小远志醇提物抗蛇毒活性初探.doc

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1、小远志醇提物抗蛇毒活性初探以下红色字部分为修正过的郁惠珍1, 吴翚2(1健雄职业技术学院，江苏 太仓 215411；2徐州师范大学化学系，江苏 徐州 221116)摘 要：通过比较小远志不同浓度乙醇提取物对眼镜蛇毒及蝮蛇毒中毒小鼠的保护作用来评价它们的抗蛇毒药效，发现95%乙醇提取物具有最佳抗蛇毒药效；继续对95%乙醇提取物的分段萃取部分（石油醚部分、氯仿部分、乙酸乙酯部分、正丁醇部分）进行抗蛇毒活性筛选实验，发现乙酸乙酯萃取部分对中毒小鼠有较明显的保护作用。说明抗蛇毒活性成分可能是一种或多种中小极性物质，这为临床应用及有效成分的提取提供了依据，也减少了盲目性。关键词：小远志；乙醇提取物；抗蛇

2、毒活性中图分类号: R285.5文献标识码: A 毒蛇咬伤属于突发的急性中毒事件之一。目前，世界上廉价蛇药供不应求，有着非常大的市场潜力，国内外对蛇药的研究极为关注1-2。远志科植物小远志，性苦、微辛寒，分布云南3-6。药理学研究表明其具有清热解毒、祛风止痛、拔毒、生肌的功能4，入药可治疮疖痈肿、小儿支气管炎、肺炎、咽喉炎、扁桃体炎等各种炎症，胃痛、痢疾、跌打损伤、肋间神经痛等，对人体无毒，可内服或外用3。在云南民间，用食用白酒浸泡小远志出色后，可马上用于治疗毒蛇、毒虫咬伤以及鼠、猫等的咬伤，数小时至数天内外擦可以消肿、止痛、解毒、不留后遗症甚至不留疤痕。可见小远志中含有较高的抗毒、消炎活性成

3、分。目前有关小远志的研究报道很少7-8 ，对于其抗蛇毒药理研究尚未见报道。基于小远志的药用价值，我们对它的抗蛇毒活性进行了初步研究。我们以乙醇为溶媒对其抗蛇毒有效部位进行提取，重点讨论最佳溶媒和有效部位的筛选，为临床应用及进一步进行活性分子的提取和分离提供依据。 小远志全草醇提物的抗蛇毒活性通过对眼镜蛇毒及腹蛇毒中毒小鼠的保护作用进行评价9。1 小远志全草不同浓度醇提物抗蛇毒活性筛选1.1 材料与方法1.1.1 试验材料动物：1825g清洁级ICR小白鼠180只，由南京大学生命科学院动物中心提供。 小远志全草：采自云南明子山(海拔1 000 m) ,由云南省永善县中医院主任药师蔡大润鉴定(标本

4、保存于云南省永善县中医院)。受试药物：眼镜蛇毒、腹蛇毒（购自福建武夷山蛇类研究所）；95%、75%、55%、45%乙醇提取物的浸膏：取4份小远志全草粗粉（20g/份），分别以200mL4种浓度的乙醇浸泡24 h，过滤，浓缩，得四份浸膏，分别为2.95g、1.96 g、1.03 g、0.88g。1.1.2 小远志不同浓度醇提物对眼镜蛇毒中毒小鼠的保护作用取75只1825g的健康小白鼠，随机分为空白对照组、给药组（95%、75%、55%、45%乙醇浸膏组），每组15只编号。通过预试验，眼镜蛇毒皮下注射1.5mg/ kg，24h内小鼠死亡率可达90%100%。因此，眼镜蛇毒对小鼠造模剂量定为1.5

5、mg/ kg，临用前以生理盐水为溶媒配制0.04%的溶液。各给药组分别按400 mg/ kg皮下注射不同浓度乙醇提取物的浸膏溶液（生理盐水配制），空白对照组给同体积生理盐水，20min后，小鼠皮下注射0.04%的眼镜蛇毒0.05mL/10g造模，观察各组小鼠24 h内死亡率。1.1.3 小远志不同浓度醇提物对腹蛇毒中毒小鼠的保护作用取75只1825g的健康小白鼠，随机分为空白对照组、给药组（95%、75%、55%、45%乙醇浸膏组），每组15只并依次编号。通过预试验，蝮蛇毒皮下注射10 mg/ kg，24h内小鼠死亡率可达90%100%。因此，蝮蛇毒对小鼠造模剂量定为10mg/ kg，临用前以

6、生理盐水为溶媒配制成0.2%的溶液。各给药组分别按400 mg/ kg皮下注射不同浓度乙醇提取物的浸膏溶液（生理盐水配制），空白对照组给同体积生理盐水，20min后，小鼠皮下注射0.2%的蝮蛇毒0.05mL/10g造模，观察各组24 h内死亡率。1.2 实验结果表三线表最上下表线宜粗一些，取1.5磅，下同 1 不同浓度乙醇浸膏抗蛇毒活性筛选实验观察结果*乙醇浓度(%)浸膏剂量(mg/kg) 蛇毒种类蛇毒剂量(mg/kg)动物数(只)死亡数(只)局部症状-眼镜蛇21513伤口肿胀，2h内因呼吸衰竭而死-眼镜蛇1.5151195400眼镜蛇2151095400眼镜蛇1.515275400眼镜蛇1.

7、515655400眼镜蛇1.5151345400眼镜蛇1.5157-蝮蛇101515出血坏疽，肢全瘫，2.5h内死于呼吸衰竭95400蝮蛇10151075400蝮蛇10151555400蝮蛇10151245400蝮蛇101515* 本实验由南京大学生命科学院帮助完成。表2 不同浓度浸膏抗蛇毒活性实验统计结果注射浸膏类别眼镜蛇毒素致死率(%)蝮蛇毒素致死率(%)对照（不注射浸膏）93.310095%13.366.775%4010055%86.78045%46.71001.3 讨论：从实验结果可知： 95%乙醇提取得到的浸膏对眼镜蛇毒素和蝮蛇毒素的致死率较对照组均有明显下降，说明该浸膏中含有的抗蛇

8、毒活性成分最多。不同浓度溶媒提取出的浸膏量随乙醇浓度降低而减少，说明小远志中所含小极性或非极性物质多于大极性物质，且具有较强抗蛇毒活性的成分是一个或一些小极性或非极性分子。 浸膏对蛇毒的抑制能力没有规律，不随溶媒浓度的变化而呈递变规律。 各种浸膏对眼镜蛇毒素的抑制均强于对蝮蛇毒素的抑制。眼镜蛇毒素和蝮蛇毒素虽然都属于混合毒素，但是眼镜蛇毒素主要表现为神经性毒素，而蝮蛇毒素主要表现为溶血毒素9。初步推断小远志对神经性疾病可能有较好的疗效，如小儿惊厥、风湿等。2 对95%乙醇提取浸膏的抗蛇毒活性研究 由以上不同浓度乙醇提取物抗蛇毒活性筛选实验可得：95%乙醇提取浸膏具有最佳抗蛇毒药效。以下实验以9

9、5%乙醇提取物为研究对象，对其不同极性溶剂的分段提取浸膏进行抗蛇毒筛选实验，找出其中药效最佳部分，为进一步提取分离提供依据。2.1 材料与方法2.1.1 实验材料动物：1825g健康昆明种小鼠120只，由徐州医学院实验动物中心提供。受试药物： CMC-Na溶液：白色粉末，用蒸馏水配制成0.5%溶液，作为对照组。 分别以石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇为溶剂，从95%乙醇提取物的浸膏中萃取得到4份浸膏；将4份浸膏及总浸膏分别用CMC-Na配制成40mg/mL溶液，按400mg/kg灌胃给药。 眼镜蛇毒：用蒸馏水配制成0.2mg/mL溶液，按2mg/kg皮下注射给药。2.1.2 实验方法取1825g

10、小鼠60只，随机分成6组，每组10只。CMC-Na溶液（0.5%）为对照组，灌胃给药0.1mL/10g，其他给组按400mg/kg（40mg/mL，0.1mL/10g）灌胃给药。给药20min后，按2mg/kg（0.2mg/mL，0.1mL/10g）皮下注射眼镜蛇毒。48 h内观察各组小鼠的死亡情况，统计各组的存活率。重复实验一次。2.2 实验结果表3 各组浸膏灌胃的抗眼镜蛇毒实验结果*测试组动物数存活数(只)致死率(%)CMC-Na组100100总浸膏组10730石油醚组10280氯仿组10460乙酸乙酯组10730正丁醇组10190* PP为何意，文中未交待0.05(与CMC-Na组相比)

11、; 本实验由徐州医学院帮助完成。2.3 结论由表3可知：乙酸乙酯萃取部分具有与95%乙醇提取物提取总浸膏相同的抗蛇毒活性；其次，氯仿萃取部分也表现出较明显的抗蛇毒活性，说明有效成分为中小极性化合物，并且乙酸乙酯萃取部分和氯仿萃取部分的有效成分可能有交叉。因此，我们下一步的工作重点是对这两个部分进行分离提取，以期望得到单分子的抗蛇毒有效成分，为研制一种高效蛇药作准备。参考文献：1蓝海, 李金荣, 胡征林. 蛇伤救治及研究中应注意的问题J. 蛇志, 2005, 17(3): 176-180.2徐梅芳, 鲍炳和. 蝮蛇咬伤的中医与西医治疗比较J. 中国中西医结合杂志, 1996, 16(9): 54

12、3.3江苏新医学院. 中药大辞典(上册)M. 上海: 上海科技出版社, 1985: 246.4陈书坤, 李恒, 陈邦余. 中国植物志M. 北京: 科学出版社, 1997, 43(第3分册)(8): 195.5中国科学院昆明植物研究所. 云南植物志M. 北京: 科学出版社, 1983, 3: 287.6韦群辉, 廖心荣等.补全第三位作者名，第四位作者以后的用等代替，下同滇南本草所载地丁的本草考证J. 云南中医学院学报, 1996, 19(3): 6-8.7吴翚, 周俊等. 小远志总多糖的微波提取及抗肿瘤活性研究J. 徐州师范大学学报(自然科学版), 2004, 22(3): 52-54.8郁惠珍

13、, 吴翚, 杜百祥. 小远志全草醇提物弱极性组分化学成分的研究J. 徐州师范大学学报(自然科学版), 2005, 23(3): 71-74.9杨藻宸. 药理学和药物治疗学(下册)M. 北京: 人民卫生出版社, 2000: 2161-2173.Studies on Anti-snake Venom Activity of Ethanol Extract from Polygala sibirica L.var megalopha Fr.YU Hu-izhen1 , WU hui2 (1. Chien-Shiung Institute of Technology, Taicang 215411,

14、China；2.Department of Chemist ry , Xuzhou Normal University , Xuzhou 221116 , China)Abstract:The anti-snake venom activity of extracts extracted by different concentrations of ethanol were evaluated by the effects on rats. The results indicated that the 95% ethanol extract had the strongest inhibiti

15、on when it was used to treat both the nerve and the soluble blood snake venoms. Then, the activity of extracts of different solvents extracted from the 95% ethanol extract was examined on rats, too. It was found that the extract of acetyl acetate was the most available one. The results showed that t

16、he effective constituents were medium or low polar molecules. And it indicated the necessity of isolating the 95% ethanol extract.Key words: Polygala sibirica L. var megalopha Fr.; Ethanol extract; Anti-snake venom activity 作者简介: 郁惠珍(1979), 女, 江苏苏州人, 硕士,健雄职业技术学院化学工程系助教， 主要从事天然产物化学的研究。 吴翚（1972），女，云南人

17、，博士后，徐州师范大学化学系教师。我的大学爱情观1、什么是大学爱情：大学是一个相对宽松，时间自由，自己支配的环境，也正因为这样，培植爱情之花最肥沃的土地。大学生恋爱一直是大学校园的热门话题，恋爱和学业也就自然成为了大学生在校期间面对的两个主要问题。恋爱关系处理得好、正确，健康，可以成为学习和事业的催化剂，使人学习努力、成绩上升；恋爱关系处理的不当，不健康，可能分散精力、浪费时间、情绪波动、成绩下降。因此，大学生的恋爱观必须树立在健康之上，并且树立正确的恋爱观是十分有必要的。因此我从下面几方面谈谈自己的对大学爱情观。2、什么是健康的爱情：1) 尊重对方，不显示对爱情的占有欲，不把爱情放第一位，不

18、痴情过分；2) 理解对方，互相关心，互相支持，互相鼓励，并以对方的幸福为自己的满足; 3) 是彼此独立的前提下结合；3、什么是不健康的爱情：1)盲目的约会，忽视了学业;2)过于痴情，一味地要求对方表露爱的情怀，这种爱情常有病态的夸张;3)缺乏体贴怜爱之心，只表现自己强烈的占有欲;4)偏重于外表的追求;4、大学生处理两人的在爱情观需要三思：1. 不影响学习：大学恋爱可以说是一种必要的经历，学习是大学的基本和主要任务，这两者之间有错综复杂的关系，有的学生因为爱情，过分的忽视了学习，把感情放在第一位；学习的时候就认真的去学，不要去想爱情中的事，谈恋爱的时候用心去谈，也可以交流下学习，互相鼓励，共同进

19、步。2. 有足够的精力：大学生活，说忙也会很忙，但说轻松也是相对会轻松的！大学生恋爱必须合理安排自身的精力，忙于学习的同时不能因为感情的事情分心，不能在学习期间，放弃学习而去谈感情，把握合理的精力，分配好学习和感情。3、 有合理的时间；大学时间可以分为学习和生活时间，合理把握好学习时间和生活时间的“度”很重要；学习的时候，不能分配学习时间去安排两人的在一起的事情，应该以学习为第一；生活时间，两人可以相互谈谈恋爱，用心去谈，也可以交流下学习，互相鼓励，共同进步。5、大学生对爱情需要认识与理解，主要涉及到以下几个方面：（一） 明确学生的主要任务“放弃时间的人，时间也会放弃他。”大学时代是吸纳知识、

20、增长才干的时期。作为当代大学生，要认识到现在的任务是学习学习做人、学习知识、学习为人民服务的本领。在校大学生要集中精力，投入到学习和社会实践中，而不是因把过多的精力、时间用于谈情说爱浪费宝贵的青春年华。因此，明确自己的目标，规划自己的学习道路，合理分配好学习和恋爱的地位。（二） 树林正确的恋爱观提倡志同道合、有默契、相互喜欢的爱情：在恋人的选择上最重要的条件应该是志同道合，思想品德、事业理想和生活情趣等大体一致。摆正爱情与学习、事业的关系：大学生应该把学习、事业放在首位，摆正爱情与学习、事业的关系，不能把宝贵的大学时间，锻炼自身的时间都用于谈情说有爱而放松了学习。 相互理解、相互信任，是一份责

21、任和奉献。爱情是奉献而不时索取，是拥有而不是占有。身边的人与事时刻为我们敲响警钟，不再让悲剧重演。生命只有一次，不会重来，大学生一定要树立正确的爱情观。（三） 发展健康的恋爱行为 在当今大学校园，情侣成双入对已司空见惯。抑制大学生恋爱是不实际的，大学生一定要发展健康的恋爱行为。与恋人多谈谈学习与工作，把恋爱行为限制在社会规范内，不致越轨，要使爱情沿着健康的道路发展。正如马克思所说：“在我看来，真正的爱情是表现在恋人对他的偶像采取含蓄、谦恭甚至羞涩的态度，而绝不是表现在随意流露热情和过早的亲昵。”（四） 爱情不是一件跟风的事儿。很多大学生的爱情实际上是跟风的结果，是看到别人有了爱情，看到别人幸福

22、的样子（注意，只是看上去很美），产生了羊群心理，也就花了大把的时间和精力去寻找爱情（五） 距离才是保持爱情之花常开不败的法宝。爱情到底需要花多少时间，这是一个很大的问题。有的大学生爱情失败，不是因为男女双方在一起的时间太少，而是因为他们在一起的时间太多。相反，很多大学生恋爱成功，不是因为男女双方在一起的时间太少，而是因为他们准确地把握了在一起的时间的多少程度。（六） 爱情不是自我封闭的二人世界。很多人过分的活在两人世界，对身边的同学，身边好友渐渐的失去联系，失去了对话，生活中只有彼此两人；班级活动也不参加，社外活动也不参加，每天除了对方还是对方，这样不利于大学生健康发展，不仅影响学习，影响了自

23、身交际和合作能力。总结：男女之间面对恋爱，首先要摆正好自己的心态，树立自尊、自爱、自强、自重应有的品格，千万不要盲目地追求爱，也不宜过急追求爱，要分清自己的条件是否成熟。要树立正确的恋爱观，明确大学的目的，以学习为第一；规划好大学计划，在不影响学习的条件下，要对恋爱认真，专一，相互鼓励，相互学习，共同进步；认真对待恋爱观，做健康的恋爱；总之，我们大学生要树立正确的恋爱观念，让大学的爱情成为青春记忆里最美的风景，而不是终身的遗憾！ 我的大学爱情观1、什么是大学爱情：大学是一个相对宽松，时间自由，自己支配的环境，也正因为这样，培植爱情之花最肥沃的土地。大学生恋爱一直是大学校园的热门话题，恋爱和学业

24、也就自然成为了大学生在校期间面对的两个主要问题。恋爱关系处理得好、正确，健康，可以成为学习和事业的催化剂，使人学习努力、成绩上升；恋爱关系处理的不当，不健康，可能分散精力、浪费时间、情绪波动、成绩下降。因此，大学生的恋爱观必须树立在健康之上，并且树立正确的恋爱观是十分有必要的。因此我从下面几方面谈谈自己的对大学爱情观。2、什么是健康的爱情：4) 尊重对方，不显示对爱情的占有欲，不把爱情放第一位，不痴情过分；5) 理解对方，互相关心，互相支持，互相鼓励，并以对方的幸福为自己的满足; 6) 是彼此独立的前提下结合；3、什么是不健康的爱情：1)盲目的约会，忽视了学业;2)过于痴情，一味地要求对方表露

25、爱的情怀，这种爱情常有病态的夸张;3)缺乏体贴怜爱之心，只表现自己强烈的占有欲;4)偏重于外表的追求;4、大学生处理两人的在爱情观需要三思：3. 不影响学习：大学恋爱可以说是一种必要的经历，学习是大学的基本和主要任务，这两者之间有错综复杂的关系，有的学生因为爱情，过分的忽视了学习，把感情放在第一位；学习的时候就认真的去学，不要去想爱情中的事，谈恋爱的时候用心去谈，也可以交流下学习，互相鼓励，共同进步。4. 有足够的精力：大学生活，说忙也会很忙，但说轻松也是相对会轻松的！大学生恋爱必须合理安排自身的精力，忙于学习的同时不能因为感情的事情分心，不能在学习期间，放弃学习而去谈感情，把握合理的精力，分

26、配好学习和感情。4、 有合理的时间；大学时间可以分为学习和生活时间，合理把握好学习时间和生活时间的“度”很重要；学习的时候，不能分配学习时间去安排两人的在一起的事情，应该以学习为第一；生活时间，两人可以相互谈谈恋爱，用心去谈，也可以交流下学习，互相鼓励，共同进步。5、大学生对爱情需要认识与理解，主要涉及到以下几个方面：（七） 明确学生的主要任务“放弃时间的人，时间也会放弃他。”大学时代是吸纳知识、增长才干的时期。作为当代大学生，要认识到现在的任务是学习学习做人、学习知识、学习为人民服务的本领。在校大学生要集中精力，投入到学习和社会实践中，而不是因把过多的精力、时间用于谈情说爱浪费宝贵的青春年华

27、。因此，明确自己的目标，规划自己的学习道路，合理分配好学习和恋爱的地位。（八） 树林正确的恋爱观提倡志同道合、有默契、相互喜欢的爱情：在恋人的选择上最重要的条件应该是志同道合，思想品德、事业理想和生活情趣等大体一致。摆正爱情与学习、事业的关系：大学生应该把学习、事业放在首位，摆正爱情与学习、事业的关系，不能把宝贵的大学时间，锻炼自身的时间都用于谈情说有爱而放松了学习。 相互理解、相互信任，是一份责任和奉献。爱情是奉献而不时索取，是拥有而不是占有。身边的人与事时刻为我们敲响警钟，不再让悲剧重演。生命只有一次，不会重来，大学生一定要树立正确的爱情观。（九） 发展健康的恋爱行为 在当今大学校园，情侣

28、成双入对已司空见惯。抑制大学生恋爱是不实际的，大学生一定要发展健康的恋爱行为。与恋人多谈谈学习与工作，把恋爱行为限制在社会规范内，不致越轨，要使爱情沿着健康的道路发展。正如马克思所说：“在我看来，真正的爱情是表现在恋人对他的偶像采取含蓄、谦恭甚至羞涩的态度，而绝不是表现在随意流露热情和过早的亲昵。”（十） 爱情不是一件跟风的事儿。很多大学生的爱情实际上是跟风的结果，是看到别人有了爱情，看到别人幸福的样子（注意，只是看上去很美），产生了羊群心理，也就花了大把的时间和精力去寻找爱情（十一） 距离才是保持爱情之花常开不败的法宝。爱情到底需要花多少时间，这是一个很大的问题。有的大学生爱情失败，不是因为

29、男女双方在一起的时间太少，而是因为他们在一起的时间太多。相反，很多大学生恋爱成功，不是因为男女双方在一起的时间太少，而是因为他们准确地把握了在一起的时间的多少程度。（十二） 爱情不是自我封闭的二人世界。很多人过分的活在两人世界，对身边的同学，身边好友渐渐的失去联系，失去了对话，生活中只有彼此两人；班级活动也不参加，社外活动也不参加，每天除了对方还是对方，这样不利于大学生健康发展，不仅影响学习，影响了自身交际和合作能力。总结：男女之间面对恋爱，首先要摆正好自己的心态，树立自尊、自爱、自强、自重应有的品格，千万不要盲目地追求爱，也不宜过急追求爱，要分清自己的条件是否成熟。要树立正确的恋爱观，明确大学的目的，以学习为第一；规划好大学计划，在不影响学习的条件下，要对恋爱认真，专一，相互鼓励，相互学习，共同进步；认真对待恋爱观，做健康的恋爱；总之，我们大学生要树立正确的恋爱观念，让大学的爱情成为青春记忆里最美的风景，而不是终身的遗憾！