【doc】人参皂苷Ro的制备及含量测定.doc

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1、人参皂苷Ro的制备及含量测定46SpecialWildEconomicAnimalandPlantKesearch特产研究文章编号:1001-4721(2010)01-0046-03人参皂苷Ho的制备及含量测定刘宏群,刘继永,郑培和,王英平(中国农业科学院特产研究所,吉林吉林132109)摘要:建立快速制备人参皂苷Io的方法,并对人参的不同种类,不同部位,不同组织及鲜人参储藏过程巾人参皂苷Ro的含量变化进行测定.采用DIOI大孑L吸附树脂柱,巾压柱层析等方法分离制备人参皂苷Ro,HPLC法测定人参皂苷Ro的含量,LC/MS分析结果.中压柱层析法制备人参皂苷Ro效果好,简单快速.人参皂苷R0的含

2、量差异为:生晒参>鲜人参>蜜制参>红参;芦头>支须>主根>毛须;表皮>韧皮部>小质部;随储藏期的延长人参皂苷Ro含悬减少.关键词:人参皂苷Ro;中压柱层析;分离制备;含测定中图分类号:Q946.83;TQ460.7+2文献标识码:APreparationandContentDeterminationofGinsenoside-RoLIUHongqun,LIUJiyong,ZHENGPei-he,.WANGYing-ping(InstituteofSpecialWildEconomicAnimalsandPlants,CAAS,Jilin13210

3、9,China)Abstract:EstablisharapidpreparationmethodforginsenosideRoanddifferenttypes,differentparts,differenttissuesofginseng,aswellasdetermineginsenosideRocontentchangeintheprocessofstorageoffleshginseng.UsingDIOImacroporousresiucolumn,Mediumpressurecolumnchromatographymethodstoseparateandpreparegins

4、enosideRo,usingHPLCmethodtodeterminatethecontentofgin一nosideRo,usingLC/MStoanalyzetheresults.FhepreparationofginsenosideROwithmedium-pressucohlmuchromatographywasef-fective.simpleandfast.ThedifferenceofginsenosideRncontentwas:Sundriedginseng>freshginseng>Candiedginseng>redginseng;Rhizoma>

5、;branchfibrousroot>mainroot>hairfibrousroot;epidermis>phloem>xylem;Withtheextensionofstorageperiod.gin一nosideRncontentdecreases.Keywords:GinsenosideRo;Medium-pressurecohnmwhrmnatography;Separateandpreparate;Contentdetermination人参(PanaxginsengC.A.Meyer)为五加科人参属植物,具有大补元气,复脉脱,补脾益肺,生津,安神等作用f1

6、I.现代药物学研究证明,人参皂苷(ginsenoside)是人参中重要的活性物质,人参皂苷含量的多少是评价人参内在质量的重要指标之一.本文以齐墩果酸犁人参皂苷Rn为研究对象,建立了快速制备人参皂苷R0的方法,并对人参的不同种类,不同部位,不同组织及鲜人参储藏过程中人参皂苷Rn含量的动态变化进行了研究.人参皂苷RO为齐墩果酸型人参皂苷,在水中有较收稿日期:200912-21基金项目:国家科技支撑计;1|(2007BAI38B03);特色红参加TT艺父键技术及系列?l丌发(20096040);吉林省现代农业产业技术体系建设.作者简介:刘宏群(1984一),女,内蒙古呼伦贝尔盟人,往渎硕士,从事药用

7、植物资源学研究,Email:lhq87051711.通讯作者:土英平(1967一),E-mail:yingpingw126.coin.第l期刘宏群,等:人参皂骨1o的制备及含节测定47大的溶解度,几乎不溶于氯仿,乙醚等有机溶剂中.人参皂苷R0对中枢神经有一定安定作用,具有可促进纤维蛋白溶解系统活化等药理活性,但目前圈内有关人参皂苷Rr,的相关方面的报道较少,本试验从制备和含量测定两个方面进行了研究.1仪器与材料1.1实验仪器1200Seriees型高效液相色谱仪(DAD柃测器,美圉安捷伦);6310IonTrapLC/MS(美圉安捷伦);SK8200H超声波清洗器(上海科导超声仪器有限公司);

8、瑞士BUCHI不锈钢中压色谱柱(柱长450ram,内径25mm);CPA2250D电子天平(德国Sartorius);DHG一9145A电热恒温鼓风干燥箱(上海一恒科技有限公司).1.2试剂MERCKRpCD101大孑L吸附树脂(天津南开大学化厂);甲醇,乙腈(色谱纯,天津协和吴鹏色谱科技有限公司);其它所用试剂均为H产分析纯.1.3标准品,材料标准品:人参皂背Rr,标准品为自制.植物材料:鲜人参于2009年9月采向吉林抚松,经南中尉农业科学院特产研究所刘兴权老师鉴定为原植物样品;生晒参,红参,蜜制参南吉林省特研提取物工程中心加丁制备.2方法2.1人参皂苷Ro的制备取鲜人参5kg,洗净切片,超

9、声波提取(甲醇)3次,30mird次,合并滤液浓缩得人参浸膏.浸膏水溶后用饱和正丁醇萃取3次,合并水相,上DIOI大孔吸附树脂柱,分别用水,60%甲醇,甲醇洗脱,取60%甲醇洗脱组分进行反相中压柱层析分离.反相中压柱层析洗脱条件:50%甲醇恒流洗脱,得到人参皂苷Rn.2.2色谱分析条件色谱柱:HypersilODS2(4.6mmX250mm,5m);流动相为:A:pH9的醋酸铵一氨水混合液;B:乙腈.梯度模式:恒流洗脱,时问为llmin,洗脱剂浓度为26%乙腈;流速为1.0mL/min,榆测波长为20311111.柱温为25,进样体积为】0L.2.3方法学考察2.3.1线性关系确定精密称取人参

10、皂苷Ro纯品l0mg,置于10mL容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀配制成1.0mg/mL的溶液.精密吸取对照品溶液2.5L,5L,10L,20L,40L,沣入液相色谱仪.按上述色谱条件洲定,以面积积分值为纵坐标,人参皂苷Rn含量为横坐标,绘制标准曲线.2.3.2重复性实验精密吸取同一人参处理样品测定液10L进样,按上述色谱条件连续进样测定5次,根据平均值及标准偏差计算出峰面积的相对标准偏差(RSD)值.2.3.3稳定性实验将人参皂苷Rn标准品溶液分别于1h,4h,6h,8h,12h,24h按上述色谱条件测定峰面积,通过计算标准品溶液中人参皂苷Ro峰面积的RSD来确定方法的稳定性.2.3.4精密

11、度实验精密吸取人参皂苷Rn标准品溶液10L进样,按上述色谱条件连续进样测定5次,根据平均值及标准偏差计算出峰面积的相对标准偏差(RSD)值.2.3.5加样回收率试验精密吸取已知人参皂苷Ro准确含量的人参提取物为基底,分别加入对照品适量依法测定,计算回收率.3结果与分析,3.1方法学考查结果3.1.1线性关系以峰面积积分值为纵坐标,人参皂苷Ro含量为横坐标,绘制标准曲线,得回归力程:y=201.17x+191.92,r=0.9991,线性范同在2.0-40g.3.1.2重复性取同一样品重复进样5次,人参皂苷R0峰面积的RSD为0.56%,表明该方法的重复性较好.3.1.3稳定性将人参皂苷RO标准

12、品溶液分别于1h,4h,6h,8h,12h,24h进样测定峰面积,峰面积的RSD为0.49%,结果表明标准溶液于24h内色谱峰面积无明显变化.3.1.4精密度吸取对照品溶液10L,重复进样5次,测定峰面积积分值,结果RSD为0.3%,表明该力怯有良好的精密度.3.1.5加样回收率精密吸取已知人参皂苷Ro准确含量的人参提取物为基底,分别加入对照品适量依法测定,计算平均回收率为92.43%,RSD为1.39%(n=5).表明回收率良好,奉力法可行.通过以上法学考查试验表明,该测定法结果可靠.3-2中压柱层折制备得到人参皂苷RO标准品,经HPLC检测其纯度为90.6%.3.3鲜人参及其不同IJ.32

13、品种中人参皂苷Ro含量比较称取鲜人参,生晒参,红参,蜜制参的粉碎样品各10g(并按含水量折算出干物质的量),设3个重复组,依2.3.1法制得样品溶液后经HPIC法分析,结果表明特?研究2010年第1期不同种类人参中人参苷Rn含量差异为:鲜人参>乍晒参>蜜制参耋1.参屺表l表1鲜人参及其不同加工品种中人参皂苷Iqo含量(%)不同种类人参鲜人参生晒参红参蜜制参均值标准误0.4514f1.0158I).417I0.00970.04090.00160.08490.00293.4人参不同部位中人参皂苷Ro含量比较称取鲜人参芦头,毫根吏须.毛须各lOg(并按含水量折算出F物质的量).设2个重复

14、组.依2.3.1法制得样品溶液后经HPU法分析结果表明,人参不同部位的人参皂苷Ro含量差异为芦头>支须>主根>毛须见表2一表2人参不同部位中人参皂苷FIO含量(%)人参不同部位芦头主根芰须毛须均值标准误I.25l20.03040.41I70.01020.45320.01680.35590.01233.5人参不同组织中人参皂苷FIo含量比较称取鲜人参表皮,韧皮部,木质部各lOg(并按含水量折算出干物质的量),设2个重复组,依2.3.1法制得样品溶液后经HPLC法分析结果表明,不同组织人参皂苷Ro含量差异为表皮>韧皮部>木质部见表3表3人参不同组织中人参皂苷FIo含量

15、(%)人参不同组织表皮韧皮部木质部均值标准误0.76950.02760.32210.01280.214I0.00573.6鲜人参在不同储藏期人参皂苷Fio含量的动态变化取20支鲜人参,采用沙埋法窒温储藏,每隔l0天测1次人参皂苷Ro的含量.每次设3个重复组.依2.3.1法制得样品溶液进行HPLC法分析.结果表明,随着储藏期的延长人参皂苷RO的含量有所减少见表4表4鲜人参在不同储藏期人参皂苷Iqo含量的动态变化(%)储藏期0d10d20d30d40d50d均值标准误0.4580_+0.01180ASI30.00420.,I,1780.80AI560.00370.4042_+0.009103955

16、0flc)464讨论4.1采用中压柱色谱技术制备人参皂苷R0,具有分离效果好,分离速度快,上样量大,回收率高,操作下序及劳动强度小等优点.4.2经测定.人参皂苷Ro在人参中的含量较高,是人参中主要的皂苷类化合物之一.但目前有关分析人参皂苷的文献中很少将人参皂苷Ro作为参考指标,本试验可为其提供参考依据.4.3红参和蜜制参中人参皂苷Ro的含量较低.通过LCMS分析,红参中人参皂苷Ro异构体的含量明显多于生晒参,说明在鲜人参的加_T过程中人参皂苷R0向它的另一个异构体转化,使得人参皂苷R0的含量明显减少.4.4关于人参各部位中总皂苷及单体皂苷含量差异的报道较多13,4t,但人参皂苷Ro的含量差异目

17、前未见报道.奉试验通过测定得出人参皂苷R0的含量差异为芦头>支须>主根>毛须;表皮>韧皮部>木质部.4.5鲜人参储藏过程中可能通过呼吸作用和酶的作用,使人参皂苷类成分发生水解.同时淀粉的酶解糖化致使人参绵软不坚,干瘪抽沟,囚此在鲜人参储藏过程中人参皂苷Ro的含量有减少的趋势.参考文献f1国家药典委员会.巾国药典一部2000年版M.北京:化学T业出版礼,2000:67.2魂建华,张延强,于淑莲.吉林长白lit人参单体皂苷作用解析J.人参研究,2005.(3):7-l1.i3j鱼红闪,陈琪,金凤燮.不同种类人参及其各部位中皂苷组成和比例的研究jj.食l发酵T业,200

18、2,28(12):24-28.4j土肩祥,吕修梅,张晋秀.人参皂苷含节变化研究概况【J.西北药学杂志,2002,17(5):233235.1llllIllllIIlIlIlIlIllIlIlIIlcllIlillliIIlIIIIll【lIlIIIlIlIIllIllIIllIlIllIlIilllIIIIlIlIIIJ【lI【IIIIIilIIIlllI【上接第37页)施甩疗法以将微生物菌剂激活后施用效果为最好,通过多功能微生物肥料的试验为人参产业的发展提供J新的肥料来源.也为多功能生物肥料在人参卜的应用提供_科学指导参考文献l薛振尔.魏.义莲.庄敬牛竹机肥改对农卜H卜壤结构肢人参质节的影响lJ:.炙徽农业科学.2007.sl2O1:1006l9l2曹秀.张连学.共平,赵波.等.复合叶向肥对,参两洋参产节和质奇的影响J.特产研究.I995,3:18-20.3l孙艳君,李志洪.曹国军.根际土壤性质对人参红皮病的影响【JJ.土壤通报.1997.28(3):137138.4?酋家恩.生态学常用实验研究方法技术fM一匕京:化学业出版社,2007:5659.5i许汉.粱春.周晓.刘晶.超声波,微提取快速测定人参总皂甙fJ.分析实验窜.2004:5l一53.6畏培祥,邱滨,刘兆荣.栽参对土壤物珊性质的影响【J1.吉林农业大学.1991.I3(3):3238.