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1、第二章 微生物农药 昆虫数量和种类很多 危害农作物，传播疾病等 无机和有机砷化物 DDT（20世纪40年代）作用于昆虫神经与肌肉组织 杀灭多种昆虫,我国每年因病虫草鼠害造成的经济损失达500亿元，如果不使用农药农作物粮食会损失50%，使用农药防治则挽回损失的15%。90年代我国农药生产已跃居世界第二位。众所周知,化学农药在人类战胜病虫害中曾经起到不可估量的作用,但也给人们带来了不少“麻烦”。最典型的要算DDT。1939年瑞士化学家米勒发现了这种化学物质的强大杀虫能力,1943年盟军占领意大利那不勒斯,遭到斑疹伤寒、虱子的威胁,司令部下令,所有的军人和老百姓必须在大街上接受DDT溶液喷洒,果然虱

2、子全灭,疾病绝迹。此后,它成了消灭蚊蝇、预防传染病、杀灭某些农作物害虫的主要药物。米勒也因此获得了1948年度诺贝尔生物和医学奖。,如今,这种曾一度风光的化学物品被国际社会打入“冷宫”,禁止生产和使用。原因是它具有高度稳定性,生物难以降解而积累于体内,还有的残留于水源、大气、土壤中,不仅危害动植物本身,甚至直接或间接进入人体,殃及我们的健康和生命。危害主要表现为：（1）有机氯农药不仅对害虫有杀伤毒害作用，同时对害虫的“天敌”及传粉昆虫等益虫益鸟也有杀伤作用，因而破坏了自然界的生态平衡。例如瓢虫、草蛉、食蚜蝇、食虫椿象的大量死亡，使蚜虫，红蜘蛛等害虫的繁殖速度大增。,（2）长期使用同类型农药，使

3、害虫产生了抗药性，因而增加了农药的使用量与防治次数，也大大增加了防治费用与成本。近些年,棉铃虫对溴氢菊酯的抗药性已增加到55-89倍。（3）长期大量使用农药，使农药在环境中逐渐积累，尤其是在土壤中，产生了农药污染环境问题。（4）农药被农作物吸收、进入动物体内，经过生物富集浓缩，使其毒性更大，这就不仅使得害虫的天敌更易受到毒害作用，而且会通过食物链威胁人体的健康,导致慢性中毒。有机氯农药积累干人体内脂肪、肝脏、肾脏，损害肝肾功能，引起贫血、血细胞增多和中抠神经性病变，也可能致畸和致癌。有机磷农药可以引起细胞遗传物质大改变，有致突变或致癌作用。,全球每年有500万人因接触化学农药和误食而死亡。我国

4、农村儿童白血病患者近50%的诱因是化学农药。20世纪90年代,我国虽然已禁用DDT10年,但对南方某市52名哺乳妇女母乳DDT的检出率竟然为100%。,1984年12月3日 印度博帕尔事件 液态剧毒性异氰酸甲酯，制造农药西维因和涕灭威的原料,生物农药步伐缓慢原因:(1)生物农药具有无毒副作用、不污染环境等优点，但与化学农药相比有一个明显的缺点，即施用之后药效反应慢，而且稳定性也较差，特别是活体微生物为有效成分的产品，生物活性下降很快，产品的质量保证期短。就农民的用药心理而言,希望施用农药后药到虫除，而生物农药多数要在三四天后才能见到效果。因此，难以适应农业生产快速除虫的需要。(2)生物农药生产

5、企业一般规模较小，厂房简陋、设备落后、资金短缺，由此而导致成本偏高，在价格上无优势。我国现有农药生产企业2000多家，其中生物农药生产企业约400家，但是规模较大的生物农药生产企业只有45家。这样的产业布局，造成了产品质量不稳定，商品剂型化程度低，在与国外产品竞争中，缺乏竞争力。而国际上农药业主要由7家大公司控制，其销售量占全球农药销量的90%。,(3)生物农药产业在我国没有得到足够的重视。世界上主要发达国家政府均已陆续公布了禁用或限用化学农药名单，并制定规划发展生物农药。目前，每年新研制成功和登记注册的生物农药品种以4%的速度递增，到2015年生物农药占所有农药的份额将由现在的2%3%增加到

6、50%。我国虽然在中国21世纪议程中提出发展生物农药，农业部成立了绿色食品发展中心，国家环保总局成立了有机农业食品发展中心，一些省市也已公布了在蔬菜瓜果上禁用的剧毒品、高毒化学农药名单，但迄今没有国家统一的有关禁用限用剧毒、高毒、高残留化学农药的法规，也没有一个倡导和支持大力发展生物农药的中长期发展规划。(4)由于新药筛选成功率愈来愈低，对新药性能的要求愈来愈高，因此新药筛选越来越困难。筛选化学农药的机率只有二万分之一，而生物农药的成功率是五千分之一。与生物农药相比，化学农药的开发周期3倍于生物农药，开发费用40倍于生物农药，注册费则是生物农药的100倍。这种状况迫使企业寻求新的发展途径，用更

7、多的投入来开发生物农药。随着全民健康意识和环保意识的提高，生物农药的推广必将成为今后农药发展的主流趋势。,目前，瑞士先正达、德国巴斯夫、日本武田制药、美国孟山都等跨国公司已经进入中国生物农药市场。加入世界贸易组织后，我们所面对的不仅是国内市场，而且是国际大市场，市场竞争将更加激烈。因此，为适应国际竞争环境，生物农药必须“有所作为”。,微生物农药：由微生物体产生的具有防治病虫 害和除杂草等功能的代谢产物或 活菌体.范 围：微生物杀虫剂、微生物杀菌剂(农用抗生素)、微生物除草剂、微生物生长调节剂 生物防治：用生物农药来对病虫害和杂草进行 防治 优 点：不污染环境，有效控制病虫害，杂 草；保持生态平

8、衡,我国微生物农药主要以井岗霉素和Bt为主，从品种、剂型、质量和数量上与发达国家相差甚远，还远远不能满足国内外市场的需求。在2001年国家计委高技术产业化示范工程项目中，天然植物源杀虫剂菊酯、年产6000吨“武大绿洲”系列生物病毒杀虫剂、真菌生防制剂、复合微生物活菌制剂和年产5000吨的寡聚糖生物农药5个生物农药项目获得批准。2002年又批准年产3000吨“安徽奥绿”系列生物病毒杀虫剂、年产1万吨宁南霉素、线虫生防制剂和年产3万吨固体发酵Bt等生物农药项目。,一.微生物杀虫剂 控制害虫更为安全、有效的方法 微生物杀虫剂的优点：特异性高、不伤害天敌、无毒 可进行生物降解 昆虫对它的抗性产生较慢

9、微生物杀虫剂的不足：杀虫效果较差,目前已经在生产上广泛应用的昆虫病原微生物包括真菌、细菌和病毒。,（一）细菌杀虫剂,在已知的病原细菌中，作为微生物杀虫剂在农业生产中大量使用的是苏云金杆菌(Bacilus thuringiensis)（Bt生物杀虫剂）和日本金龟子芽孢杆菌。因细菌致病的害虫，虫体发软变色，有臭味。日本金龟子芽孢杆菌则用于防治金龟子幼虫。,1、Bt生物杀虫剂,(1)发展及应用:1902年发现，1951年发现商业价值。20世纪80年代，世界上Bt生物杀虫剂总产量仅8000吨，美国占1000吨。我国生物农药研究开发起步较晚，但随着国家对Bt生物杀虫剂等研究开发和推广的日益重视，“六五”

10、至“十一五”国家科技攻关设专题研究，Bt生物杀虫剂的品种、发酵水平有很大提高，并相继推广。Bt生物杀虫剂可大规模工业生产，产量达2-3万吨/年，并在20多个省市推广用于防治粮、棉、果、蔬、林等多种害虫。,寄生于130多种鳞翅目、膜翅目、双翅目、直翅目和鞘翅目幼虫体内；控制毛虫、毒蛾、白菜金翅夜蛾、烟草天蛾 等.注:对家蚕有致病作用,可用0.3%的漂白粉消毒3分钟即可解除毒性.,(2)生理生化特性:苏云金杆菌：G+，短杆菌，形成芽孢，周身鞭毛或无鞭毛，伴孢晶体(典型为菱形、也有圆形、方形、椭圆形、不规则形)Bt对营养条件要求不高。所需主要营养物质属动植物蛋白质衍生物。能在多种N源，碳源和无机盐中

11、正常发育。通常所利用的营养是:碳源:淀粉、糊精、麦芽糖、葡萄糖、直接为Bt吸收利用 N源:牛肉膏、蛋白胨、酵母粉、花生饼粉、豆饼粉、鱼粉、玉米浆等。,无机盐:K2HPO4、MgSO4、CaCO3。主要元素有磷、硫、镁、钾、钠、钙6种，微量元素的锰、锌、硅、铁等，微量元素所需甚微，水杂质即可满足，多了有毒。温度:10-40都能生长，以28-32较适。35-40生长很快，但易衰老，温度低则生长缓慢。因此在一定范围内提高t会缩短生长期，但菌数量会降低;而t低则生长慢，生长期延长，菌数相对来说则增高。pH:与其他细菌类似，该菌适于微碱性条件，最适pH是7.5，当pH达8.5时还能形成芽孢，如pH降至5

12、以下则不能形成芽孢。,氧:是一种好氧细菌，需要充足的空气才能生长发育良好。尤其当芽孢形成时，若缺乏足够的空气时会延迟芽孢的形成或不能形成。它还影响到生长速度、菌数和晶体。在深层培养时通气不良会造成细菌溶解，使菌数降低。紫外线:阳光对芽孢都有致死作用。芽孢暴露在紫外光下很快失活:1分钟失活12%、2分钟50%失活。10分钟99%失活。在自然阳光下，30分钟50%失活，60分钟80%失活。在290-400nm处死率最高。抗生素及化学物:放线菌素D、氯霉素、红霉素及一些化学物质都有影响。乳化剂对芽孢萌发有抑制作用，TritonX-100在100g/ml时，全部抑制了芽孢萌发。,苏芸金杆菌的营养体,苏

13、芸金杆菌的孢子囊,BT致鳞翅目幼虫死亡症状,（3）、致病机理 主要靠芽孢和毒素 芽孢在肠道中萌发，大量增殖，穿透肠壁进入 血液，引起昆虫败血症 毒素：主要是晶体毒素和毒素 晶体毒素是所有Bt共有的毒素，存在于伴孢晶体中，在肠内晶体毒素水解为毒性的短肽，穿过肠壁，形成败血症。毒素是胞外毒素，水溶性，热稳定性好，是 RNA聚合酶的竞争性抑制剂，,伴胞晶体,（1）日本金龟子芽孢杆菌形态,2.日本金龟子芽孢杆菌,（2）日本金龟子芽孢杆菌致病症状,3.Bt杀虫剂的特点,(1)高效,对人畜无毒,不污染环境.(2)不杀伤害虫天敌,保持生态平衡.(3)对植物无毒害,不影响作物的色,香,味.(4)抗性产生缓慢.

14、缺点:选择性强,杀虫谱窄;杀虫速度慢;受 气温影响;对蚕有毒;不受专利保护.,4.苏云金芽孢杆菌的生产,见书181页,5.苏云金芽孢杆菌的检测5.1菌体含量测定 使用分光光度计在278或680nm处测菌体浓度.LC50:引起群体一半死亡的杀虫剂浓度.,5.2生物效价测定(1)取7个带玻璃珠的锥形瓶,分别做上如下标记:1#、2#、7#.往1#瓶中加入200 mL自来水和600mg标准品,混匀备用.分别往2#-7#瓶中加200mL自来水和600mg32000 IUmg-1效价的Bt原粉,再分别往2#-7#瓶中加100L的助剂,即BCM-101、JFC、6501、B-10250、SD-1227A.将

15、锥形瓶放置在摇床上摇30 min;将下摇床的锥形瓶药液按1.5倍稀释成5个浓度;每个浓度分别用60 mL稀释液浸叶片.(2)取大小一致的小白菜叶片(经自来水浸泡、冲洗,并自然晾干),分别浸入不同浓度的药液中;浸10 s后取出,立即用滤纸吸干叶片上多余的药液,并放在搪瓷盘中自然晾干;最后将其置于小烧杯中,每个烧杯放入2片叶子.(3)挑取出2龄棉铃虫幼虫放置于小烧杯中,烧杯内放一小团浸过自来水的棉花球.每处理试虫10头,用双层纱布捆绑好,在室温、相对湿度60%-80%的条件下饲养.(4)24、48 h检查死亡虫口数,计算死亡率.重复4次.(5)进行死亡率、LC50及效价的统计.测试品效价=(标准品

16、LC50/测试品LC50)标准品效价.,5.3 伴孢晶体含量测定 取发酵液样品加入1%溶菌酶,30恒温下充分研磨至镜检60%70%菌体细胞壁破碎,再用超声波处理30s打碎细胞,参照LaemmLi(1951)方法进行SDS-PAGE凝胶电泳,浓缩胶浓度为4%,分离胶浓度为10%,加10%SDS,电泳后的聚丙烯酰胺凝胶经过考马斯亮蓝染色后再脱色处理。运用ImageMasterID软件对蛋白质进行定量分析。5.4湿润性检测 取7个250 mL的烧杯,做上标记.每个烧杯装入100 mL自来水.用托盘天平分别称取每种混粉5.0g,以5.0 g Bt原粉作为对照.将混粉倒入烧杯中,测出原粉完全沉入水中所需

17、的时间,(时间越少,湿润性越大),并记录检测时间.5.5pH值测定 取7个100mL的烧杯,做上标记.将每个烧杯装入大约50mL的蒸馏水.用托盘天平分别称取每种混粉1.0 g,以1.0 g Bt原粉为对照.将称好的样品倒入相应的烧杯,用玻璃棒搅拌均匀,将烧杯加满蒸馏水,搅拌均匀,静置10 min.用电子酸度计测出其pH值.,5.5水分检测 取7个称量瓶,做上记号,放入恒温烘干箱中使水分烘干.将烘干的称量瓶放在电子天平上称出瓶重(W1);再分别装入混粉和对照Bt原粉(样品质量为1.0-2.0 g),称出样品重量与称量瓶重之和(W2);将装好的称量瓶放入电子恒温箱中烘干,烘干温度为(1052),烘

18、干时间为2 h;烘干结束后,再用电子天平称出瓶重与干燥后样品重量之和(W3).则 湿重=W2-W3,水分含量/%=(W2-W3)/(W2-W1).,5.6苏云金芽孢杆菌药效测定方法,药效测定是确定药剂的杀虫或杀菌效力的一种方法，也是评定某种药剂使用价值的依据因此，药效测定可以作为筛选农药新品种和扩大老品种应用范围的一个重要步骤.药效测定的一般原理，是用药剂处理害虫或病菌，然后观察它们的反应，根据药剂对害虫或病菌的不同程度的毒害，从而看出药剂毒力的大小 ppm是百万分浓度符号，因它不是法定计量单位，国际上也不通用，如遇有以ppm表示的浓度，改为质量百万分浓度单位mg/kg(毫克/千克)，或质量/

19、体积百万分浓度单位mg/L(毫克/升).,5.6.1室内毒力测定,为了使测定结果可靠，应注意下述几点:供试病虫的种类生理阶段及健康状况等，要求相同。每次试验的条件(温度湿度施药方法和用药量等)力求一致。应设l2个对照，一是空白对照(即不施药)，二是用当地常用而且效果稳定的农药以其相应浓度作比较，试验应重复35次 施药工具最好专用或每处理完一种农药(或同种农药的不同浓度)应洗净后再用.,药效测定(1)供试害虫的准备:供室内测定的害虫，可从田间采集，应在同一块田内采集，而且要随采随用并要尽量避免害虫受伤，影响试验效果.还应选择同一龄期(鳞翅目幼虫以3龄前的幼虫为好)，体型大小和健康一致的害虫做试验

20、。供试害虫的数量，体型大的(如菜青虫)，每一处理不应少于20头(3次重复不少于60头)：体型小的(如蚜虫叶蝉和稻飞虱)，不应少于50头；体型中等的不应少于30头。(2)施药方法：撒粉法:用小型撒粉器将药直接撒于虫体上，或撒于植物体表再放进供试害虫(对体型小的蚜虫等应用干净毛笔接虫)；也可将药粉同时撒在虫体和植物上。为了使虫体或植株容易沾药，可在撒药前先将植株或虫体喷上少量清水。喷雾法:用小型喷雾器向虫体或植株均匀喷洒药液，至虫体或植株上开始有过量药液滴下为止，浸渍法:直接将虫体或附有害虫的植物体在药液中浸渍后，立即取出，并使虫体或植株上过多的药液流去，或用吸水纸吸去，使其与田间喷雾时的实际情况

21、接近然后放入养虫笼内饲养观察。,(3)农药持效期的测定方法:把一定浓度的药液喷洒在盆栽的植物(即害虫的寄主)上，2天后，每隔24h接上一批供试害虫，每天观察1次各处理的害虫死亡情况，或把药剂喷洒在田间作物上，2天后，每隔24h采回有药的叶片，分别饲养供试害虫，观察其死亡率，并推算农药的持效期。(4)药效检查:一般在用药后24一72h内检查。体型较小的害虫，当肉眼不能分辨其死活时，可用放大镜观察，并用毛笔或小镊子拨动虫体，确定其是否死亡：有些昆虫有假死性，检查时应特别注意.检查后统计死亡百分率.死亡率=死虫数供试总虫数100 如果对照组(空白)中供试害虫死亡率(即自然死亡率)超过20%时，则全部

22、试验应重做：自然死亡率在5一20%之间则试验有效。死亡率需按下式校正：校正死亡率=对照组的活虫率(%)-处理组的活虫率(%)/对照组的活虫率(%)100,5.6.2 大田药效试验,田间药效试验的条件接近于大田生产，试验结果可作为大田生产正确用药的依据：为了提高试验的准确性，现就大田试验的一般方法及注意事项作简要说明.1.试验方法(1)实验地的选择：应选地力和作物长势基本一致，排灌方便，病虫为害严重,分布较均匀等有代表性的田块作实验地。(2)试验区的设置:在做大田试验前，应先进行小区试验，小区面积一般为3010m2，然后将小区试验中药效好的品种，做大区试验.每一大区的面积不少于300m2，小区和

23、大区实验应设2-3个重复.在大区试验中药效突出的，则进一步进行大面积示范试验。大田试验除了设施药区外，还应设不施药区(即空白对照)及当地常用优良农药及其常用浓度的对照区。混合土农药，则应选择同品种同用量的化学农药作对照。,(3)施药方法及用量:供试的药剂，应配制成定的剂型和浓度，一般每公顷喷雾9001 050L，喷粉22.530kg，撒毒土225-375kg.施药要细致均匀，随配随用。施药后如遇雨，一般要求补施。(4)做好试验基本情况的记载:一般记载的项目有：试验地点；防治对象：作物名称及生育期：试验面积：试验药剂的种类配方浓度单位面积用药量施药方法及施药时间：药效调查(调查日期调查方法、药效

24、及药效持续天数)：有无药害表现：气象要素变化情况。(5)病虫调查取样方式:农作物病虫害的田间调查，通常采用随机取样。随机取样是田间各个取样单位都有同等机会被抽取作为样本，使抽取的样本具有代表性，不能凭主观随意取样。,病虫害在田间的分布情况，因病虫害种类、农作物种类作物栽培方式及农田环境条件不同而异。根据病虫害在田间分布情况，可以采用对角线5点取样棋盘式取样平行线取样和“z”字形取样等方式。害虫在田间的分布一般是随机，均衡的，但也有非随机不均衡的，前者害虫发生普遍危害较重时,采用对角线5点取样具有足够的代表性；如果害虫发生不太普遍，危害不重时，可采取棋盘式取样法,2.药效检查及计算方法举例,(1

25、)稻螟：一般在螟卵盛孵期施药，以调查枯心(包括枯 鞘)和白穗(包括死孕穗)为主，对于二化螟的危害还应检查虫伤株。枯心率在最后一次施药后10一15天或在始蛹期检查：白穗率则在乳熟期后检查，大田采取平行线跳跃式取样，每个处理不少于200丛，记算螟密度枯心率或白穗率(若小区中卵块虫口密度大可适当调整)；秧田每小区以对角线5点取样，每点检查0.10.2m2的枯心苗.按下式计算枯心率(或白穗率)及防治效果：枯心率(或白穗率)=枯心(或白穗)总数/调查总数100%防治效果=对照区枯心(或白穗)数-处理后枯心(或白穗)数/对照区枯 心(或白穗)数100%,(2)玉米螟:施药后10天左右检查茎被蛀株数：一般每

26、小区检查2060株，大区查100株。收获时，解剖一定株数，检查虫数(包括幼虫蛹和蛹壳)防冶效果按下式计算：防治效果=对照区虫蛀数-处理区虫蛀数/对照区虫蛀数100%,6.注意事项(1)桑园禁用。(2)在害虫低龄期施药效果更佳。(3)施药最好在晴天傍晚或阴天全天用药,清晨亦可.(4)施药遇雨要补施喷粉则宜在有露水时进行(5)不能与杀菌剂混用。(6)苏云金杆菌制剂应密闭保存在干燥、低于25 的阴凉地方，防 止曝晒和潮湿，以免变质和失效(7)喷雾过程中要时时摇动药水箱以免菌粉沉淀影响杀虫效果及 堵塞喷嘴。(8)施药时期一般比化学农药提前3-4天药效一般能保持612 天、施药时期和次数要根据害虫活动和

27、作物生长情况而定；一 般在害虫的幼龄期进行防治.死虫再利用:将Bt致死及黑变的虫体收集起来用纱布袋包好，在水中揉搓每50克虫尸冼液对水50一100千克喷雾.,（二）真菌杀虫剂,全世界已知的致病真菌达530多种，已形成规模生产的是白僵菌Beauveria bassiana(Bals.)Vull和绿僵菌Metarrhizium anisopliea(Metch.)sor、拟青霉。真菌致死害虫的尸体硬化，而呈白色、绿色等颜色。主要用于防治玉米螟、稻苞虫、地老虎、斜纹夜蛾，林业上主要用于防治松毛虫等害虫,已取得了显著成效，但在蚕区不宜应用。,白僵菌的分布范围很广，从海拔几米至2000米以上的高山均发现

28、过白僵菌 的存在，世界上已在200多种昆虫体上发现了白僵的感染寄生，利用白僵菌防治农林害虫已扩大到60多个虫种。目前在生产防治上，主要采取地面或飞机喷洒白僵菌制剂的方式进行施药。也可在两季从林间采集森林叶部 害虫活幼虫集中撒上白僵菌原菌粉，或配成含量为5亿孢子/ml的菌液，采活虫在菌液中沾一下再放加树上任其自由爬行。这些带菌虫死后，长出很多分生孢子，即形成许多白僵菌流行点，逐步促成林间害虫白僵菌流行。,1.发展现状：白僵菌对鞘翅目害虫有独特的防治效果，由于其无残毒、菌剂易生产，产品较耐储藏，持效期长，施用简便等优点，日益引起研究者的注目。最早是法国用布氏白僵菌芽生孢子制剂成功地防治森林西方五月

29、鳃金龟，其液体发酵产品曾经达到半商品化的程度。现在，已有十几个国家将布氏白僵菌用于田间防治试验，防治对象达十余种，并有一些大面积防治成功的实例，日本防治桑树、无花果树的黄星天牛。我国50年代开始白僵菌的研究和应用，应用球孢白僵菌防治松毛虫、玉米螟是世界上杀虫真菌应用面积最大、最为成功的事例之一，目前仍保持50万公顷/年。应用面积最高年份达2000万亩。据1996年不完全统计，我国有白僵菌生产厂家多达64个。多年来国内对优良菌株选育、生产工艺、剂型和应用技术等进行了较为详尽的研究，成功防治害虫40种以上，但国内至今仍未有注册的白僵菌产品。,2.特点：（1）无农残 在农产品频频因农药残留超标被拒之

30、门外的今天，我们能自豪的宣称：即使施用白僵菌后立刻收获产品也不会造成任何农药残留！（2）无抗性 害虫对化学农药的抗性使得其杀虫效果逐年减退。白僵菌通过在自然条件下与害虫的体壁接触感染致死，害虫不会对其产生任何抗性。连年使用，效果反而越来越高。（3）再生长性 白僵菌新型生物农药含有活体真菌及孢子。施入田间后，借助适宜的温度、湿度，更可以继续繁殖生长，增强杀虫效果。（4）AA级安全 白僵菌对人、畜均无口服毒性问题。从此可断绝使用传统农药导致的田间中毒现象。（5）高选择性 不同于化学农药不分敌我的将益虫、害虫尽数毒杀，白僵菌能主动回避对瓢虫、草蛉和食蚜虻等益虫的侵染攻击。从而整体田间防治效果更好。,

31、3.生理生化性状：白僵菌是一种半知菌类的虫生真菌，具有营养器官（菌丝）和繁殖器官（分生孢子），白僵菌属(Beauveria Vuillemin)属于丝孢纲、丛梗孢目、丛梗孢科、白僵菌属。是一种广谱性的昆虫病原真菌，对700多种有害昆虫都能寄生,致病性强、适应性强。白僵菌菌株菌落粉状，白色，后变为淡黄色。产孢细胞单生，很少簇生，产孢轴纤细，膝状弯曲，具小齿突。分生孢子透明，光滑，椭圆形，基部有时有小尖突。自然状态下寄生在虫体生长并穿出外骨骼，在虫体表面形成白色被覆物；产孢细胞浓密簇生，但有时轮生或单生，直接着生在气生菌丝、稍有分化的分生孢子梗或膨大的柄细胞上，瓶状，下部膨大，上部延长呈颈状，在顶

32、生的分生孢子下方不远处再分枝产孢，反复向顶部合轴式产孢，形成具小齿突的产孢轴。,白僵菌菌丝,卵孢白僵菌的分生孢子,4.图片,白僵菌分生孢子梗及分生孢子,白僵菌侵染昆虫的死亡症状成虫及蛹（硬化病）,白僵菌侵染昆虫幼虫,花生和大豆田中健株与受害株的比较,5.致病机理,通过人工撒施，使白僵菌分生抱子接触到寄主害虫的表皮或气孔，或在叶片上被害虫吃入消化道，遇适宜条件则萌发生出芽管，侵入虫体并生长繁殖消耗寄主害虫体内养分形成大量菌丝和孢子布满虫体全身，并产生白僵菌素卵孢白僵菌素、草酸钙等，导致害虫缓慢死亡。已死亡的害虫因身上长满白僵菌的菌丝和分生孢子，借助接触或气流又传播到其他健康虫体上引起感染形成“瘟

33、疫”而导致死亡；落入土壤中的自僵菌还能在土壤中过冬，在第2年害虫发生期，通过气流的传播再传染害虫，并导致死亡，表现为一次施药，多年有效的效果故为良好的“以菌冶虫”的生物防冶制剂.,6、白僵菌的生产（1）斜面菌种培养：PDA培养基或小米饭培养基，25-28培养，孢子成熟即可。（2）种子培养：豆饼粉培养基或淘米水培养基，液体培养70h，产大量节孢子。（3）固体扩大培养：前三天，低温高湿，长菌丝，后期，高温低湿，长孢子。,7、产品的处理与检测（1）产品干燥:一般采用的干燥方法是晒干。晒时应用布、纸或塑料布盖在上面，避免阳光直晒，或放在35一40 的烘房内进行烘干。一般烘干程度用手摸菌剂无湿润感觉即可

34、。作为长期贮藏的含水最不超过10%。（2）产品质量检查:用手触动干燥产品时，白色粉雾飞扬，粉雾越浓，质量越好。白僵菌的产品质量，主要取决于孢子数量的多少和孢子发芽率要求每克成品含活孢子数50亿一100亿个之间。,（3）孢子发芽试验方法:用0.1%蔗糖溶液配成白僵菌孢子悬浮液滴在载玻片上，放在内有吸水纸的培养皿内保温培养，温度保恃在24 左右(亦可用水琼脂平板上涂上孢子液进行培养)，然后用显微镜检查孢子发芽数，一般经72小时培养，孢子发芽率在90以上者为合格.（4）害虫体内白僵菌菌体数量的测定 随机选取试验中各处理(之前进行毒力实验)的蚜尸3头，分别装入1.5mL离心管，加入50L灭菌的0.05

35、%（v/v）Tween-80，用玻璃棒充分匀浆，然后取匀浆液稀释成不同浓度，吸取100L涂布接种于含有500g/mL头孢霉素的CZM平板上培养。3d后统计菌落形成单位（CFU,colony-forming-unit），换算成每头虫体内所含孢子或菌丝段数。每处理重复3次。,僵蚕的生产:僵蚕，又称白僵蚕、僵虫等，乃家蚕幼虫感染白僵菌后致死的干燥虫体，是一种传统中药材，具有祛风热、化痰、散结、通经止痛的功效，可用于治疗中风、齿痛等疾病。白僵菌的培养方法有两种:一种是通过培养基培殖菌种，这里不作介绍.另一种是将得病或保存的僵蚕4-10条，浸泡在2斤无菌水中一段时间即制得菌悬浮液,每匾蚕用喷雾器喷4两悬

36、浮液,喷液以蚕体着雾三分之二为宜.喷得过多，病蚕会早死，过少，蚕不会死，这是生产技术的关键.接菌时，蚕室应保持温度26-28，湿度在90%以上，不宜通风，接菌后待蚕体上的菌液干燥后再喂桑叶.注:调制的悬浮液必须在6小时用完，否则会失效。,接菌后的蚕在1天以后慢慢表现为食欲不振,3-4天后开始发病，并开始出现病斑、死亡，接菌后5-6天死蚕较多。7-8天全部死亡。在后期发生僵死时要注意翻动，以免发生蚕蚕、蚕匾粘结现象.一般翻动三次，第一次，在尸体发硬后，第二次在有菌丝出现时，第三次在菌丝长好后.待菌丝长足，用手摸死蚕有白色粉末粘在手指上时厀用来加工.加工可用温火供干(不宜用太阳晒干)，或倒入石灰拌

37、匀，吸去水分后，晾干即可贮存。用作菌种的应阴干。,8.注意事项,(1)白僵菌对高温比较敏感，在20-28使用为宜，遇到高温会自然死亡，所以菌液配好后要于2h内用完，以防孢子萌发或死亡而失去侵染害虫的能力。(2)白僵菌用后，一般害虫4-5天死亡，所以应提前2-3天使用。(3)不能与化学杀菌剂混用；但与杀虫剂混用后，效果更好。(4)在养蚕区施用，要注意做到远距离的空间隔离在放养柞蚕的山区不宜在附近林区施用白僵菌防治松毛虫。（5）白僵菌会使部分人皮肤过敏，如低烧、皮肤刺痒等，应带上口罩、手套、脖子上系毛巾等。（6）本剂应贮存在阴凉,干燥处。,（三）病毒,已发现的昆虫病原病毒主要是核多角体病毒（NPV

38、），其次为颗粒体病毒（GV）。因病毒致死的虫体变软，组织液化，体壁破裂后流出白色或褐色的粘液，无臭味。幼虫病死后，往往臀足紧附在植株上，体躯下吊，前胸膨大。,病毒病幼虫倒挂于枝干上体色变淡，动作迟缓，体内组织液化，但无恶臭味。（细菌病一般带有臭味）。,1、病毒杀虫剂 昆虫受病原微生物侵染死亡很常见 病毒、细菌、真菌、原生动物和线虫等 已发现的昆虫病毒有1200种 包含体（inclusion body）呈圆形、多角形，保护病毒粒子 不溶于水、乙醇、氯仿、苯酚、蛋白酶等 昆虫碱性肠道水解，病毒释放，侵染，昆虫死亡,主要昆虫病毒的特征病毒 核酸 包含体 包含体内 病毒粒 细胞内 寄主 形状 病毒数目

39、 子形状 增殖部位 昆虫核型多 DNA 多角体 多个 杆状 细胞核 鳞膜角体V 双脉质型多 RNA 多角体 多个 二十面体 细胞质 鳞等角体颗粒体 DNA 近圆形 1-2个 杆状 核、质 鳞病毒昆虫痘 DNA 球、肾形 多个 砖、线 细胞质 鳞鞘病毒 卵圆等 双无包含体 研究较少,核型多角体病毒（单粒包埋）,（1）.nucleopolyhedrosis virus,NPV 世界卫生组织和粮农组织推荐 寄主范围广、专一，对人、植物、天敌无害 包含体在离开宿主后仍具生物活性 杀虫效应具有流行性和持续性 目前应用最成功的昆虫病毒 我国已有棉铃虫 NPV商品问世,棉铃虫幼虫取食吃进NPV NPV在昆虫

40、肠道中溶解 病毒粒子释放并侵染中肠上皮细胞 昆虫细胞病变死亡,多角体蛋白的合成和病毒复制分别进行 多角体蛋白是由病毒基因编码的 多角体蛋白聚集形成多角体 病毒粒子被多角体膜包围 在多角体蛋白中包埋形成包含体,NPV的专一性很强 棉铃虫NPV除侵染棉铃虫外还侵染烟草夜蛾 包含体形态上是多角的，直径0.85m 受感染的昆虫一般并不立即死亡 宿主死亡和分解后，包含体仍具毒力 包含体被其他幼虫吞食，病毒在昆虫群体中传播,（2）.质型多角体病毒 cytoplasmic polyhedrosis virus,CPV 呼肠孤病毒科，质型多角体病毒属 致病机理和NPV相似 CPV不仅侵染幼虫，还能经卵传染给子

41、代 在实际应用中具有重要意义,（3）.granulosis virus,GV 颗粒体病毒 包含体圆形、椭圆形 一个包含体只含一个病毒颗粒 病毒颗粒杆状，双链DNA 云杉卷叶蛾颗粒体病毒 菜粉蝶颗粒体病毒等 昆虫食入停止进食，血液变成乳白色而死亡 我国：菜粉蝶颗粒体病毒用于生物防治,（四）植物生长调节剂,1、生长素类2、赤霉素类3、细胞分裂素类4、乙烯类5、脱落酸,2.杀菌剂的药效测定(1)种子消毒：将带菌种子放在清水中预浸，然后进行药剂处理(浸药液或拌药粉)，放在培养皿中保温：保湿催芽。根据出芽率和幼苗发病率，计算其防冶效果。(2)活体法:供试盆栽作物，进行人工接菌诱发。一般接菌后12天喷药，在一定时间内观察发病程度，统计药效。以防冶水稻纹枯病为例，在盆栽秧苗的一定叶位的叶腋处，接上菌核或小块菌丝，用温草纸包裹保湿。接种后12天后，喷上试验药剂57天后，调查禾苗发病情况，统计病情指数.(3)抑菌圈法：将供试菌与培养基混合，倒入培养皿。取圆滤纸小片(直径1213mm)，蘸供试药液置上述培养皿中，并以蘸清水作对照，23天后观察抑菌圈的大小，比较药剂抑菌能力的高低。一般按标准药剂抑菌圈的大小来推算供试药剂的效果.,