结核病诊断TSPOT实验课件.ppt

《结核病诊断TSPOT实验课件.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《结核病诊断TSPOT实验课件.ppt（41页珍藏版）》请在三一办公上搜索。

1、汇 报 人：培训专业：呼吸内科指导老师：2016.12.14,02,结核病实验室检查及意义,汇 报 人：0102结核病实验室检查及意义,目录,01.分枝杆菌概述,02.结核病实验室检查,03.小结,2,目录01.分枝杆菌概述02.结核病实验室检查03.小结,分枝杆菌概述,01,3,分枝杆菌概述013,分枝杆菌属分类,结核分枝杆菌(M.tuberculosis)非结核分枝杆菌（NTM）麻风分枝杆菌（M.leprae）,4,分枝杆菌属分类结核分枝杆菌(M.tuberculosis)4,结核分枝杆菌的发现,1882年 德国柯赫医生发现结核致病菌-结核杆菌,5,结核分枝杆菌的发现1882年 德国柯赫医

2、生发现结核致病菌,结核杆菌的变迁,1897年提出结核病的飞沫传播1922年，卡介苗为预防结核病首次对新生儿接种1945年，链霉素的问世使肺结核不再是不治之症。,6,结核杆菌的变迁1897年提出结核病的飞沫传播6,结核分枝杆菌特点,(M.tuberculosis),生物学主要特点：1.细胞壁中含有大量脂质2.引起的疾病都呈慢性并伴肉芽肿3.抗酸染色阳性,7,结核分枝杆菌特点(M.tuberculosis)生物学主要,结核病,由结核分枝杆菌引起的慢性感染性疾病,8,结核病由结核分枝杆菌引起的慢性感染性疾病8,结核病临床表现,9,结核病临床表现症 状 体 征 1.全身症状：消,结核病发病机制,起始期

3、,细胞外增殖期和传播期,共生期,T细胞反应期,10,结核病发病机制起始期细胞外增殖期和传播期共生期T细胞反应期1,结核病发病机制,11,结核病发病机制结核分枝杆菌通过飞沫进入呼吸道，被肺泡巨噬细胞,结核病发病机制,12,结核病发病机制 在低氧、低pH、抑制性脂肪酸和宿主免疫,活动性结核与潜伏感染,13,接触活动性结核病患者暴露程度不足，结核杆菌被机体免疫力清除没,结核病诊断,实验室检查,影像检查,病理检查,+,临床 指征,14,结核病诊断实验室检查影像检查病理检查+临床 指征14,结核杆菌实验室检查,02,结核杆菌实验室检查02,结核诊断-临床应用,几乎所有的临床内科科室都需要结核的鉴别诊断：

4、发热待查，结核排筛结脑的鉴别诊断胸腹水患者待查儿童结核,16,结核诊断-临床应用几乎所有的临床内科科室都需要结核的鉴别诊,结核杆菌,结核病实验室检查,细菌学检查,免疫学检查,分子生物学检查,分枝杆菌分离培养分支杆菌药敏试验分枝杆菌菌种鉴定,体液免疫学诊断,细胞免疫学诊断,DNA测序DNA探针技术聚合酶链反应（PCR）,17,结核杆菌结核病细菌学检查免疫学检查分子生物学检查分枝杆菌分离,结核分枝杆菌-实验室检查,涂片镜检,细菌学检查,适用于多种标本；操作简便，价格低廉。2份痰标本直接涂片抗酸杆菌镜检阳性；1份痰标本直接涂片抗酸杆菌镜检阳性+肺部影像学检查符合活动性肺结核表现。肺结核治疗评估的主要

5、依据之一,18,结核分枝杆菌-实验室检查涂片镜检细菌学检查适用于多种标本；操,结核分枝杆菌-实验室检查,缺点：不能区别是否为非结核分枝杆菌 不能区别死活菌。结核杆菌暴露于异烟肼时，某些条件会失去抗酸性，出现假阴性。检测灵敏度较低（104-105 个细菌/毫升）。,19,结核分枝杆菌-实验室检查缺点：不能区别是否为非结核分枝杆菌1,结核杆菌培养,细菌学检查,传统方法：L-J固体培养基快速培养法:检测细菌生长过程中代谢产生的CO2或消耗的O2，显微镜直接观察、变色液体培养基等BACTEC MGIT960系统 BACTEC460系统、Bact/ALERT 3D、ESP等。,痰培养、其他标本培养,20

6、,结核杆菌培养细菌学检查传统方法：L-J固体培养基痰培养、其他,结核杆菌培养,阴性培养,阳性培养,BACTEC MGIT 960/320 指示器系统,21,结核杆菌培养阴性培养阳性培养无或微弱荧光FFFO2FO2FO,结核杆菌培养,1份痰标本直接涂片抗酸杆菌镜检阳性+1份痰标本结核分枝杆菌培养 痰涂片阴性，肺部影像学检查符合活动性肺结核影像学表现+1份痰标本结核分枝杆菌培养阳性,用于耐多药结核疗效判定,结核菌培养临床价值确诊结核,22,结核杆菌培养1份痰标本直接涂片抗酸杆菌镜检阳性+用于耐多药结,抗酸杆菌培养优缺点,敏感性较直接涂片法高，理论上10-100条菌/毫升可检出阳性；特异性较直接涂片

7、法高，可以从菌落生长速度、色素产生初步判断非结核分枝杆菌；分离出具有活力的纯培养物，为进一步药敏试验提供基础。,需时长，根据接种量的大小，一般2-8周才能得到肉眼可见菌落。结果受标本保存运送时间、培养基成分和质量、前处理方法等影响，操作较直接涂片法复杂，需经严格培训。需培养基凝固灭菌器、离心机、涡旋振荡器、恒温培养箱等设备。成本是直接涂片法的7-8倍。,23,抗酸杆菌培养优缺点敏感性较直接涂片法高，理论上10-100条,细胞免疫学检查,结核菌素皮肤试验（PPD试验）干扰素释放试验（T-SPOT试验）,24,细胞免疫学检查结核菌素皮肤试验（PPD试验）24,免疫学检查,细胞免疫学检查,PPD-结

8、核菌素试验,迟发型细胞超敏反应1）方法：1:2000 OT或PPD液0.1毫升(5单位)，左前臂屈侧中部皮内注射，48-72h测量皮肤硬结的直径。,25,免疫学检查细胞免疫学检查PPD-结核菌素试验迟发型细胞超敏,PPD-结核菌素试验,2）判断标准：阴性4mm弱阳性5-9mm阳性10-19mm，强阳性20mm或局部出现水泡与坏死,26,PPD-结核菌素试验2）判断标准：26,PPD-结核菌素试验,3)结核菌素试验的意义阴性：无结核菌感染；不能排除结核感染。阳性：曾有结核感染，并不一定现在患病。强阳性：活动性结核病可能,A、变态反应尚未建立；B、免疫抑制如应用皮质激素或营养不良等,27,PPD-

9、结核菌素试验3)结核菌素试验的意义A、变态反应尚未,PPD-结核菌素试验,PPD所含抗原为致病性分枝杆菌、环境分枝杆菌及卡介苗菌株所共有，其结果受到卡介苗接种及其他分枝杆菌感染的影响，特异性较差。当出现免疫功能低下时可出现假阴性结果，敏感性低。免疫力正常的阴性有一定意义。强阳性有一定意义。有结核变态反应、淋巴结核强阳性多。经济、简便，可以用于流行病学大规模的筛查和普查，但存在着明显的缺陷。,PPD试验临床价值,28,PPD-结核菌素试验PPD试验临床价值28,T-SPOT实验,细胞免疫学检查,T-SPOT试验原理,结核感染者体内存在特异的效应T淋巴细胞，效应T淋巴细胞再次受到结核抗原刺激时会分

10、泌多种细胞因子（IFN-）。因此，检测效应T淋巴细胞可用于结核病或结核潜伏感染者的诊断。既用抗体捕获培养中细胞所分泌的细胞因子，并以酶联斑点显色方式将其表现出来。刺激抗原：ESAT-6蛋白(早期分泌抗原靶6）、CFP-10蛋白（培养滤液蛋白）由结核分枝杆菌特有的RD1基因编码，可刺激活化的效应T淋巴细胞产生干扰素。RD1基因在BCG以及大部分环境分枝杆菌中缺失。,29,T-SPOT实验细胞免疫学检查T-SPOT试验原理结核感染者,T-SPOT试验,30,T-SPOT试验干扰素干扰素TB抗原多肽T细胞活化T细胞,T-SPOT步骤,31,T-SPOT步骤31,T-SPOT灵敏度,灵敏度基本不受免疫

11、力低下/受抑制影响，在肺外结核患者中有很高的检出率 美国FDA数据：灵敏度95.6%(175/183)国内临床数据：灵敏度95.3%(624/655),32,T-SPOT灵敏度ReferenceSensitivity,结核杆菌,特异性高只针对结核分枝杆菌复合群敏感，与绝大多数环境分枝杆菌和卡介苗（BCG）无交叉反应 美国FDA数据：特异性97.1%(297/306)国内临床数据：特异性94.1%(478/508),33,结核杆菌 特异性高33,PPD皮试与T-SPOT试验,PPD皮试和T-SPOT试验的比较,34,PPD皮试与T-SPOT试验PPD皮试T-SPOT试验估计的,T-SPOT试验结

12、果解释,阴性结果提示患者体内不存在针对结核杆菌特异的效应T细胞。假阴性结果：感染阶段不同；少数免疫系统功能不全/疾病；实验非正常操作。阳性结果提示患者体内存在针对结核杆菌特异的效应T细胞，患者存在结核感染。但是否是活动性结核病，需结合临床症状和其它检测指标综合判断。假阳性结果：4种环境分枝杆菌感染时：M.kansasii（堪萨斯）、M.szulgai（苏氏）、M.marinum（海）、M.gordonae（戈登）减少了医生主观因素对检测结果的影响;故虽然检测仪器昂贵，操作相对较为复杂，但仍可视为进行结核病早期诊断的较为理想的手段。,35,T-SPOT试验结果解释 阴性结果35,非血液样本检测,

13、T-SPOT可通过一些体液成功地诊断出活动性结核：支气管肺泡灌洗液（“BAL”）（肺部）脑脊髓液（“CSF”）（中枢神经系统）胸腔积液（肺部周围）腹膜液（腹腔）非血样本的T-SPOT结果很强的话（即存在大量的结核效应T细胞）,揭示在这个器官或部位存在活动性结核非血样本中不存在结核效应T细胞，说明这个器官或部位没有活动性结核,36,非血液样本检测T-SPOT可通过一些体液成功地诊断出活动性结,各国对潜伏感染风险人群的筛查指南,37,各国对潜伏感染风险人群的筛查指南风险人群美国指南加拿大指南英,小结,03,小结03,小结,结核病诊断金标准：抗酸杆菌培养-阳性病理结果-阳性,辅助手段：影像学、分子生

14、物学,结核病在临床上仍不容忽视，但诊断仍存在难题,T-SPOT是结核病早期诊断的较为理想的手段,39,小结结核病诊断金标准：辅助手段：结核病在临床上仍不容忽视，但,参考文献,韦海旭，席薇莲，陆利欢，陈健.-干扰素释放分析T-SPOTTB在结核性疾病中的诊断价值.临床肺科杂志.2012,17(8):1439-1440 张丽帆，刘晓清.干扰素释放分析T-SPOT.TB诊断结核感染临床应用进展.中国医学科学院学报.2009,4:506-510中华人民共和国卫生部，肺结核诊断标准，2008-08-01 Childhood tuberculosis treatment remains imprecise

15、 scienceNature MedicineVolume:17,Page:116011 October 2011.Connell et al PLoS ONE 2008.3;7:e2624 Kobashi et al.Scand J Infect Dis 2008.40;8:629-34Dominguez et al Clin Vacc.Immunol 2008;15;168-71Kim et al.Am J Med.2009；122,189-195,40,参考文献韦海旭，席薇莲，陆利欢，陈健.-干扰素释放分析T-,Thank you,请各位老师批评指正！,Thank you请各位老师批评指正！,