人乳头瘤病毒HPV核酸检测对比分析课件.ppt

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1、宫 颈 癌,妇科第二大癌症每年约有20余万妇女死于宫颈癌新发病:全球-50万/年 我国-13.2万/年,姓名：哈拉尔德楚尔豪森国籍：德国民族：日耳曼课题：发现人乳头瘤病毒（HPV）引发宫颈癌成绩：获得2008年度诺贝尔生理学或医学奖,Harald zur Hausen,宫 颈 癌,什么是HPV？,Human Papilloma virus 人乳头瘤病毒双链DNA无包膜病毒广泛分布于高等脊椎动物 定向感染皮肤及粘膜的复层鳞状上皮,HPV病毒电镜照片,逆转录区域包括控制病毒基因组复制的基因序列,E6、E7为两种致癌蛋白编码，它们是高危型HPV导致细胞变性的主要原因,E1、E2、E4和E5负责病毒复

2、制,L1、L2为两种病毒外壳蛋白编码在预防HPV的疫苗中使用了L1,HPV的类型,已经鉴定的乳头状瘤病毒有200多种与人有关的约125种30-40种感染生殖道低危型：HPV6、11、42、43、44等中间型：HPV31、33、35、39、51、52、58、59、68高危型：HPV16、18、45、56等临床最重要的型：6、11、16、18、31、33、35、38型8个亚型,HPV感染,HPV感染的途径和危险因素,性传播直接皮肤接触母婴传播,性行为混乱免疫抑制吸烟其他STD协同感染口服避孕药,HPV感染率与发病率,HPV感染与宫颈癌发病率变化图，Int J Cancer 1993,53:919,

3、HPV感染的不同阶段,宫颈癌的癌前病变(CIN),CIN=Cervical Intraepithelial Neoplasia宫颈上皮内瘤样病变,CIN,宫颈不典型增生,宫颈原位癌：宫颈上皮细胞发生癌变，但癌变未突破基底膜、间质无浸润。,轻度（CIN级）：病变局限在上皮层的13内,中度（CIN级）：病变局限在上皮层的下23,重度（CIN级）：病变几乎累及全部上皮层，仅 剩12 层表面的正常 鳞状上皮,宫颈上皮细胞部分或大部分被不同程度异型细胞所替代,定义,宫颈癌的癌前病变(CIN),专家共识,宫颈癌的“元凶”就是高危型HPV感染高危型HPV感染是宫颈癌的必要条件没有HPV感染，就没有宫颈癌防治

4、HPV感染，就是防治宫颈癌,1995年，国际癌症研究协会认为,高危固定价HPV的持续性感染是宫颈癌的主要病因,宫颈癌,感染HPV病毒 CIN早期浸润癌,唯一 知道病因的癌症唯一 可以通过早期干预阻断的癌症,5-15年,内 容,HPV与宫颈癌宫颈癌检测方法比较HPV核酸检测方法学比较临床使用,分子水平,细胞水平,组织水平,宫颈癌检测方法学发展过程,1982年,醋酸、碘液肉眼检测灵敏度为70.9%特异度为74.3%,1996年,新柏氏TCT灵敏度为80.8%特异度为 51-60%,2000年,HPV核酸检测灵敏度为98.6%特异度为99%,巴氏涂片灵敏度为50%以下特异度为？%,1941年,宫颈癌

5、筛查发展史,组织学检测,肉眼观察 阴道镜观察 组织检查优点：操作简单，价格低廉，适宜作初步筛查；缺点：准确率低，人员素质 要求高，病人痛苦程度大。,细胞学检测,传统巴氏涂片,液基细胞学,传统巴氏涂片（CV）液基薄层细胞学技术(TCT)自动细胞学检测系统（LCT）计算机辅助细胞检测系统（CCT）,细胞学检测的假阴性,液基细胞学检测假阴性结果高达20%水平差的地方更高原因分析：1、视野局限 2、人为因素 1）取标本、片子制备 2）技术差异 3）耐心、责任心,细胞学检测的假阳性,1、凹空细胞是HPV 感染的主要形 态学改变，但不是特异性改变2、HPV正在清除阶段,细胞学检测的性价比低,TCT阴性 要

6、求每年做同样的检查HPV阴性 可以把筛查时间延长到3-5年,卫生部宫颈癌筛查及早诊早治指南,核酸检测,直接检查导致宫颈癌的元凶-HPV病毒灵敏度高，特异性好操作简便，可作为疗效评估 和监测指标,宫颈癌筛查三方案,最佳方案：HPV核酸检测+液基细胞,基本方案：醋酸白实验,一般方案：HPV核酸检测+传统巴氏涂片,中国癌症研究协会推荐方法,内 容,HPV与宫颈癌宫颈癌检测方法比较HPV核酸检测方法学比较临床使用,HPV第一代核酸检测产品,产品：HC2、港龙13型原理：杂交捕获技术特点：检测核酸、不分型、不能科学定量、检测时间长,HPV核酸第二代检测产品,产品：凯普21型、亚能23型、透景26型、达安

7、19型、港龙29型原理：膜条杂交、液相杂交特点：可以分型，而且高低危都能做需要杂交、时间长。5-10个小时不等。开放式杂交、极易导致实验室生物污染。结果需肉眼判读，增加人为误差。不能定量,HPV核酸第三代检测方法,产品：上海之江13型分型检测试剂原理：分别采用HPV13种型别的特异性引物及 荧光探针，应用PCR+Taqman技术，对 HPV13种型的特异性核酸片段进行分型 定量检测。特点：分型、定量、快捷、安全,优势一：分型,HPV59,IC,高危13型：16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68,优势二：快捷,上机检测,30min,60min,30min,2

8、小时！,优势三：安全,之江：封闭式实时荧光PCR 无需洗涤 减少污染,传统膜条杂交：反复洗涤 操作繁琐 污染几率增加,优势四：定量（唯一）,3、便于文章的发表。,1、宫颈病毒载量和CIN分期呈正相关。,2、用于对病程的观察和疗效的评估。,5万IU,1万 IU,传统方法为什么不能定量？,一、标本量采集不准确。,二、上皮细胞过少，也会出现假阴性的结果,5万IU/10个,1万 IU/2个,之江的定量方法科学,1、MNBH是人单拷贝基因-测MNBH基因的数量相当于检测取了多少个上皮细胞,2、如果没有检测出MNBH基因，或MNBH量太少。可以避免假阴性结果,内 容,HPV与宫颈癌宫颈癌检测方法比较HPV

9、核酸检测方法学比较临床使用,HPV检测结果的用途,筛查：与细胞学检测配合确定筛查频率和周期，确保早期发现，及时干预。分流：根据筛查结果，将高危人群和患者群进行分流，制定不同的干预、治疗方案。随诊：根据HPV结果的变化情况，判断治疗效果和病情转归。,HPV检测送检流程,宫颈刷、保存液及取样示意图,HPV检测后处理,HPV基因分型检测,常规筛查,液基细胞学检查,根据最后结果按ASCCP指南处理,阳性,正常,CIN,CIN、,阴性,1年后重复HPV检测和细胞学检查,半年后重复HPV检测和细胞学检查或阴道镜检查,阴道镜检查、多点活检,HPV感染的治疗,通过治疗HPV 感染达到防治宫颈病变的目的是近年来

10、研究的热点，但目前仍缺乏公认有效的治疗手段。30岁之前的感染者，如果没有宫颈细胞学改变，主要通过消除易感因素、提高机体免疫能力、辅助局部药物治疗，帮助感染者自我清除。30岁以后的感染者，以及无论年龄有细胞学改变者，治疗包括：抗HPV治疗+宫颈病变治疗 其中抗HPV治疗包括：全身抗病毒药物、免疫增强剂、生物学治疗、中药治疗、局部药物（抗病毒、改善内环境、促进上皮修复）治疗；现有宫颈病变治疗手段也能清除部分HPV病毒。,HPV疫苗是最大希望,项目一：HPV16、18分型检测 特点：1、可以分型检测 2、可以覆盖70%-80%的病毒 3、收费低，容易推广 目标：1、常规妇科体检,HPV两个项目推荐,HPV两个项目推荐,项目二：HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68共13种高 危型分型检测 特点：1、可以分型检测 2、可以覆盖99%的病毒 目标：1、宫颈病变患者 2、对健康有体检需求者,