No4第四章实验动物微生物控制课件.ppt

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1、二、实验动物微生物和寄生虫控制的等级普通动物(conventional animal CV)清洁级动物(clean animal CL）无特定病原体动物(specific pathogen free animal,SPF)无菌动物和悉生动物(germ free animal GF)(gnotobiotic animal GN),（一）普通动物(Conventional animal CV)指动物不携带主要的人兽共患病、自身的烈性传染病的病原体及体外寄生虫的实验动物。饲养在普通环境下;建立消毒防疫制度、动物房操作规程等动物饲养和实验设施要符合最基本的要求动物仅供作教学、或预备实验时使用。,202

2、3/1/17,（二）清洁级动物(clean animal CL 除普通动物应排除的病原体外，不携带对动物危害大和对科学研究干扰大的病原。如：清洁级小鼠 排除8种细菌、5种病毒、7种寄生虫;清洁级大鼠 不应携带8种细菌、2种病毒、7种寄生虫,2023/1/17,清洁级动物应注意如下几点：引种应来源更高等级的动物;饲养、繁殖或使用在温、湿度可控的屏障环境；物品如笼具、垫料、器具、饲料和饮水等，应灭菌处理;要建立严格管理制度和操作规范。,清洁级动物已是我国目前主要使用的质量控制等级的动物，已被广泛地应用于生命科学研究、新药研制和安全评价等领域的动物实验之中。,2023/1/17,（三）无特定病原体动

3、物(Specific Pathogen Free Animal,SPF)指在清洁级动物的基础上，动物不携带主要潜在感染或条件致病和对科学实验干扰大的病原。清洁级动物和无特定病原体动物差异：SPF动物需要控制的微生物和寄生虫的种类更多,2023/1/17,来源：无菌剖腹产动物保种、饲育及使用：在屏障环境 中设施：屏障环境并经常性的监测从事的人员：应当接受实验动物学的专门培训。应用：SPF动物广泛地于肿瘤免疫学、病理学、药物学、毒理学、生物制品研制及生物医学等方面，尤其在放射、烧伤等医学研究领域具有特殊的应用价值。SPF动物已是国际公认的标准的实验动物.,2023/1/17,（四）无菌动物和悉生动

4、物无菌动物:(germ free animal GF)动物不携带任何以现有手段可检出的微生物和寄生虫，来源由普通动物经无菌剖腹产手术，幼仔置于无菌隔离器中，由人工哺乳或代乳饲育而成。悉生动物:(gnotobiotic animal GN)在无菌动物中人为地植入已知的一种或数种微生物的动物被称为悉生动物。,2023/1/17,已育成的无菌动物,2023/1/17,健康动物处死浸在37灭菌液中送进无菌隔离器剖腹手术切除子宫将子宫浸消毒液即送到另一只隔离器中切开子宫取胎用灭菌纱布揩拭仔体并电刀断脐放入隔离器内人工喂乳或保姆代养,1、无菌动物技术,2023/1/17,2、无菌动物的特征形态学改变消化系

5、统 肠道肌层薄，张力低，盲肠肥大，肠粘膜绒毛增多，肝脏重量下降循环系统 心脏相对缩小血液系统 白细胞增多网状内皮系统 脾脏缩小，无三级滤泡，功能降低泌尿系统 肾脏较小,2023/1/17,功能和代谢的改变免疫功能 网状内皮系统、淋巴组织发育不良，缺乏丙种球蛋白，吞噬细胞能力弱。生长率 无菌鸟类比普通鸟类生长率高；无菌大、小鼠和普通动物相同；无菌豚鼠、兔生长率比普通动物慢。生殖 在生殖方面的影响？。,2023/1/17,代谢 代谢周期比普通动物长；血中含氮量少，肠道对水的吸收率低营养 无菌对豚鼠、兔的营养吸收有影响，无菌动物肠道上皮细胞更新率低，肠壁物质交换较慢,通过胆汁排泄代谢产物的速度减慢寿

6、命 无菌动物比普通动物寿命长,2023/1/17,3、无菌动物在生物医学研究中的应用 微生物学研究中的应用 研究某些疾病的病原：提供组织培养的无菌组织；研究病原体的致病作用与机体的关系。如：将溶组织阿米巴接种到无菌豚鼠的盲肠内不能引起感染。在普通豚鼠中却能引起致死性感染 探讨单一病原体的致病作用 如猫瘟病毒正常猫易感染，无菌则不易受感,2023/1/17,微生物学研究中的应用 研究微生物间的拮抗作用 如：霍乱弧菌单菌感染无菌幼豚鼠可使其死亡；但同时感染产气荚膜杆菌时，动物不发生死亡。福氏痢疾杆菌单菌经口感染无菌幼豚鼠时死亡；但先经口接种活的大肠杆菌，无菌豚鼠不致死亡，肠道里只能检出大肠杆菌，而

7、没有痢疾杆菌。病毒病研究,2023/1/17,免疫学研究中的应用（免疫学研究是发展无菌动物的原因之一）免疫功能与机体感受性的关系 特异性抗细菌抗体；肺泡巨噬细胞的活力；唾液中的溶菌酶和白细胞；对内毒素的全身反应等都明显降低,2023/1/17,研究丙种球蛋白和特异性抗体：无菌动物血清中一球蛋白含量低。用无抗原性饲料喂无菌动物，小鼠血清中完全缺乏丙种球蛋白。无菌小猪中用无抗原性的饲料时，血清里完全没有丙种球蛋白和特异性抗体存在。,2023/1/17,放射医学研究 放射致无菌动物粘膜损伤较普通动物轻微。？在营养代谢研究中的应用 探讨细菌和维生素的关系 许多营养成分依靠肠道细菌降解。肠道细菌可合成V

8、B、VK，应用无菌动物可研究那些菌可合成VB、VK 探讨细菌与胆汁酸代谢的关系 微生物可使胆汁酸发生化学变化，减少其再吸收。,2023/1/17,在肿瘤研究中的应用免疫抑制剂的研究：因普通动物用免疫抑制剂可降低其抵抗力，致其继发感染而死亡；要用无菌动物进行。用于致癌作用和微生物关系的研究：如：大肠杆菌产物乙基硫氨酸为致癌物；无菌大鼠口服苏铁素无致癌性，普通大鼠口服苏铁素可诱发结肠和其他部位的癌变 尿道癌在普通实验动物中少见，但在无菌动物中却较常见（如无菌大鼠）。可能的原因：微生物可产生或改变化学物质的致癌性,2023/1/17,老年病学（探讨微生物和老化的关系）无菌大鼠的心、肝、肾、脑没有与年

9、龄相关的病变 普通大鼠寿命为2年左右，无菌大鼠寿命为34年,毒理学研究 药物的毒理作用常与肠道内的微生物代谢有关 如：正常豚鼠对青霉素过敏，无菌动物无此反应,2023/1/17,4、悉生动物及应用 又称已知菌动物（Animal with Bacteric Flora）特点：悉生动物和无菌动物一样，实验结果排除了动物体内不明确的微生物对实验结果的干扰,用途 单一微生物与机体的互相关系观察多种微生物之间及其与机体之间的互相关系和菌群失调现象施以物理、化学等致病因子，观察机体、微生物、致病因子三方面互相关系（如：无菌动物不发生迟发性过敏反应，而感染大肠杆菌的悉生动物可发生迟发性过敏反应）,2023/

10、1/17,要求,2023/1/17,三、不同等级实验动物的微生物要求,1、实验动物微生物和寄生虫等级,2023/1/17,2、实验动物微生物和寄生虫学等级国家标准,2023/1/17,2023/1/17,2023/1/17,2023/1/17,2023/1/17,2023/1/17,2023/1/17,四、不同等级实验动物的比较,（一）动物传染病的三个基本环节1、传染源：患病动物、隐性感染者和病死的动物、某些野生动物和患病人2、传播途径：病原通过一定的方式或媒介再次侵入易感动物体内 包括空气飞沫传播、经水及食物传播、虫媒传播、垫料等水平传播和垂直传播。3、易感动物:对某种病原体有易感性的动物称

11、为易感动物。,五、实验动物传染性疾病的预防,2023/1/17,（二）实验动物传染病以预防为主对实验动物疾病很少进行治疗，而以预防为主1、药物治疗可能会影响实验结果;2、康复动物可能长期带毒，成为传染源;3、对小动物治疗，经济上不划算;4、狗、灵长类治疗，受到疾病类型和研究性质的影响.,2023/1/17,（三）实验动物传染病预防措施 1、合理的环境设施是预防疾病的必备条件；2、严格执行科学管理制度和标准操作程序；3、建立并保持饲养健康的动物种群；4、严格监护动物健康状况（哨兵动物 sentinel Animal）；5、大动物及时预防接种。,病毒：流行性出血热病毒、淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒、

12、狂犬病毒、猴疱疹病毒（B病毒）、马尔堡病毒、猴痘、亚巴病毒、甲肝等。,第二节 实验动物常见感染性疾病,一、在实验动物中导致人兽共患病的主要病原体,细菌：沙门氏菌、布氏杆菌、鼠疫、鼠咬热、志贺氏菌、结核分枝杆菌等,真菌：石膏样毛癣菌、石膏样小孢子菌、羊毛状小孢子菌、新生隐球菌、荚膜组织胞浆菌等。,寄生虫：弓开体、卡氏肺囊虫，梨形鞭毛虫等。,2023/1/17,二、实验动物主要烈性传染病病原体（可严重影响动物健康）鼠痘病毒（小鼠脱脚病病毒）、兔出血症（兔瘟）病毒、犬细小病毒（急性出血性肠炎）、犬瘟热病毒等。三、引起实验动物一般性疾病的病原体病毒：小鼠肝炎病毒、仙台病毒、猴D型反转录病毒等。细菌：多

13、杀巴氏杆菌、泰泽氏菌、鼠棒状杆菌、肺支原体等寄生虫：多种体内寄生虫。,2023/1/17,四、实验动物部分微生物疾病,（一）病毒性疾病 流行性出血热（Epidemic Hemorrhagic Fever,EHF）为人兽共患病,病毒主要存在于野生啮类动物 在实验动物，多呈隐性感染和持续带毒状态，无临床症状，但传给人则引发疾病。,2023/1/17,流行性出血热1、病原学属汉坦病毒，单链RNA结构，有囊膜，可凝集鹅的红血球。此病毒对环境和理化因素的抵抗力较差：对脱氧胆酸盐和脂溶剂敏感；紫外线可使其迅速灭活；420条件下较稳定，5630 min可将其杀死。不耐酸，PH23时1h可使其完全灭活.,流行

14、性出血热,2023/1/17,、流行病学、传染源：人的传染源有3种类型：野鼠型：主要由野外黑线姬鼠传播，多发生在农业区，青壮年易感，一般病情较重；家鼠型：由褐家鼠传播，农村和城市均可发生，病情较轻，多无典型的5期经过；大鼠型：发生在以大鼠或小鼠为实验对象的的实验室。,2023/1/17,、传播途径：主要以螨等为传播媒介，含有病毒的血、尿等经人的皮肤破损处使人患病；气溶胶吸入感染是主要的传播途径。、易感者：主要是人，其次为大鼠、小鼠、豚鼠、兔等实验动物。(动物感染后可不发病，而人则发病。),流行性出血热,2023/1/17,、症 状 人感染后出现发热、出血、休克、肾功能受损和循环衰竭等症状，严重

15、时可导致死亡（病死率为3%20%不等，一般为5%左右）。有典型临床五期表现：(1)发热期 35天，“三痛症”症状:发热伴头痛、眼眶痛及腰痛;另外颜面及周身皮肤潮红和眼结膜水肿，病重者皮肤有广泛性出血或瘀斑。(2)低血压期 在热退时血压下降,有紫绀及休克表现。(3)少尿期(4)多尿期(5)恢复期,流行性出血热,2023/1/17,4、病理变化大鼠感染多无病理变化；小鼠的组织广泛性充血、出血、渗出、变性、坏死。、诊 断 多数易感动物感染该病毒表现无症状，其诊断主要靠血清特异抗体检测，也可在感染大鼠的肺组织中查到病毒抗原。常用的方法有ELISA和IF。,流行性出血热,2023/1/17,、预防与控制

16、A、防止野鼠进入动物饲养室和实验室：野鼠是本病的主要传染源和病毒携带者。、进入动物室的实验人员应戴口罩和手套，以防吸入气溶胶和被鼠咬伤传染。、定期做血清检查。、无菌剖腹取胎和屏障系统饲养可根除该病毒感染。,流行性出血热,2023/1/17,是一种人兽共患病；在实验动物多呈隐性感染，小鼠感染后可不出现症状，但可通过胎盘传给子代。主要侵害中枢神经系统，呈现脑脊髓炎症状。人类感染可引起流感样或脑膜炎症状,淋巴细胞性脉络丛脑膜炎（Lymphocytic choriomeningitis，LCM）,2023/1/17,淋巴细胞性脉络丛脑膜炎1、病原学 LCM病毒属沙粒病毒，单链RNA，有囊膜。可在鸡胚绒

17、毛尿囊膜上增殖，但不产生可见痘斑;在小鼠、地鼠、猴、牛等动物和人的多种细胞培养生长。LCM病毒对乙醚敏感，不耐热，561h，紫外线或0.1%甲醛都可灭活。,2023/1/17,、流行病学：.传染源：感染LCM病毒的野小鼠、无症状带病毒小鼠。.传播途径：接触带病毒动物的分泌物、排泄物；吸血昆虫 传播、以及胎盘垂直传播等。.易感者：小鼠、大鼠、地鼠、豚鼠、猴、兔、狗、人易感,淋巴细胞性脉络丛脑膜炎,2023/1/17,、症状：实验动物多呈隐性，无症状；人感染发病主要呈脑脊髓炎症状类似流行性感冒，头痛、肌肉痛、发热、恶心、呕吐、喉痛、畏光；有时发疹、下痢、咳嗽和脑膜炎严重者侵犯中枢神经引起脑膜炎,淋

18、巴细胞性脉络丛脑膜炎,2023/1/17,4、诊断 LCM病毒通常是无症状感染；怀疑本病时，可将患病动物的血清、脑脊液或病变组织接种在SPF小鼠脑内，SPF小鼠45天后，全身及四肢抽搐痉挛而死亡。用血清学方法检测LCM病毒抗体。5、预防与控制严格防止野鼠和感染鼠等进入动物室与实验室。加强血清学监测。,淋巴细胞性脉络丛脑膜炎,2023/1/17,6、对实验研究的干扰作用人类感染可引起流感样症状或脑膜炎。影响动物机体的免疫系统：在B、T淋巴细胞和巨噬细胞中大量复制，从而抑制体液免疫和细胞免疫应答；在肿瘤研究方面：（1）常可污染移植肿瘤；（2）促进移植肿瘤在体内的生长。,淋巴细胞性脉络丛脑膜炎,20

19、23/1/17,鼠 痘（Mouse Pox）鼠痘病毒感染引起的小鼠烈性传染病，患病动物往往未出现症状即死亡，死亡率高达90%以上。,2023/1/17,1、病原学鼠痘病毒属痘病毒科，双链DNA结构。鼠痘病毒与其他痘病毒之间有一定的抗原关系鼠痘病毒对干燥、低温有较强的抵抗力，但可100以上高温及紫外迅速杀死，2火碱、0.5甲醛、0.3%石炭酸可杀死病毒。,鼠 痘,2023/1/17,2、流行病学A.传染源：病小鼠和无症状带病毒小鼠。B.传播途径：接触病鼠患处渗出液、分泌物及其污染物品。C.易感动物：小鼠尤其是A、C3H、DBA/2、BALB/c、CBA，幼鼠和衰老小鼠对本病特别易感，且常呈致死性

20、。但本病在野鼠中较少发生。,鼠 痘,2023/1/17,3、症状：有的发病较急，迅速死亡，有的进程缓慢出现典型症状，感染后不但引起全身或局部皮肤痘疹，还发生肢体末端皮肤坏死坏疽，使之发生脱脚、断尾和外耳缺损等病状，故称脱脚病 但大部分小鼠为不显性感染，有的小鼠可以既无症状，又可获得免疫。,鼠 痘,2023/1/17,4、病理变化肝、脾、淋巴结、胸腺广泛性坏死，肠道的出血，肾、膀胱出血。皮肤：表皮增生、肿胀。皮肤上皮细胞、肝细胞及黏膜上皮细胞等处可见嗜酸性包涵体。,鼠 痘,2023/1/17,5、诊断：临床症状可初步诊断，依据病理学诊断检查包涵体，病毒分离、血清学检查方法主要有ELISA等。6、

21、预防与控制：定期监测、对可疑小鼠要隔离检疫、证实后消灭整个感染鼠群。一切可能受感染的物品要高压消毒，房间用福尔马林等消毒剂熏蒸。经常监测，净化种群，对死亡小鼠无害化处理。,鼠 痘,2023/1/17,7、鼠痘病毒对实验研究的干扰作用急性感染，小鼠突然死亡，实验中断；慢性型病例，出现全身症状，使实验结果混乱，污染环境；隐性感染小鼠，实验处理如实验性结核、X射线、各种化学毒素、组织移植、肿瘤移植和运输等，都可激活病毒而使鼠痘流行。,鼠 痘,2023/1/17,兔病毒性出血症（Rabbit Hemorrhagic Disease）,2023/1/17,猴B病毒病、病原体（simian herpesv

22、irus B virus）猴B病毒是属于疱疹病毒科，病毒对乙醚、脱氧胆酸盐氯仿敏感，对热敏感，50 30min可将其杀灭，X光和紫外线对其有杀灭 猴是B病毒的自然宿主，感染率可达1060。多数呈良性经过。,2023/1/17,、临床症状 猴子一般呈隐性感染，无全身不适，饮食正常。初期在舌表面和唇缘有小疱疹，然后形成溃疡，最后坏死结痂，714d自愈。鼻内常有少许粘液或脓性分泌物，常结膜炎和腹泻。人感染猴B病毒，可出现致死性疾病。肌痛、发热、头痛；迅速发展为上行性麻痹；感觉异常、复视、运动失调、抽搐、吞咽困难，直至死亡。,猴B病毒病,2023/1/17,、临床症状 猴一般呈隐性感染，无全身不适，饮

23、食正常。初期在舌表面和唇缘有小疱疹，然后形成溃疡，最后坏死结痂，714d自愈。鼻内常有少许粘液或脓性分泌物，常结膜炎和腹泻。,猴B病毒病,2023/1/17,人感染猴B病毒，可出现致死性疾病。人类B病毒病的临床症状同猴子的很不一样。主要表现为上行性脊髓炎或脑脊髓炎。被咬的局部区域疼痛、发红、肿胀，出现疱疹，有渗出物，常常并发淋巴管和淋巴结炎。出现上行性脊髓炎或脑脊髓炎的症状。（感觉异常、复视、运动失调、抽搐、吞咽困难，直至死亡。）,2023/1/17,、诊断根据临床症状可初诊，确诊应进行病毒分离和血清学检测、预防操作人员被猴抓伤后要立即用肥皂水洗净伤口，再用碘酒消毒，并观察3周；同有疑似B病毒

24、病变的猴子或猴组织接触的人应带口罩和护目镜；尽量不要徒手捕捉猴子有开放性创伤的工作人员需待充分恢复后才能同猴子接触。,猴B病毒病,猴B病毒病,2023/1/17,仙台病毒 仙台病毒属于副粘病毒科,副粘病毒属。啮齿类实验动物是仙台病毒唯一自然宿主。,实验动物其他病毒性传染病,2023/1/17,感染途径 空气和接触途径是病毒传播和扩善的方式。仙台病毒除了鼻内途径外，其它途径均不引起小鼠的自然感染。偶尔可在肾、肝、脾、等器官发现病毒，但在尿、血和肠内则没有病毒。,2023/1/17,不同品系小鼠对仙台病毒感染的易感性和敏感性明显不同。在自发性流行中抵抗力大的小鼠如SJL/j等死亡率接近0，高度易感

25、小鼠如Swiss裸鼠则可接近100。感染的裸鼠其疾病症状出现的时间比有免疫机能的小鼠稍晚，并伴有进行性消瘦。在较长的时间里陆续死亡。,2023/1/17,2.暂停繁殖，在相对静止条件下保存这种非繁殖群直至感染消除(约2个月)，然后恢复繁殖。,两种方法,1.消灭已感染鼠群,重引符合标准的种鼠或用无菌技术剖腹取胎重建繁殖群。,在屏障环境内的鼠群中仙台病毒抗体阳性，若不及时清除所有被感染动物，导致屏障设施的失败,2023/1/17,泰泽菌病（Tyzzers Disease）泰泽菌病是由毛发状芽孢杆菌（Bacillus piliformis）引起的，以肝脏局灶性坏死、心肌炎和肠炎为特征，大多数实验动物

26、均可感染的传染病。小鼠、大鼠、地鼠、豚鼠、兔、猫、猕猴等都易感，且大多呈隐性感染，当动物应激、受免疫抑制剂处理和纤维素缺乏时可诱发疾病，甚至暴发流行,（二）实验动物细菌性疾病,2023/1/17,（1）病原 为毛样杆菌，该菌形态多样，繁殖体为细长杆状或带有芽胞（0.5-10u）；只能生长在活的细胞内，不能在无细胞培养基上生长，可在鸡胚中生长。染色特性：姬姆萨（Ciemsa）和美兰染色为染色阳性 革兰氏染色阴性,2023/1/17,（2）临床症状 大、小鼠感染动物一般无特征性症状 其他动物常见可见被毛粗乱、腹泻、下痢呈水样或带有少量血性粘液，肛门污秽(wet tail),2023/1/17,实验

27、动物的微生物和寄生虫监测一、隔离检疫时间：一般隔离观察时间：小鼠、大鼠、豚鼠、兔37天；犬、猫2030天；灵长目动物90天以上。二、监测的内容：级别越高，监测的病原微生物和寄生虫的种类就越多,1、取样原则：随机抽样 依群体大小取样：检查抗体选择成年淘汰动物，而病原体选幼年动物2、检测时间与频率：3、检查方法：,2023/1/17,动物 编号 外观检查 麻醉（体外寄生虫检查）皮肤取样皮肤取样（真菌的检查）（血清检查病毒或其它病原微生物抗体）取血 无菌解剖（脏器、肠内容物、粪便、体内寄生虫检查）（气管分泌物、肠内容物、脏器分离细菌）检测 检测报告,4、检测步骤,END,鸡的检测程序,xiexie!,谢谢！,xiexie!,谢谢！,