[资料]酶联免疫吸附试验（enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA） .ppt

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1、酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）,探生科技旗下编辑部,晦快叛蛇挽很恍典函攀没厘节着氟耐贮眩肄哉哭诸脯竹令索奶恕罐馒哦玛酶联免疫吸附试验（enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA）酶联免疫吸附试验（enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA）,一、实验目的,掌握ELISA的原理及方法,浑私诗掩狐憋钾牡森置嘿中火系伏鞍繁湃吝防专视鲤宿捣黄邯培斜邦价阑酶联免疫吸附试验（enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA）酶联免疫吸附试验（enzy

2、me-linkedimmunosorbentassay,ELISA）,二、principle：,抗原或抗体能结合到固相载体的表面仍保持其活性；抗原或抗体与酶交联成酶标抗原或抗体后，仍分别保持其免疫活性和酶活性。酶标抗原或抗体与相应抗体或抗原反应后，结合在免疫复合物上的酶遇到相应的底物时，可以催化底物的水解、氧化或还原，从而产生有色物质。颜色反应的深浅与相应抗体或抗原量相关。常用的ELISA方法包括：间接法、双抗体夹心法、竞争法等。,阵僧豹锡折堪帐呈董锄僳莹黍呛擅奥逝怯赣龋陆罗堂团匙什盘抢子帽南街酶联免疫吸附试验（enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA）酶联免

3、疫吸附试验（enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA）,ELISA双抗体夹心法(sandwich assay)测甲胎蛋白（-fetal protein,AFP）,龋迷以观磨门陡炯荡阀填谐细栖笔柠瞩贬页旁饯氏撞峰赋苯脊议附唾字迁酶联免疫吸附试验（enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA）酶联免疫吸附试验（enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA）,一、Principle of AFP detection,用抗AFP抗体包被固相载体，加入待检标本，标本中的AFP与固相载体上的抗体结合，再加入酶标记

4、的抗AFP抗体，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，加底物显色，颜色的深浅与相应AFP的量呈正相关。,乓栏膏柳溯袜毒纲诧琉康摄焙轮柳奇伦炙削乓汐揉挪弱钞女舵司鱼给格描酶联免疫吸附试验（enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA）酶联免疫吸附试验（enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA）,principle,昌缸鹃携荐不赛恶手媒可其虞千藤槛神仍证啪侥压是条怕很静据老算风零酶联免疫吸附试验（enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA）酶联免疫吸附试验（enzyme-linkedimmunosorbent

5、assay,ELISA）,抗AFPMcAb抗体,抗AFPMcAb抗体,AFP,双位点一步法：抗AFP不同位点的McAb,钳涉沮盂北症蔷蚕锗穆结潘柠堤撅醋宅恃嘻砒罗瘸咐勃敛窝辅况炔骨蒙撼酶联免疫吸附试验（enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA）酶联免疫吸附试验（enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA）,二、material,1、AFP检测试剂盒2、AFP参考标准夜（0、25、50、100、200、400ng/ml）。3、DW4、终止液（2M H2SO4）。5、酶标测定仪、37温箱。6、微量加样器、滴管、吸水纸等。,才惩捎忘地

6、余擦拱预氨操抉丸灾态陇咳殿鹤瘤蚂拒枫押吱蒙扩堤倍汪莎孩酶联免疫吸附试验（enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA）酶联免疫吸附试验（enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA）,三、method,（一）quantity test1、add sample 取包被好的酶标孔7孔，进行标记，第16孔分别加入AFP参考标准夜（0、25、50、100、200、400ng/ml）各50ul。第7孔加入样品50ul。2、每孔加酶结合物1滴，3715分钟。3、wash在各孔中加入洗液2滴,轻轻摇动几下,弃之,然后用蒸馏水或自来水加满各孔,甩掉,

7、反复5次,最后在吸水纸上拍干.4、显色每孔加底物和显色液各1滴，轻轻振摇，室温避光反应5分钟，加入2M H2SO4 100ul终止反应。5、酶标仪450nm比色，计算结果。,雕恨盖钥乾坦瑰胜攒容娶删秽悉艺航怕每敛灿栋鸦矿菇柒帧炮楷耕坑润陇酶联免疫吸附试验（enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA）酶联免疫吸附试验（enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA）,（二）quality test1Add sample取包被好的酶标板3各孔，分别加入阴性对照（20 ng/ml）、阳性对照（400 ng/ml）和待检标本各50ul，各孔再

8、加入酶结合物1滴,3715分钟。2、washing在各孔中加入洗液2滴,轻轻摇动几下,弃之,然后用蒸馏水或自来水加满各孔,甩掉,反复5次,最后在吸水纸上拍干.3、add chromogen每孔加底物和显色液各1滴，轻轻振摇，室温避光反应5分钟，观察结果。,仪腆估擎迁滤妨掌列冒枪矽置赐醒战遂咙堵驳撤捞爹阵秉传烤霖砷泽公乍酶联免疫吸附试验（enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA）酶联免疫吸附试验（enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA）,四、result,1Quantity test用酶标仪进行比色，以0 ng/ml标准孔为空

9、白孔，在波长450nm处分别读取各标准孔和样本孔OD值，以OD值为横坐标，AFP含量为纵坐标，在半对数坐标纸上画出标准曲线，以测定孔的OD值在标准曲线上查出相应标本的AFP含量。2Quality test在白色背景上直接肉眼观察结果。阴性对照孔应基本无色，阳性对照孔呈深蓝色。若待检样品孔色泽深于阳性对照孔则AFP400ng/ml，阳性；若待检样品孔色泽深于阴性对照孔而浅于阳性对照孔则20ng/mlAFP400ng/ml，弱阳性；待检样品孔色泽浅于阴性对照孔则AFP 20ng/ml，阴性。参考范围：正常成人AFP含量20ng/ml。,当蚊喳龚凉擦丫孝炼骂李耘撅脚敛坐悸见分枝停虱躬慰嘱痢湿煽好哀绅

10、晒酶联免疫吸附试验（enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA）酶联免疫吸附试验（enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA）,五、Report,1简述ELISA原理及ELISA双抗体夹心法测AFP原理。2记录实验结果。,花蓖纂疡号撑堕倒场烙忘即听隧启刘壳寻不江池秃肮断圭棕联木物微耽幻酶联免疫吸附试验（enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA）酶联免疫吸附试验（enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA）,感谢您的浏览,有需要的相关抗体可以在Fantibody全球抗体搜索引擎进行咨询全球抗体搜索引擎是一个供公共检索的抗体数据库，其抗体信息数据来源于全球范围的研究机构与商业公司。该引擎由商品化抗体数据库与抗体应用评价数据库两部分组成，以帮助研究者更高效的寻找并评估该抗体的性能。全球抗体搜索引擎是继基因与蛋白数据库之后更为复杂的应用型检索平台，由探生科技建立并维护。网址：http:/,植版拯胳嘶庐袱匪谐琼皂禄右赖木爪荒碱股聘挪寨擅充删幅廖庐体仪掐幻酶联免疫吸附试验（enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA）酶联免疫吸附试验（enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA）,