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1、临床微生物标本的采集,主要内容,一、细菌的分类的意义二、临床微生物室的任务三、病原学检查标本的采集原则四、临床常见标本的病原学检验及报告单 解读五、人体各部位常见正常菌群六、医学文献中常用微生物专业名词,抗生素时代感染仍是人类健康的主要“杀手”,如果说抗菌药物的出现是人类第一次征服病菌，细菌耐药性则是对人类智慧的又一次严峻挑战。细菌耐药性的产生是微生物的一种天然抗生现象。解决细菌耐药问题，不能单纯依靠开发抗生素，因为许多细菌耐药性是在和抗生素接触过程中产生的。合理使用抗菌药物对细菌耐药性的产生和发展具有重要影响。合理使用抗菌药物可以降低耐药菌增长率，有效控制耐药菌感染、减少耐药菌交叉感染、降低

2、院内感染发病率和病死率以及延长抗生素的使用寿命.,卫生部关于进一步加强抗菌药物临床应用管理的通知 200848号通知,(一）对细菌耐药率超过30%的抗菌药物，应将预警信息及时通报有关医疗机构和医务人员。（二）对细菌耐药率超过40%的抗菌药物，应该慎重经验用药。（三）对细菌耐药率超过50%的抗菌药物，应该参照药敏试验结果用药。（四）对细菌耐药率超过75%的抗菌药物，应该暂停该类抗菌药物的临床应用，根据细菌耐药监测结果再决定是否恢复临床应用。,ISO 15189的技术要素部分将实验室检验全过程质量保证分为三部分,即分析前质量保证;分析中质量保证;分析后质量保证。卫生部颁发的卫医发（2006）73号

3、医疗机构临床实验室管理办法第十五条：医疗机构临床实验室应当有分析前质量保证措施、制定患者准备、标本采集、标本储存、标本运送、标本接收等标准操作规程，并由医疗机构组织实施。,成功治疗感染症因素成功分离病源菌 标本收集、运送、保存 标本处理方法 检验医师专业知识医师判读病源菌培养结果选择适当治疗方法,研究表明，分析前和分析后是当代检验误差的主要来源。有报道，有93%的实验室误差来自分析前，分析前阶段的质量控制是整个检验质量控制中一个容易被忽视却非常重要的环节。它是获得准确实验结果的重要保证。,标本采集的规范化是微生物检验分析前质量控制的重要内容之一。,标本规范化采集的重要性,正确采集、处理与运送细

4、菌培养的标本直接关系到致病菌培养的正确性与阳性率的高低，是临床细菌检验成功的关键。标本质量的好坏直接影响诊断结果的正误，不当的标本可导致假阴性、假阳性结果的出现，因此标本采集与处理的规范化是准确、及时地向临床提供重要的临床感染信息的基础。好的微生物检验标本可提升实验室工作效率及病患照顾质量，降低医疗成本。,国内微生物标本的采集目前存在的问题：标本送检率低 从全国来看，抗感染治疗前，送检相关标本可能只占应送标本的一半左右，与抗菌药物应用率之高形成鲜明的反差。一些医师在经验性治疗受挫后方送标本，此时已失去阳性培养的机会。标本有缺陷 正确收集各种临床标本，关注特检标本采样与送检的方法和条件，是完成病

5、原学诊断的先决条件。,微生物实验室与临床的交流沟通不够 医护人员对于微生物标本的采集要求和注意事项 不甚了解 制定SOP：采集时机 采集部位 采集频率（采几次）样本量 采样部位的消毒处理 标本保存与运送 等,一、细菌的分类及命名,1、细菌分类对临床工作的指导意义,对临床标本中分离出病原菌进行鉴定和药敏试验对感染疾病中感染源的确定和患者血清中抗体的评价已有固定分类的标准菌株可用于对诊断试剂盒或自动化仪器的开发或评价新菌株的发现促进世界临床的医学交流,2、细菌分类方法,细菌属原核生物依据细菌的生理特性、生物化学特性分类依据遗传物质的特征分类依据抗原结构、噬菌体、细菌素分类,3、细菌的命名,分类法则

6、：门、纲、目、科、（族）、属、种、亚种（型、群）命名原则和细菌名称组成:细菌学名世界通用，属名+菌种名；各国翻译成自己的语言通俗名，汉语为菌种名+属名,4、临床常见菌属,葡萄球菌属、链球菌属、肠球菌属、奈瑟菌属李斯特菌属、丹毒丝菌属、棒状杆菌属、诺卡菌属、莫拉菌属、分枝杆菌属、需氧芽孢杆菌属、肠杆菌科、弧菌属、气单胞菌属、不动杆菌属、假单胞菌属、伯克霍尔德菌属、嗜血杆菌属、巴斯德菌属、鲍特菌属、布鲁菌属、军团菌属、丙酸杆菌属、梭状芽孢杆菌、真菌 金黄杆菌属、寡氧单胞菌属,二、临床微生物室的任务,1、建立正确、快速的检验方法2、与临床科室密切联系3、承担医院感染学监测4、结合临床开展科研工作5、

7、加强自身实验室建设,三、病原学检查 标本采集原则,1、生物安全,每一份标本都可能是传染源，收集标本时要做好防护。标本容器必须防渗漏。严禁将针头暴露的注射器送到实验室，应将注射器中的标本注入无菌密封的试管，或将针头用无菌塞子堵住，放在一个密封的、防渗漏的塑料袋中。严禁将渗漏的标本容器送往实验室，应及时向临床医生通报容器渗漏，并解释如何继续处理及告知可能会出现的生物安全问题，要求重新采集标本，将渗漏容器消毒后丢弃。,微生物让人类步步为营，追求目标：“准确的病原学诊断”“针对性病原学治疗”正确的微生物标本采集和运送，是准确的病原学诊断的前提！,2、微生物标本采集原则,1.及时采集微生物标本作病原学检

8、查2.在抗菌药物使用前采集标本3.采样时严格执行无菌操作4.采样后立即送检5.棉拭子标本要保持湿润，宜用运送培养基6.标本容器须灭菌处理，但不得使用消毒剂。7.送检标本应注明来源和检验目的,3、标本的选择和采集,避免正常菌群的污染选择合适的采集方法和部位标本量足够大每份标本要有明确标记：患者姓名、病历号、来源、采集部位、采集日期、采集者标本必须放在合适的无菌容器内，防止渗漏,常见易被污染的标本和部位,尿液：容易被前尿道或会阴部细菌污染血液：常被静脉穿刺部位共生菌污染宫颈分泌物：被无关阴道杂菌污染瘘道：被来自胃肠的微生物污染中耳：容易被外耳道细菌污染鼻窦：容易被鼻咽部正常菌群污染感染伤口：容易被

9、皮肤和粘膜上共生菌污染,4、标本的运送,所有标本应立即运送至实验室，最迟不能2小时。细菌学标本4存放不得超过24小时，病毒检测标本在4条件可存放23天。从病房或实验室运送至其他地方，不论距离长短，都严格注意明确标识严防渗漏。不能冷藏的标本：脑脊液、生殖道、眼睛、内耳分泌物、已采集到培养瓶的血液培养标本。因为里面可能含有对低温敏感的脑膜炎奈色菌、淋病奈瑟菌、流感嗜血杆菌等，,5、标本的接收,微生物室接收标本后必须立即进行编号等标示，避免标本差错，并立即处理，不能延误。,6、标本的拒收,无标签：对于非侵害性方式获得的标本（尿、痰、咽拭子、大便）,没有明确标示应要求重新采集送检。如果是侵入性采集标本

10、（各种穿刺液、组织标本），只有在与采集者联系之后才能决定接收或拒收，所有拒收标本应记录存档。送检延误：非侵入性标本延误后应拒收。侵入性标本应与临床医生联系根据延误时间决定接收或拒收，接收时必须注明标本接收时间。送检容器不当或渗漏：如用非无菌容器送检的细菌培养标本。标本不符合要求：主要指申请单与标本不符，或送检标本不适合做所要求的检测。同一天收到同一检测目的的相同标本（血液标本除外），有可能标本重复，应立即与临床联系再做处理。特殊例外标本：有些标本即使质量不好，不符合培养要求也要接收，如手术中采集组织标本、或其他不可能重复采样的本标。,四、常见临床标本的采集,1、血液标本采集,血培养送检指征和标

11、本采集原则：原则上血液标本应尽可能在应用抗生素之前采集。为了提高病人血培养的阳性率，最好的抽血时间是预计寒战或体温骤生之前，但很难做到，所以一般都在发热初期或发热高峰期采集。,血培养的数量,研究结果一套血培养的阳性率为65二套血培养的阳性率为80三套血培养的阳性率为96CLSI建议方针对于每位需要血培养的患者需采取2至3套。对于成年患者的血培养，只采单一的血培养是不规范的。因为单一血培养的结果的临床意义很难解释。采血培养后的2至5天内，不需要重复采血培养，因为治疗后的2至5天内血液中的感染细菌不会马上消失。,血培养的采血量,对于成年患者，每套血培养瓶推荐的采血量为20至30ml对于婴幼儿患者，

12、采血量不超过患者总血量的1,血培养中需氧瓶与厌氧瓶的分配,对于常规的血培养，建议采取包括需氧和厌氧的一套血培养瓶当采血量不能满足推荐的采血量时，首先应进行需氧瓶的培养,同样规模医院的血培养数,国内多数三甲综合医院210瓶/天复旦大学中山医院2050瓶/天香港玛丽医院200瓶/天台湾大学医院300瓶/天,台大医院微生物科,香港大学玛丽医院微生物科,工作人员医师4人技术员30余人文秘和工人约30人每天接收标本约800份血培养200300份痰培养约100份 工作制度（24小时值班制度）白天每隔半小时核对、接种新到的标本夜间则延长至1小时,明尼苏达州一所社区医院,血培养送检指征和原则,血培养送检注意事

13、项,采集时机：发热高峰前1小时或发热开始时，应用抗生素前。标本量：标本量增加可以提高检出率，一般血液与培养液比例为1：（510），最好需氧和厌氧同时做。皮肤消毒：要严格，避免污染。采集部位：除非无法静脉穿刺，否则不应从留置针或导管内取血，避免污染正常菌群。尽可能在静脉穿刺点以下采集血培养标本，避免血液被输注液体稀释。送检时间：采样后应立即送细菌室，最迟不能超过2小时。标本或培养瓶储存温度：无特殊情况时培养瓶一般室温保存，如果从冰箱取出应平衡温度到室温再使用，如果采集后不能立即送检培养，一定要保存在室温，严禁冷藏。,特别注意：感染性心内膜炎,抽取血培养的时机ABE：必须在根据经验使用抗生素前30

14、分钟之内抽取血培养SBE：(1)在30min-1h之内连续抽取数套血培养;(2)皮肤消毒尤为重要，因为其主要的病原菌为皮肤定植菌如凝固酶阴性的葡萄球菌。必须取自外周静脉而非留置的静脉装置,否则会判有很高的污染风险从而导致错误的心内膜炎结论；抽取血培养的数量最佳的血培养数量不确定，但只抽单瓶血培养是不够的多套血培养可以帮助区别血培养假阳性（如皮肤污染等）建议：起始采集3套血培养，如24小时内仍报告阴性，则继续采集2套血培养，全部培养为5套。,血液标本采集,1准备消毒器具 2、加入消毒液3、预备消毒巾 4、准备消毒区域,采血量、次数与阳性率关系,血液中常见病原菌,革兰染色阳性菌 革兰染色阴性菌金黄

15、色葡萄球菌 脑膜炎奈色菌 野兔热弗朗西斯菌 表皮葡萄球菌 卡他布兰汉菌 鼻疽伯克霍尔德菌A群、B群链球菌 伤寒及其他沙门菌 胎儿弯曲菌草绿色链球菌 大肠埃希菌 拟杆菌属菌种肺炎链球菌 肺炎克雷伯菌 芽孢梭菌属菌种肠球菌 肠杆菌属菌种 假鼻疽伯克霍尔德菌炭疽芽孢杆菌 鼠疫耶而森菌厌氧链球菌 沙雷菌数菌种产单核李斯特菌 铜绿假单胞菌产气荚膜梭菌 假单胞菌属菌种丙酸杆菌 不动杆菌念珠菌 布氏杆菌属菌种结核分枝杆菌 流感嗜血杆菌,2、脑脊液标本采集,标本采集注意事项：严格执行无菌操作，采集的脑脊液分别放入3个无菌试管，每管不少于1ml,立即送检；如果只采集1管，应先送微生物室，做完培养或涂片剩余标本再

16、做其他项目。脑脊液标本严禁冷藏，不能及时送检应在室温保存。不要加防腐剂。做脑脊液培养时，建议同时做血培养。,脑脊液中常见病原菌,革兰染色阳性菌 革兰染色阴性菌金黄色葡萄球菌 脑膜炎奈色菌表皮葡萄球菌 卡他布兰汉菌A群、B群链球菌 流感嗜血杆菌 肺炎链球菌 拟杆菌属菌种炭疽芽孢杆菌 肠杆菌属菌种产单核李斯特菌 脑膜败血黄杆菌新型隐球菌 无色杆菌属菌种念珠菌 假单胞菌属菌种结核分枝杆菌 肠球菌,3、尿液标本采集,采集时间：一般原则 通常应采集晨起第一次尿液送检。原则上应选择在抗生素应用之前采集尿液。采集方法:采集中段尿法、膀胱穿刺法、导尿法注意事项：尿液标本的采集和培养中最大的问题是污染菌，因此要

17、严格无菌操作，标本采集后应立即送检，无论何种方法采集尿液，均应在用药之前进行，尿液中不得加入防腐剂、消毒剂。禁止把导尿管与尿袋拔开后收集用于培养的尿液标本，也不能将尿袋内的尿液用于培养。在留置导尿管48小时后常有多种病原菌定植。应该让实验室知道送检的尿液标本的采集方法，用以帮助判断所培养的细菌有无临床意义。,尿液中常见病原菌,革兰染色阳性菌 革兰染色阴性菌金黄色葡萄球菌 淋病奈色菌 表皮葡萄球菌 大肠埃希菌 链球菌属菌种 沙门菌属菌种 肠球菌属菌种 肺炎克雷伯菌腐生葡萄球菌 肠杆菌属菌种 棒状杆菌属菌种 变形杆菌属菌种分枝杆菌属菌种 沙雷菌数菌种真菌 假单胞菌属菌种,清洁中段尿液,尽量取早晨第

18、一次尿液弃去开始流出的尿液，以冲刷尿道口的细菌，取能代表膀胱部位病原菌的中段尿详细告知病人以下操作步骤女性病人取舒适位坐于马桶上并向一侧尽量伸展自己的膝部收集标本前用清洗液冲洗干净，从前向后仔细擦洗生殖器部位用手握杯子外面，但不要触及杯子边缘。舍弃开始小部分尿液，取后面的尿液，充满杯子的一半。小心旋紧杯子的盖子。男性病人退回包皮并清洗龟头按上述步骤-收集标本,导尿管尿液,集尿袋内的尿液不能用作培养；导尿管末端的尿液也不能用于培养，因为很难避免没有尿道菌群污染。除非是流行病学调查，长期留置导管病人常规尿培养没有临床意义，大量病原菌常可在这类病人中检出。留置导管尿液标本常通过专门的采样端口采集，不

19、能把导尿管与尿袋拔开后收集尿液。采样端口用酒精消毒；必要时，可先夹住导尿管但不能超过30分钟；将注射器针头插入采样端口，抽吸出尿液；注入无菌杯或试管中。标记 申请单上注明尿液采自留置导尿管。运送 30分钟内不能送往实验室，将标本冷藏。实验室没有接收人员时可将标本置于实验室冰箱里。,4、粪便标本的采集,采集时间：腹泻病人应在急性期采集，以提高检出率，同时最好在用药之前。采集方法：自然排便法、直肠拭子法 注意事项 虽然粪便含有多种杂菌，但应尽量采用无菌容器。为提高检出率，要采集新鲜、脓血样粪便做培养。腹泻病人应尽量在急性期采集标本（3天内），以提高阳性率。采集标本最好在用药之前。住院3日以后，不以

20、感染性腹泻为原发病的患者不适合做便培养。,粪便检验项目选择,粪常规培养：沙门菌，志贺菌粪特殊培养：霍乱与副霍乱菌，弧菌粪真菌培养：价值？粪艰难梭菌培养：不常规进行,粪便中常见病原菌,革兰染色阳性菌 革兰染色阴性菌金黄色葡萄球菌 沙门菌属菌种结核分枝杆菌 志贺菌属菌种蜡样芽孢杆菌 致病大肠埃希菌 艰难芽孢梭菌 弧菌属菌种真菌 气单胞菌属菌种 类志贺邻单胞菌 弯曲菌属菌种 小肠结肠耶尔森菌 沙雷菌属菌种,腹泻标本几种常见病原菌,致病大肠埃希菌产毒素大肠埃希菌（ETEC）致病性大肠埃希菌(EPEC)侵袭性大肠埃希菌（EIEC）出血性大肠埃希菌（EHEC），主要是产vero毒素的O157H7型。黏附性

21、大肠埃希菌（EAEC）肠聚集性大肠埃希菌（EAggEC）,腹泻标本几种常见病原菌,沙门菌属：大约有2000多个血清型，大多数既可感染人类有可感染家畜。志贺菌属：共4群40个左右血清型和亚型。A群（痢疾志贺菌）、B群（福氏志贺菌）、C群（鲍氏志贺菌）、D群（宋内氏志贺菌）。在临床分离志贺菌属中，发展中国家以痢疾和福氏为主，发达国家以宋内氏志贺菌为主。,腹泻标本几种常见病原菌,弧菌属：共有36个种。有14个种与人类感染有关。其中以霍乱弧菌和副溶血弧菌最为重要，它们分别引起霍乱和食物中毒是烈性肠道传染病霍乱的病原体。有150多个血清群；巳发生七次世界性霍乱流行，均由01群引起，前六次为古典生物，第七

22、次为EI-Tor生物型。1992年10月分离到非01群霍乱弧菌，将其命名为新的血清群0139。,霍乱弧菌,古典生物型：印度恒河三角洲 El-Tor生物型：印尼的苏拉威西岛1817年至今由古典生物型致6次大流行1961年由El-Tor生物型致第7次大流行1992年O139在印度、孟加拉爆发流行,5、痰及呼吸道标本采集,我国痰细菌培养现状标本送检率低苛养菌检出率极低结果重复性差报告速度慢感染菌与污染菌不易区分药敏结果与治疗反应存在差距,5、痰及呼吸道标本采集,采集时间痰：最好在应用抗菌药物之前采集标本，以早饭前晨痰为好，对支气管扩张症 或与支气管相通的空洞患者，清晨起床后进行体位引流，可采集大量痰

23、液。鼻咽拭子：时间上虽无严格限制，但应于抗菌药物治疗之前采集标本，咽部是呼吸和食物的通路，因此亦以晨起后早饭前为宜。,5、痰及呼吸道标本病原学检测,采集方法下呼吸道标本：自然咳痰法：支气管镜采集法：小儿取痰法：肺泡灌洗液：,5、痰及呼吸道标本病原学检测,上呼吸道标本：采集上呼吸道标本通常采用无菌棉拭子。采集前患者应用清水反复漱口，由检查者将舌向外拉，使腭垂尽可能向外牵引，将棉拭子通过舌根到咽后壁或腭垂的后侧，涂抹数次，但棉拭子要避免接触两颊和舌黏膜。,5、痰及呼吸道标本采集注意事项,注意事项：正常人的下呼吸道是无菌的，分泌物经上呼吸道排出时受到寄居这里的正常菌群的污染，因此必须对上呼吸道存在的

24、正常菌群有所了解。上呼吸道感染主要是咽喉炎，但大多数是由病毒引起的感染，具有一定的自限性，鼻咽部拭子无需做常规培养，更适合做流行病学调查，如调查本地区各年龄段或不同工作性质人群带菌情况。诊断细菌性下呼吸道感染，标本的质量决定检测报告的意义，一般连续三天送早晨采集的痰标本。一份合格的痰标本，在低倍镜下每个视野中鳞状上皮细胞10个，并且白细胞数25个。收集气管冲洗液时，麻醉液可抑制细菌繁殖，而90%以上的标本中会带有麻醉剂，从而影响检出率。痰标本不理想时可以考虑取支气管肺泡灌洗液，比痰标本更有价值。但取灌洗液时注意盐水过度稀释标本的问题。,关于咳痰标本,在抗生素应用前采集痰标本;标本采集后12h内

25、必须立即进行实验室处理；咳痰标本应用最早且广泛，但也是最受争议的标本;取标本前应摘去牙托，清洁口腔如刷牙和漱口;深咳，采集标本过程中要有专业的医务人员指导;无痰可用35NaCl 5ml雾吸约5min导痰；也可用物理疗法、体位引流、鼻导管抽吸等法取痰；对于细菌性肺炎，痰标本送检每天1次，连续23天。不建议24h内多次采集，除非痰液外观性状出现改变；怀疑分枝杆菌感染者，应连续收集3天清晨痰液送检,标本采集方法医师或护士直视下采集标本病人先漱口，去除表面的菌群教育病人深咳，收集从下呼吸道咳出的痰液临床上约半数咳痰标本不合格！,下呼吸道常见病原菌,革兰染色阳性菌 革兰染色阴性菌肺炎链球菌 卡他布兰汉菌

26、A群链球菌 脑膜炎奈色菌金黄色葡萄球菌 流感嗜血杆菌 厌氧球菌 肺炎克雷伯菌结核分枝杆菌 肠杆菌科菌种白喉棒状杆菌 假单胞菌属菌种放线菌 军团菌属菌种诺卡菌 多杀巴斯德菌丝状真菌酵母样真菌,6、眼、耳、鼻喉标本的采集,耳鼻咽喉的细菌感染来多数源于口腔。标本采集：眼结膜标本：预先用无菌盐水沾湿拭子，在结膜上滚动采集标本，应在15分钟内送检。眼角膜标本采集：在麻醉下，用刮勺在溃疡或创伤边缘刮取碎屑，放于无菌管中或直接接种在培养基上。口咽部标本采集：先用一个拭子擦去溃疡或创面表面分泌物，再取新的无菌拭子采集溃疡边缘或底部，常规标本2小时内送检。耳道标本采集：即使患者还有外耳炎症，也应该取深部拭子，浅

27、表标本容易遗漏真正病原菌。鼻标本采集：用细无菌棉拭子伸进一侧鼻孔约2厘米，与鼻粘膜接触，轻轻旋转拭子,眼耳鼻喉标本采集注意事项,采取内耳标本之前，应将外耳道消毒并用生理盐水冲洗，用拭子将病灶表面擦拭干净后再换新无菌拭子取样。采集眼拭子时，即使只有一侧结膜感染也应取2只眼睛的结膜拭子，以排除原有菌群的干扰。麻醉剂可能抑制某些病原体生长。,眼、耳、鼻喉拭子常见病原菌,革兰染色阳性菌 革兰染色阴性菌金黄色葡萄球菌 脑膜炎奈色菌肺炎链球菌 嗜血杆菌属菌种-溶血链球菌 淋病奈瑟菌白喉棒状杆菌 莫拉菌属菌种酵母样真菌 肠杆菌科菌种丝状真菌 假单胞菌属菌种 多杀巴斯德菌 产碱杆菌属菌种 百日咳鲍特菌,7、化

28、脓和创伤标本的标本采集,标本采集：开放性感染和已溃破的化脓灶：外伤感染、癌肿溃破感染、脐带残端、外耳道分泌物等感染部位与体腔或外界相通，标本采集前先用无菌生理盐水冲洗表面污染菌，用无菌棉拭子采集脓液及病灶深部分泌物；如为慢性感染，污染严重，很难分离到致病菌，可取感染部位下的组织，剪碎或研磨成组织匀浆送检。,未破裂脓肿：不能用拭子。消毒覆于脓肿表面的皮肤，用注射器将脓肿内容物吸出。然后切开脓肿、引流，取部分脓肿壁送检。送检时，标本都置于厌氧培养基中。开放病灶和脓肿：尽量去除表面菌落，用拭子采集病灶及底部或边缘的标本，置于需氧培养基中。也可对渗出液作需氧培养。开放病灶不能做厌氧培养。烧伤伤口：清创

29、，出现渗出液后以拭子用力采集，仅作需氧培养。也可送检活检组织标本。脓疱或水疱：酒精消毒使之干燥，对于患儿用小号针头挑破脓疱，拭子采集脓疱液和基底部标本。标记：不要只写“伤口”标记标本，应有专门的描述和解剖来源。注明渗出液来自开放伤口还是闭合伤口,迅速送往实验室，1小时内不能培养应将标本冷藏。皮肤消毒对培养结果至关重要。革兰染色对标本进行评估。涂片中如出现上皮细胞提示标本已被污染。没有上皮细胞而有白细胞说明标本采集正确。不要仅送检脓液。脓液不能代表伤口特点，应在病灶活动区域或基底部采集标本。小儿要求：小儿感染常出现皮疹如水泡等，应在这些地方仔细采集标本培养以发现病原体。创伤标本如没有炎性细胞可能

30、说明采集了表皮正常菌群，与疾病过程无关，应重新采集。,开放性创面标本采集2,导管治疗感染：应做导管尖端培养再加血培养。瘘管内脓液：用无菌棉拭子挤压瘘管，取流出脓液送检,闭锁性脓肿等标本采集,皮肤化脓（毛囊炎、疖、痈）和皮下软组织化脓感染：用碘伏消毒周围皮肤，穿刺抽取脓汁及分泌物送检，也可在切开排脓时，以无菌注射器或无菌棉拭子采集。淋巴结脓肿：经淋巴结穿刺术取脓液，盛于无菌容器内送检。乳腺脓肿、肝脓肿、脑脓肿、肾周脓肿、胸腔脓肿、腹腔积液、心包积液、关节腔积液可在手术引流时采集脓液，也可做脓肿穿刺采集脓液，盛于无菌容器内立即送检。,闭锁性脓肿等标本采集2,肺脓肿：体位引流使病肺处于高处，引流的支

31、气管开口向下，痰液顺体位引流至气管咳出；也可在纤维支气管镜检查或手术时采集。胆囊炎：十二指肠引流术采集胆汁，标本分三部分，即来自胆总管、胆囊及肝胆管；手术时采集：在进行胆囊及胆管手术时，可从胆总管、胆囊直接采集；胆囊穿刺法：进行胆道造影前采集胆汁。,闭锁性脓肿等标本采集3,盆腔脓肿：已婚妇女可经阴道后穹隆切开引流或穿刺采集脓液，也可在肛镜暴露下经直肠穿刺或切开引流采集脓液检查。肛周脓肿：在患者皮肤黏膜表面先用碘伏消毒，再用无菌干燥注射器穿刺抽取脓液，盛于无菌容器内立即送检。,脓性标本采集注意事项1,禁止在给患者伤口换药时，在换下的旧敷料上占取标本或直接把敷料剪下一块送检尽量取化脓组织与正常组织

32、交界处脓汁，因为脓汁中心的细菌大部分已经死亡，交界处活菌较多，提高检出率除非有渗出物，干燥、结痂伤口一般不做培养烧伤伤口应在广泛清洗和清创术后采集培养。建议取活检标本，伤口表面分泌物培养不一定有意义。代表性的标本应采自病灶活动区域或基底部有而不仅仅是脓液。,脓性标本采集注意事项2,标本的选择更大程度上依赖于感染的程度和性质而不是可疑的病原体。对大多数开放伤口，采集前应先去除表面菌群。除非有渗出物，干燥、结痂伤口一般不做培养。闭合脓肿应取渗出物和脓肿壁标本。开放脓肿处理同开放伤口。代表性的标本应采自病灶活动区域或基底部有而不仅仅是脓液。,脓液及创伤分泌物常见病原菌,革兰染色阳性菌 革兰染色阴性菌

33、葡萄球菌属菌种 肠杆菌科菌种链球菌属菌种 假单胞菌属菌种消化链球菌 腐败谢瓦菌炭疽芽孢杆菌 拟杆菌属菌种破伤风梭菌 产气荚膜梭菌溃疡棒状杆菌 产碱杆菌属菌种结核分枝杆菌 无色杆菌属菌种丝状真菌 鼠疫耶而森菌诺卡菌 鼻疽、假鼻疽伯克霍尔德菌放线菌 弧菌属菌种酵母样真菌 气单胞菌属菌种,8、无菌体液病原学检测,标本采集注意事项：严格消毒穿刺部，避免穿刺带来外源再次感染，也保证标本不受皮肤正常菌群污染。标本应注入事先准备好的无菌容器，或将盛有穿刺液的注射器套上针帽，放入塑料袋或一次性手套内送检，严禁将穿刺用注射器暴露针头送检。为预防标本凝固，可按肝素与标本1：10的比例加灭菌肝素抗凝。应尽快送检,胆

34、汁中常见病原菌,革兰阳性菌 革兰阴性菌 肠球菌 肠杆菌科菌种葡萄球菌属菌种 脆弱拟杆菌厌氧链球菌 产碱杆菌属菌种 气单胞菌属菌种,无菌部位体液常见病原菌（除外血液、脑脊液）,革兰染色阳性菌 革兰染色阴性菌葡萄球菌属菌种 肠杆菌科菌种链球菌属菌种 假单胞菌属菌种厌氧链球菌 梭杆菌属炭疽芽孢杆菌 拟杆菌属菌 产气荚膜梭菌 嗜血杆菌属菌种肠球菌 产碱杆菌属菌种结核分枝杆菌 军团菌丝状真菌 不动杆菌 诺卡菌 气单胞菌属菌种放线菌 酵母样真菌 类白喉杆菌,9、生殖系统标本病原学检测,标本采集尿道分泌物：男性：清洗尿道口，用灭菌纱布或棉球擦拭尿道口，采取从尿道口溢出的脓性分泌物或用无菌棉拭子插入尿道口内2

35、4厘米轻轻旋转取出分泌物。女性：清洗尿道口，用灭菌纱布或棉球擦拭尿道口，然后从阴道的后面向前按摩，使分泌物溢出，无肉眼可见的脓液，可用无菌棉拭子轻轻深入前尿道内，旋转棉拭子，采集标本。,生殖系统标本采集,阴道分泌物 用窥器扩张阴道，用无菌棉拭子采集阴道口内4厘米内侧壁或后穹隆处分泌物。宫颈分泌物 用窥器扩张阴道，先用灭菌棉球擦拭宫颈口分泌物，用无菌棉拭子插入宫颈管2厘米采集分泌物，转动并停留1020秒，让无菌棉拭子充分吸附分泌物，或用去掉针头的注射器吸取分泌物，将所采集分泌物盛于无菌容器内立即送检。精液 受检者应在5天以上未排精，清洗尿道口，体外排精液于无菌试管内立即送检,生殖系统标本采集,前

36、列腺液 清洗尿道口，用按摩法采集前列腺液盛于无菌容器内立即送检。为区分男性泌尿系感染和生殖系感染常用尿液和前列腺液分段定位培养和菌落计数。方法：嘱患者多饮水，46小时内不能排尿，用肥皂水清洗尿道口，灭菌棉球擦干，以无菌试管采集前段尿10ml为VB1，代表尿道标本；排尿200ml弃去，再用第二支无菌管取中段尿10ml为VB2，代表膀胱标本；按摩前列腺后采集前列腺液EPS；按摩后排尿收集10ml于无菌管中为VB3，代表前列腺及后尿道标本,生殖系统标本采集注意事项,生殖器是开放性器官，标本采集过程中，应严格遵循无菌操作以减少杂菌污染。阴道内有大量正常菌群存在，采取宫颈标本应避免触及阴道壁。沙眼衣原体

37、在宿主细胞内繁殖，取材时拭子应在病变部位停留十几秒钟，并应采集尽可能多的上皮细胞。因为淋病奈瑟菌培养条件苛刻，男性患者可通过尿道分泌物涂片检测淋病，女性则不可以，因为女性阴道菌群复杂。,生殖系统感染常见病原菌,革兰阳性菌 革兰阴性菌葡萄球菌属菌种 淋病奈瑟菌肠球菌属菌种 肠杆菌科菌种链球菌属菌种 阴道加德纳菌消化链球菌 杜克嗜血杆菌酵母样真菌 拟杆菌属菌种,五、人体各部位 常见正常菌群,人体各部位常见正常菌群,皮肤：葡萄球菌属、JK棒状杆菌、痤疮丙酸杆菌、革兰阳性厌氧杆菌、革兰阳性厌氧球菌铜绿假单胞菌口腔：肺炎链球菌、草绿色溶血链球菌、肠球菌、奈瑟球菌属、大肠杆菌、嗜血杆菌、厌氧球菌和杆菌、念

38、珠菌属、类白喉杆菌、卡他菌属、表皮葡萄球菌鼻咽部：葡萄球菌属、腺病毒、肺炎链球菌、草绿色溶血链球菌、奈瑟球菌属、大肠杆菌、嗜血杆菌、厌氧球菌和杆菌、念珠菌属、变形杆菌肠道：大肠杆菌、产气肠杆菌、变形杆菌、铜绿假单胞菌、葡萄球菌属、肠球菌属、产气夹膜杆菌、拟杆菌属、双歧杆菌、厌氧杆菌、念珠菌属前尿道：表皮葡萄球菌、棒状杆菌、非致病抗酸杆菌、肠球菌属阴道：乳酸杆菌、棒状杆菌、大肠杆菌、拟杆菌属、肠球菌属、奈瑟菌属、厌氧球菌,六、医学文献中常见微生物专业名词,医学文献中常见微生物专业名词,（1）MIC：最低抑菌浓度，在体外能抑制细菌生长的最低药物浓度，单位g/mlMBC：在体外，能使细菌总数减少（杀

39、灭）99.9%以上的最低药物浓度，单位g/mlMIC50、MIC90：在一批试验中能抑制50%或90%受试细菌所需的MICMBC50、MBC90：在一批试验中能使50%或90%受试细菌的活菌数减少99.9%所需的MBC临界浓度:(breakpoint)：根据抗菌药物抑制细菌生长所需的MIC，结合常用剂量时该药所能达到的血药浓度，划定细菌对各种抗生素敏感或耐药的界限。,医学文献中常见微生物专业名词,（2）S：敏感，MIC最高血浓度药敏标准制定方法：目前都使用NCCLS标准制定的药敏判断标准，就是以不同药物进入体内后血液中最高浓度与该药物体外最低抑菌浓度（MIC）间的关系所制定,医学文献中常见微生

40、物专业名词,（3）MRS：耐甲氧西林的葡萄球菌MRSA：耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌 MRSCON：耐甲氧西林的凝固酶阴性葡萄球菌(4)PRP：耐青霉素的肺炎链球菌(5)ESBL：产超广普-内酰氨酶的革兰阴性杆菌(6)HLAR：对氨基糖甙类有高水平耐药的肠球菌(7)VRE：耐万古霉素的肠球菌(8)VRSA：耐万古霉素金黄葡萄球菌,医学文献中常见微生物专业名词,（9）cfu:colony formine unit,菌落形成单位，指的是每毫升样品中含有的细菌群落总数（10）NCCLS：美国国家临床实验室标准化委员会，已经被我国卫生部指定为部颁标准（11）ATCC：美国国家典型菌种保藏中心 NCTC：

41、英国国家典型菌种保藏中心,医学文献中常见微生物专业名词,（12）常用标准菌株 ATCC25922：大肠埃希菌，药敏质控菌株 ATCC25923：金黄色葡萄球菌，药敏质控株 ATCC27853：铜绿假单胞菌，药敏质控菌株 ATCC700603：肺炎克雷伯菌，产ESBL酶标 准菌株 ATCC29212：粪肠球菌 ATCC49619：肺炎链球菌 ATCC49247：流感嗜血杆菌,临床微生物检验流程示意,临床标本,留取,环节一,运送,实验室,环节二,分析前,分析中,标本合格？,环节三,接种,培养,检测,门诊病房诊所,不合格,合格,环节四,环节五,分析后,报告,环节六,SOP,QC,IQ,培养基,冰箱温箱,气体,直接检测,仪器设备试剂,EQA标本,标本合格判定,SOP,对每个环节进行控制，构成质量保证体系,+,不合格,感染病的有效诊治和防控：任重道远！,正确的感染病原学诊断合理使用抗菌药物提高感染性疾病预后，降低医疗费用降低细菌耐药预防感染性疾病传播,感染控制你我共参与,谢谢,谢谢,！,