NK免疫细胞..ppt

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1、自体免疫细胞抗肿瘤治疗应用现状和前景介绍,1,1,第一部分 自体免疫疗法介绍 细胞免疫治疗的起源及科学依据 细胞免疫疗法的种类和治疗流程,什么是自体免疫疗法,自体免疫细胞疗法是抽取患者2050ml血液体外分离出少量的免疫细胞，然后利用高科技手段体外扩增，使得免疫细胞数量增加到原来的几千倍以上，再将扩增的免疫细胞体外诱导使之对患者的癌细胞有识别和杀伤能力后将这些活性化的免疫细胞回输到患者体内，以此来提高患者的免疫力和对癌细胞的杀伤能力，也就是用自己的免疫细胞有针对性的治疗自己的疾病的疗法。由于这种免疫细胞是活化的自体细胞，应用起来非常安全。,1.手术疗法(1600 B.C.Edwin Smith

2、 Papyrus;1809,surgical excision was established as the primary method of treating solid tumors)2.放射线疗法 Radiation(1896,just one year after Roentgen first reported the use of x-rays for diagnostic purposes in medicine.)3.化学疗法 Chemotherapy(20th century),4.免疫疗法Immunotherapy(20th century,1970),癌症的治疗 Canc

3、er Treatments,No1-3 疗法在排除癌症的同时亦伤害机体本身（副作用）,细胞免疫治疗的起源,细胞免疫疗法最早从LAK的临床应用开始。1984年Rosenberg研究组经美国食品和药品检验局(US Food and Drug Administration,FDA)批准下，首次应用IL-2与LAK协同治疗癌症并获得明显疗效。但由于IL-2在治疗过程中出现毒副反应（毛细血管渗漏综合征，capillary leak syndrome,CLS)，主要表现为全身性水肿和多器官功能失调，可引起胸腹腔积液、肺间质水肿和充血性心力衰竭。引起CLS的机理可能与内皮细胞损伤和产生血管活性物质有关。19

4、92年美国的Rosewell Park 医院中止了此疗法。21世纪初期开始，研制和开发出特制人体活化自身淋巴细胞体外培养液，成功地建立起崭新的细胞免疫疗法。采取病人少量的血液，将分离出的淋巴细胞在含有特殊细胞刺激因子及营养素的培养液中培养，使培养细胞定向分化和大量增殖为活性NK细胞。其活性（NK cell cytotoxic activity）可达到80%以上。临床应用治疗上百例各种原发及转移癌症及病毒性肝炎病人，取得了良好疗效，同时没有副作用出现。,细胞免疫疗法的发展史,发挥免疫功能的免疫细胞种类,NK 细胞（Natural killer cell)：T 细胞：树突状细胞（Dendritic

5、 cell即DC）：B 细胞 单核细胞,细胞免疫治疗的种类,细胞免疫治疗的流程,自体NK免疫细胞抗肿瘤疗法介绍,自体NK免疫细胞疗法是抽取患者2050ml血液体外分离出少量的NK细胞，然后利用高科技手段体外对NK细胞进行诱导，使NK细胞对患者肿瘤细胞有识别和杀伤能力，再将活性化后的NK细胞数量增加到原来的几千倍以上，再将这些活性化的NK细胞用点滴的方式回输到患者体内，以此来提高患者的免疫力和对癌细胞的杀伤能力，也就是用自己的NK免疫细胞有针对性的治疗自体肿瘤的疗法。,3,目前这种疗法在日本，美国已经成为肿瘤患者临床治疗肿瘤的首选疗法。这种疗法使用率在占肿瘤患者中约占80%以上。由于这种免疫细胞

6、是活化的自体细胞，无毒、无致敏反应；应用起来非常安全、简便；治疗范围广谱、效果也很明显。,免疫系统当中，发挥免疫功能的主要细胞有NK(Natural Killer,自然杀伤)细胞，T细胞，B细胞，树突状细胞，单核细胞。NK 细胞（Natural killer cell)数量较少，在外周血中约占淋巴细胞总数的10-30%，在脾内约有3%4%，也可出现在肺脏、肝脏和肠粘膜，但在胸腺、淋巴结和胸导管中罕见。NK细胞杀伤的靶细胞主要是肿瘤细胞、病毒感染细胞、较大的病原体(如真菌和寄生虫)、同种异体移植的器官、组织等。,NK细胞,什么是NK细胞,什么是NK细胞,NK免疫细胞特征,1.形态 Morphol

7、ogy:Large granular lymphocyte(LGL).直径:15 mm 胞浆:丰富，嗜中性或弱碱性。含有大小不一的颗粒。颗粒中心电子密度一致，颗粒周围电子密度较淡。故称之为 dense core granule。由于其磷酸酶阳性，常被认为是溶酶体。含有PTA(parallel tubular array)。PTA存在于 Fcg receptor 阳性细胞。PTA 中有管状构造的A型和由膜包围的B型。Golgi小体发达，并有许多小胞。线粒体亦丰富。核:圆形或肾性。异染色体发达。有时可见核小体。2.表面标记 Surface Marker:CD3-,TCR(a,b,g,z)-,in

8、human:CD16(FcgR III)+,CD56+in mouse:NK-1.1/NK-2+3.功能 Function:非MHC约束的杀伤细胞 NK 细胞活性的正常值(51Cr遊離法)E:T=20:1 时NK 细胞活性为18-40%（E:Effector cell 末梢血单核细胞：T:Target cell 靶细胞),第二部分癌症和NK免疫细胞的关系免疫疗法的临床应用范围和使用方法,癌症和NK免疫细胞的关系,医学研究证明：健康人的体内每天会有3000-5000个细胞发生癌变，之所以没有表现出癌症症状是因为体内的免疫系统及早识别了癌细胞并将其杀死，阻止了癌细胞的过度增值，防止了癌症的发生。消

9、灭一个癌细胞需要数十个淋巴细胞的攻击。而活化的NK细胞一个或数个就可以杀死一个癌细胞 当某种原因（如：持续的精神压力，不良的生存环境以及吸烟，饮酒等不良生活习惯）导致免疫系统失衡，机体防御能力下降时，免疫系统对癌细胞的识别杀伤能力就会显著下降，最终癌细胞会得以进一步扩增产生癌症症状。NK细胞的活力和数量是人体健康的重要保证。美国疾病控制中心（）去年的报告显示，几乎所有疾病的产生都与NK细胞的活性明显不足有关。,4-5,如果用海水的涨潮时的波浪来比拟癌细胞，用防波堤来比拟NK细胞活性那么：如果NK细胞的活性高，癌的波浪即使冲来，也越不过NK的防护堤，因此癌症便不会发生。但是，当NK细胞的活性，因

10、精神压力、其他的疾病、药物的副作用等各种原因而下降时，防波堤变得脆弱松软了，那么癌的势力一强就会高于NK细胞，致使体内的癌细胞明显增加。更严重的是，癌为了自身的生长而极力压制体内的NK细胞免疫能力。因此，就出现了和癌细胞战斗,细胞免疫疗法的临床适用范围,1.血液循环密布的肿瘤和组织，免疫细胞容易到达，对肿瘤治疗效果就好2 这和NK细胞，T细胞在各个组织中的分配密切相关，分配高的治疗效果就好。分配比是生理条件下特定的，外源细胞进入血液循环系统后同样遵循这个分配比NK在外周血中约占淋巴细胞总数的15%，在脾内约有3%4%，也可出现在肺脏、肝脏和肠粘膜，但在胸腺、淋巴结和胸导管中罕见。T细胞是在胸腺

11、激素影响下由胸腺内的淋巴干细胞大量增殖分化而成的功能最复杂的一类细胞。成熟的T细胞经血流分布至外周免疫器官的胸腺依赖区定居,此疗法除了白血病及血液性疾病之外，对任何部位的肿瘤都有一定的治疗效果，治愈率20-30%左右,第三部分免疫疗法的临床治疗效果（有效，无效概率及原因,治疗效果的评价方法完全奏効所有肿瘤和肿瘤标志物等完全消失部分奏効肿瘤大小减少了30%左右长期安定肿瘤和开始治疗时相比，变化不大（以至少6个月以上时间判定）進行和治疗初期相比，肿瘤大小增加了20%,胰腺癌手术后接受免疫治疗，临床研究7年后的生存率比较（日本千叶大学癌研究中心研究报告显示如下）：,治疗前,治疗后,治疗前,治疗后,第

12、四部分免疫疗法的治疗效果的评判方法，标准，依据和时机,目前用于肿瘤效果评价数据标准,1.体外部分：,NK细胞活性检查:主要通过检测CD16,CD56,CD4/CD8,CD3/CD56来判断体外定向培养的NK细胞的活性.NK细胞活性确定之后将NK细胞与癌细胞共同培养一定时间后,通过癌细胞的清除率可以初步断定NK细胞对肿瘤细胞的杀伤度,目前用于肿瘤效果评价数据标准,2.体内部分：,遵循传统的肿瘤疗效评价方法(无瘤生存),患者接受一段时间的治疗之后可以通过传统的1998年欧洲癌症研究与治疗协会(EORTC)、美国国立癌症研究所(NCI)及加拿大国立癌症研究所(NCIC)提出抗肿瘤药对实体肿瘤客观疗效

13、评定新标准(Re o e Evaluation Criteria in Solid Tumors，RECIST)进行评价(影像学方法和肿瘤标志物方法).包括可测量和不可测量肿瘤,靶病变和非靶病变肿瘤的观察.测量肿瘤病灶的数目 靶病灶在一个器官中可以多达5个，如果有几个脏器同时受累，应选择至少2个至多10个作为评价对象等,遵循肿瘤疗效的其他评价标准(带瘤生存）,WHO标准和RECIST均以肿瘤大小变化评价疗效，追求的实际上是“无瘤生 存”，这种理念往往会导致肿瘤的过分治疗，因为肿瘤大小变化经常不能代表病人是否从肿瘤治疗中真正获益，有时还会带来不必要的医源性损害。对中晚期患者大多数只能是“带瘤生存

14、”如果单纯以WHO实体瘤疗效标准来评价，只能是稳定，甚至是无效的,而生物治疗它可以让患者达到“带瘤生存”的目的,因此生活质量的评价、体重、临床获益反应(Clinical Benefit Re o e,CBR)作为评价标准，相对地较为客观。,（1）以体重为基础的评价标准是：好转：体重增加2kg，并维持4周以 上。稳定：体重增加或减少2kg。恶化：体重减少2Kg。评价时需除外体腔积液、浮肿等因素引起的体重变化。（2）临床获益反应为标准：临床获益反应已被FDA用于双氟胞苷的批准根据，它包括对疼痛、体力状况及体重改变的综合评估，并被规定为至少下列一项指标好转（持续4周；并且无任一指标恶化）：镇痛药用量

15、减少50，疼痛强度减轻50，体力状况改善（K）20分。或镇痛药用量、疼痛强度及体力状况稳定，体重增加7（非液体潴留），持续4周。,实现这项技术所需实验室条件,GMP(Good Manufacturing Practice)GMP是药品生产和质量管理的基本准则。适用于药品制剂生产的全过程、原料药生产中影响成品质量的关键工序。NK细胞培养过程亦要遵守GMP 本研究所按照GMP的要求在NK细胞培养的全过程中实施科学的全面管理和严密的监控来获得预期质量,实现这项技术所需实验室条件,血液检测指标,第五部分NK细胞应用前景,NK免疫细胞应用前景,健康保健 美容（氧自由基释放）肿瘤个体化治疗,NK及其它免疫

16、细胞在体内复制时会释放大量的氧自由基，体外复制后输入避免了自由基的产生。人体自有一套消除氧自由基的系统，其中主要的称作“超氧化物歧化酶”（SOD），这个系统的能量是随着年龄的增长而减弱的，老年时达最低点。如未被清除的氧自由基过多或过于活跃，人体的器官和细胞就像裸露的金属会被氧化一样，受到氧自由基的侵蚀，进而导致一些疾病并加速衰老，如出现皱纹、老年斑、动脉硬化、冠心病以及老年痴呆等。,最近研究证实：细胞因子中IFN-、TNF-、TNF-、IL-1和GM-CSF均可诱导中性粒细胞和巨噬细胞的呼吸爆发，进而促进FR的产生。这种可诱导性在免疫学上具有重大意义。（NK细胞会释放这些因子）呼吸爆发(respiratory burst):吞噬细胞在吞噬过程中，其富有的NADPH氧化酶和NADH 氧化酶可催化摄取的氧接受电子而转变为氧自由基，用以杀灭微生物及外来异物，同时拌耗氧量显著增加，这一现象称为呼吸爆发或氧爆发。,NK免疫细胞治疗乙肝的情况,NK免疫细胞治疗丙肝的情况,NK免疫细胞治疗丙肝的情况,