值比较,能够推测该化合物活性的强弱.此外,利用TLC生物自显影定性及定量的特征,还可对食物、水样及动物组织中抗生素残留量进行监测.,1、DPPH 自由基清除活性,free radical inhibitor,基本原理,Yellow spot,Purple background,薄层色谱生物自显影技术,1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl（DPPH）：稳定的自由基，应用于中药抗氧化活性成分的评价和质量标准,经典显色方法与薄层色谱-生物自显影图谱的

49、对比A:碘化铋钾显色;B:胆碱酯酶体系显色;S：由上至下分别为骆驼蓬碱与去氢骆驼蓬碱（点样量：2.0 mg)；,液相色谱图与薄层色谱-生物自显影扫描图谱的对比图A.液相色谱图，B.薄层色谱-生物自显影扫描图;厚朴酚浓度为0.16592 mgmL-1，和厚朴酚的浓度为0.1604 mgmL-1,特点：灵敏、专属、与药效相关,B,紫苏梗药材的薄层色谱图A.紫外光灯（365 nm）下检视；B.浸以0.8 mg/ml的DPPH乙醇溶液，置可见光下检视S.迷迭香酸对照品;1.紫苏梗(zsg-070901);2.紫苏梗(zsg-070709);3.紫苏梗(zsg-tj-4);4.紫苏梗(zsg-tj-13

50、);5.紫苏梗(zsg-tj-9-5);6.紫苏梗(zsg-tj-11);7.紫苏梗(zsg-080526);8.紫苏梗(zsg-tj-15);9.紫苏梗(.zsg-tj-9-4);10.紫苏梗(zsg-070827),薄层-生物自显影技术,和生物活性测定相结合使薄层色谱分离得到的结果，除了鉴别真伪之外，还能知道其中哪些成分有生物活性。新版药典在生地黄、熟地黄等标准中应用。,2010版药典中药材、饮片,例1.地黄 取本品粉末1 g，加80%甲醇50 ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，加水 5 ml使溶解，用水饱和正丁醇萃取4次，每次10 ml，回收正丁醇，残渣加甲醇2 ml使溶解，作为供