致泻大肠埃希氏菌肠出血性大肠杆菌O157 ：H7.ppt

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1、致泻大肠埃希氏菌肠出血性大肠杆菌O157：H7,食品微生物国际标准和现代快速检测方法培训,enterovirulent Escherichia coli&Enterohemorrhagic Escherichia coli O157:H7,一 概念及分类地位,致泻大肠埃希氏菌,肠致病性大肠杆菌（EPEC）：是婴儿腹泻的主要病原菌，有高度传染性，严重者可致死；成人少见。,肠出血性大肠杆菌（EHEC）：引起散发性或暴发性出血性结肠炎，可产生志贺氏毒素样细胞毒素。,肠产毒性大肠杆菌（ETEC）：引起婴幼儿和旅游者腹泻，出现轻度水泻，也可呈严重的霍乱样症状。,EIEC 引起痢疾样的腹泻和脓血便，有的并

2、引起较大规模的食物中毒、医院内感染或水源性腹泻的爆发。,二 生物学特性,革兰氏染色阴性、两端钝圆的短小杆菌，一般大小约0.5m0.8m1.0m3.0m，因生长条件不同，个别菌体可呈近似球状或长丝状。多单独存在或成双，但不呈长链状排列。约有50%左右的菌株具有周生鞭毛而能运动，但多数菌体只有14根，一般不超过10根，故菌体动力弱；多数菌株生长有比鞭毛细、短、直且数量多的菌毛，有的菌株具有荚膜或微荚膜；不形成芽胞，对普通碱性染料着色良好。,在含无机盐、胺盐、葡萄糖的普通培养基上生长良好。最适生长温度为37，在4244条件下仍能生长，生长温度范围为1546。,对理化因素的抵抗力，在无芽胞菌中是最强的

3、一种，在室温可存活数周，在土壤、水中存活数月，耐寒力强，但将37降至4过程中，30分钟可杀死此菌。加热60，30分钟，此菌可灭活。对漂白粉，酚、甲醛等较敏感，水中1ppb氯可杀死此菌。此菌耐胆盐，在一定程度上能抵抗煌绿等染料的抑菌作用，在选择性培养基配制上，常利用此菌这一性质。,三 卫生学意义,在卫生学上被用于饮水，牛奶或食品等的粪源性污染卫生细菌学指标,是国际上公认的卫生监测指示菌,作为微生物污染状况的监测指标和HACCP实施效果的评估指标,多年来，致泻性大肠杆菌引起的腹泻病例始终位于第二位，可见大肠杆菌肠道传染的广泛性,致泻性大肠杆菌亦可常年引发人体腹泻，以夏秋季为高峰，在患者感染住院率中

4、，婴幼儿占60%以上,四 检测方法,1、致泻大肠埃希氏菌 经典培养生化鉴定法2、肠出血性大肠杆菌O157：H7 经典培养生化鉴定法 显色培养筛选法 PCR方法 实时PCR方法 VIDAS快速筛选法 BAX全自动PCR方法 免疫磁珠富集方法 胶体金方法,由于传统经典检测方法的检测水平只能达到200cfu/g，而食品、环境等样品中EHEC O157:H7含量较低，且该菌的致病量为3cfu/g针对EHEC O157：H7的检测技术和方法不断改进和创新，现已研究建立 6-10 种检测方法。,1 致泻大肠埃希氏菌（经典培养生化鉴定法）1.1 增菌以无菌操作取检样25g（mL），加在225mL营养肉汤中，

5、均质，取出适量，接种乳糖胆盐培养基，以测定大肠菌群MPN，其余的移入500mL广口瓶内，于361培养6h。挑取1环，接种于1管30mL肠道菌增菌肉汤内，于42培养18h。1.2 分离将乳糖发酵阳性的乳糖胆盐发酵管和增菌液分别划线接种麦康凯或伊红美蓝琼脂平板；污染严重的检样，可将检样匀液直接划线接种麦康凯或伊红美蓝平板，于361培养18h24h，观察菌落。不但要注意乳糖发酵的菌落，同时也要注意乳糖不发酵和迟缓发酵的菌落。1.3 生化试验（1）接种三糖铁琼脂（TSI）或克氏双糖铁琼脂（KI）、蛋白胨水、半固体、pH7.2尿素琼脂、KCN肉汤和赖氨酸脱羧酶，在36培养过夜。（2）TSI斜面产酸或不产

6、酸，底层产酸，H2S阴性，KCN阴性和尿素阴性的培养物为大肠埃希氏菌。TSI底层不产酸，或H2S、KCN、尿素有任一项为阳性的培养物，均非大肠埃希氏菌。必要时做氧化酶试验和革兰氏染色。,2 肠出血性大肠杆菌O157：H7（胶体金方法）,检测步骤（1）培养基制备：将1瓶Reveal 8小时培养基（或Reveal 8小时改良培养基）加入到消毒的无菌袋内，加入225mL 42的无菌水，用力混匀，直到溶解。使用前培养基保持在42，但是不要超过6个小时。最好是制备好立即使用。（2）加样：取25g样品到无菌袋内，使样品混匀，确保彻底混匀；（3）培养：松散地紧闭袋子421培养8小时。（4）混匀：8小时培养后

7、，从温箱中取出袋子，抓牢袋子离顶部2-3英寸处，支撑底部，并用一边到另一边的方式剧烈混匀。（5）样品处理：使用无菌吸管，移取5mL样品到聚丙烯或玻璃试管内，加热：如果使用聚丙烯试管，放置于水浴中20分钟；使用玻璃试管，放置水浴中10分钟；或者将试管放置于微波炉中，沸腾即可。沸水中取出试管，放置到室温（15-30），为了迅速冷却，可放置在冷的流水下，小心不要让水进入试管内。,（1）培养基制备：将1瓶Reveal 20小时培养基（或Reveal 20小时专用培养基）加入到无菌袋内，加入225mL 361的无菌水，用力混匀，直到溶解（大约1分钟）。在使用之前培养基可保持在361，但是不要超过6个小时，最好是制备好立即使用。（2）加样：加入25g样品到含225mL mEC+N的无菌袋中，封紧袋子，放置细菌分离器中2分钟。（3）培养：松散地紧闭袋子，361培养20小时。不要密闭袋子，空气交换对大肠杆菌O157：H7适宜生长是必需的。（4）混匀：20小时培养后，从温箱中取出袋子，抓牢袋子离顶部2-3英寸处，支撑底部，并用一边到另一边的方式剧烈混匀。,祝大家工作顺心如意,