doc奥美拉唑原料及其肠溶胶囊有关物质检查方法的研究.doc

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1、奥美拉唑原料及其肠溶胶囊有关物质检查方法的研究.-576?-药物分析杂志ChinJPharmAnal2005,25(5)奥美拉唑原料及其肠溶胶囊有关物质检查方法的研究陶巧凤,陈雪帆,金鑫,陈冠华(1.浙江省药品检验所杭州310004;2.浙江金华康恩贝生物制药有限公司金华321012)摘要目的:建立HPLC法检查奥美拉唑中的主要有关物质的测定方法.方法:采用HPLC法用Cs色谱柱,以0.01tool-L磷酸氢二钠溶液(用磷酸调节pH至7.6)一L/1(75:25)为流动相,检测波长为280nm.结果:HPLC法能有效检出奥美拉唑中的主要杂质(中间体)和氧化及酸破坏等降解产物,最低检出限为2ng

2、(O.05%).结论:HPLC法灵敏度高,可量化,适用于奥美拉唑及制剂的有关物质检查.关键词:奥美拉唑;有关物质;HPLC法DeterminationofRelatedSubstanceinOmeprazoleandItsEnteric?-?coatedCapsulesTAOQiaofeng,CHENXuefan,JINXin,CHENGuanhua(1.ZhejiangInstituteofDrugControl,Hangzhou310004;2.ZhejiangJinhuaKangenbeiBiopharmaeeutiealCompany,Jinhua321012)AbstractObje

3、ctive:ToestablishanHPLCmethodfordeterminationofrelatedsubstancesinomeprazoleanditsentericcoatedcapsules.Methods:C8columnwith0.O1mol?LNa2HPO4(pH7.6)一acetonitrile(75:25)asmobilephase.Thedetectionwavelengthwas280nm.Results:Therelat.edsubstancesanditsmaindegradationproductsweredeterminedbyHPLC.Thedetect

4、ionlimitwas2ng.Conclusion:TheHPLCmethodproposedfordeterminationoftherelatedsubstancesinomeprazoleanditsentericcoatedcapsulesissensitive,accurateandsimple.Keywords:omeprazole;relatedsubstances;HPLC奥美拉唑(omeprazole)为质子泵(H,K一ATP酶)抑制剂,临床上广泛用于治疗胃溃疡,最早由瑞典Astra公司研制开发,国内已有生产和销售.奥美拉唑为取代的苯并咪唑亚砜,其化学名为5一甲氧基一2一(4

5、一甲氧基一3,5一二甲基一2一吡啶基)一甲基一亚磺酰基一1日一苯并咪唑,欧洲药典-l和美国药典-2均有收载.奥美拉唑有关物质除生产过程中引人外,因其对湿,热,酸等条件十分敏感,易引起样品变色或产生降解,国外药典采用杂质对照品HPLC法控制奥美拉唑的有关杂质,国内亦采用HPLC法控制奥美拉唑的有关杂质,但由于使用的色谱柱或检测波长等色谱条件的不同,使得杂质检出能力差异较大.本文为有效控制奥美拉唑的纯度和稳定性研究,采用高效液相法(HPLC)对其主要有关物质和降解产物检测方法进行了研究.该法操作简便,灵敏,结果准确,并能用于制剂的有关物质分析和含量测定.1仪器和试药Aglient1100色谱系统(

6、带DAD检测器),色谱柱为ZobaxEclipseXDBCR(150mm4.6mm,5Ixm)/A11techC8(250mm4.6mm,5Ixm)/HypersilC8(150mm4.6mm,5m).奥美拉唑对照品(容量法测得含量为99.7%并经HPLC归一化法检查,纯度为99.9%),奥美拉唑原料,奥美拉唑肠溶胶囊(规格:20mg)和5一甲氧基一2一巯基1H苯并咪唑(杂质A),中间体5一甲氧基一2一(4一甲氧基一3,5一二甲基一2一吡啶基)一甲基一巯基一1H一苯并咪唑(杂质C),5一甲氧基一2一(4一甲氧基一3,5一二甲基一2一吡啶基)一甲基一磺酰基一1H一苯并咪唑(杂质D)均由浙江金华康

7、恩贝生物制药有限公司提供;乙腈为色谱纯,其他化学试剂均为分析纯.药物分析杂志ChinJPharmAnal2005,25(5)-577-2方法与色谱条件2.1系统适用性试验通过考察不同色谱柱类型C,与C.和流动相配比,为使分析时间和分离度均达最佳,经实验采用C色谱柱为分析柱,以0.01mol?L(1.4g?L)磷酸氢二钠溶液(用稀磷酸调pH至7.6)一乙腈(75:25)为流动相,检测波长为280nm,理论板数按奥美拉唑峰计算不低于2000.取本品原料10mg置50mL量瓶中,加3%过氧化氢溶液3mL,放置10min,加流动相稀释至刻度,摇匀,作为检测溶液.量取20注入液相色谱仪,色谱图中主要色谱

8、峰依次为奥美拉唑氧化产物即杂质D峰和奥美拉唑峰,两色谱峰的分离度应大于2.5.在选择的色谱条件下,奥美拉唑与各有关物质和降解产物均能得到良好分离.2.2方法(避光操作)取本品原料和对照品适量,分别加流动相溶解并制成每1mL中含0.2mg的供试品溶液和每1mL中含2pLg的对照溶液;取供试品溶液和对照溶液各20照系统适用性试验的色谱系统进样分析,记录色谱图至奥美拉唑主峰保留时间的3倍.供试品溶液的色谱图中如有杂质峰,用自身对照法计算(各杂质量不得大于0.3%,总杂质量不得大于1.O%).3结果3.1方法的专属性和分离度试验奥美拉唑的生产工艺大多可归纳为以5一甲氧基一2一巯基一1H一苯并咪唑为原料

9、或中间体,经缩合,氧化,精制而得,在合成过程中可能引入的有关物质主要有起始物(杂质A),缩合得中间体(杂质C)和氧化副产物(杂质D),各化合物的结构式见图l.在选择的色谱条件下,各杂质与奥美拉唑均能完全分离,色谱图见图2.根据色谱图中各杂质的色谱保留行为,认为应记录色谱图至奥美拉唑主峰保留时间的3倍.M.sHHMMeHM.H广弋D图1奥美拉唑及其有关物质的结构式Fig1TllestructuresofomprazoleanditsrelatedsubstancesA.奥美拉唑(omprazole)B.杂质A(impurityA)c.杂质C(impurityC)D.杂质D(impurityD)l

10、8,0102030t/rain图2奥美拉唑与有关物质的分离图谱Fig2Chromatogramoftheseparationofomeprazoleanditsrelatedsub-stances1.奥美拉唑(omeprazole)2.杂质A(impurityA)3.杂质C(impu.rityC)4.杂质D(impurityD)另取奥美拉唑适量,分别经以下条件处理:(1)在强度4000lx放置2h;(2)在8O放置2h;(3)加0.01tool?L盐酸5mL放置5rain;(4)1tool?L氢氧化钠5mL放置2h;(5)3%过氧化氢5mL放置10rain,然后用流动相配成每1mL含0.2mg

11、的溶液,进行HPLC分析,结果见图3.所得各色谱图和光谱图与已知杂质A,c,D的三维图谱比较,结果表明:奥美拉唑在碱液中相对稳定,氧化主要转化为砜即杂质D且降解反应明显,遇酸和热产生杂质C等杂质,光照会产生杂质A等杂质,这一结果与文献报道J一致.0102030t/min图3奥美拉唑降解产物的分离图谱Fig3Chromatogramoftheseparationofthedegradationproductofome.prazoh1.原料(ginalsample)2.光照(treatedundertight)3.高温(ttedunderheat)4.酸处理(treatedunderacid)5.

12、碱处理(treatedunderhse)6.氧化(treatedunder3%H202)根据降解产物的色谱行为分析,奥美拉唑氧化后产生含杂质D的溶液,可用于考察色谱系统适用性,经对氧化条件的摸索优化,认为取本品10mg置50mL量瓶中,加3%过氧化氢溶液3mL,放置1Orain,加流动相稀释至刻度,摇匀即可,进行HPLC分析,奥美拉唑峰与氧化产物(杂质D)的分离度大于2.5-578-药物分析杂志ChinJPharmAnal2005,25(5)3.2灵敏度取杂质A,C,D和奥美拉唑各10mg,分别用流动相稀释进样,从各色谱峰对应的光谱图可见杂质C,D与奥美拉唑的光谱相似,杂质A与奥美拉唑的光谱略

13、有差异.在奥美拉唑最大波长302nm处检测,杂质A,C,D与奥美拉唑的相对响应因子分别为2.8,0.98,1.1;在检测波长280nm处杂质A,C,D与奥美拉唑的相对响应因子分别为1.1,1.1,0.96.因此尽管280nm处的响应约为302nm处的一半,但响应因子基本一致,故选择在280nm处检测,用自身对照法测定杂质量,可不计校正因子.实验表明按信噪比大于3时,测得杂质A最低检出限为1ng,杂质D和奥美拉唑的检出下限为2ng(0.05%),杂质C检出下限为5ng,可满足规定限度各杂质不得过0.3%和总杂质不得过1.0%的检测要求.3.3供试品溶液的稳定性考察奥美拉唑有关物质供试品溶液的稳定

14、性考察,结果表明待测溶液在4h内基本无变化,在5h时增加一杂质(t小于杂质A的t),但量小于0.1%,在20h时该杂质量大于1.0%,认为待测溶液应在5h内基本稳定.3.4样品测定取奥美拉唑原料和制剂,按上述确定的方法试验,结果总杂质分别为0.2%和0.4%(n=3),原料药中未检出杂质D制剂中均检出0.1%一0.2%的杂质D(图4).4讨论4.1利用奥美拉唑的易氧化且氧化产物主要为杂质D的特性,自行制备含杂质D的分离度试验溶液,考察了HPLC的系统适用性,这样既确保了色谱系统的有效性,又免去了国外药典需提供杂质对照品的麻烦.4.2欧洲药典列出了AG7个杂质化学结构,分别用测定吸收度,TLC法

15、和HPLC法来进行控制,美国药典则用TLC法和HPLC法进行纯度分析.通过性状观察或在440nm处测定吸收度可有效控制奥美拉唑的有色杂质,欧洲药典用TLC0l0200Al020rainB图4奥美拉唑原料(A)及其肠溶胶囊有关物质(B)色谱图Fig4Chromatogramsofomeprazolematerial(A)anditsrelatedsubstancesofentericcoatedcapsules(B)法检查杂质C,经实验所得主斑点靠近前沿,杂质C的斑点略高于主斑点更接近前沿,因前沿阴影的干扰时常影响杂质斑点的检出,表明TLC法系统不够完善,本文实验结果表明杂质C可用HPLC法检测

16、.4.3现行各奥美拉唑新药试行标准多采用以C,.为分析柱的HPLC法控制奥美拉唑的有关物质,经专属性试验发现,杂质D与奥美拉唑在C,.柱上难以有效分离,对制剂制备中产生的杂质D难以检测,进口注册标准报道采用梯度洗脱才得以分离.本文用三种不同品牌的C.柱均能有效分离奥美拉唑与各中间体和主要降解产物,杂质D与奥美拉唑的分离度为2.63.6,说明本法耐用性好.4.4在溶液稳定性试验中,发现奥美拉唑在pH7.6的近中性缓冲液中仍不稳定,在杂质A前有一主要降解产物峰,且遇酸和热及光照也会产生此杂质,其结构和其降解机理有待进一步研究.参考文献lEP.4.16752USP.26.13503GregoryWSluggett,JohnDStong,JamesHAdams,eta1.OmeprazoledeterminationusingHPLCwithcoulometricdetection.JPharmB/omedicalAnal,2001(25):357(本文于2004年l2月24Et修改回)