第九章特殊染色课件.ppt
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1、第九章 特 殊 染 色,第九章 特 殊 染 色,一、特殊染色的概念及意义 特殊染色为常规染色(即苏木素、伊红)的必要补充,又称选择性染色,只有相对的特异性,如PAS阴性反应它有糖元。,一、特殊染色的概念及意义 特殊染色为常规染,意义:(1)特染能显示在常规染色切片中不明显的部分,如革兰氏染色、细菌染色。(2)区别HE染色中不能鉴别的组织病变,如VG染色区别胶元纤维和平滑肌。(3)显示某些常规染色中不能着色的物质,如网染才能显示网状纤维,常规HE染色是染不出来的。因此,特殊染色也是制片染色中不可缺少的组成部分,它在病理诊断常着辅助作用,也为科研提供依据。,意义:(1)特染能显示在常规染色切片中不
2、明显的部分,如革兰,二、学习特染技术应掌握的重点(注意事项)(1)染色方法的成败,应该在温度、浓度、时间和PH值等方面找原因。(2)注意特染的应用范围,如某种病变应用什么方法染色才能达到目的,一般先在HE切片所见的要求去选择适当的特染方法,一种或多种。,二、学习特染技术应掌握的重点,(3)必须掌握各种特殊染色的结果,避免导致错误的结论或严重的误诊,如在网染时把胶元纤维误以为网状纤维。(4)尽量要阳性切片作对照,便于选择特染方法,并与HE切片作对照。(5)特染的组织,在其固定、脱水根据要求选择。所用的器皿都必须化学清洗。,(3)必须掌握各种特殊染色的结果,避免导致错误的结论或严重的,三、玻璃器皿
3、的清洁 在病理实验室可用的玻璃器皿,都必须经过清洗干净才能使用,清洗的方法依玻璃器皿的新旧而不同。,三、玻璃器皿的清洁 在病理实验室可用的玻璃器皿,,1、新购玻璃器皿的处理 对于新购买的玻璃器皿应先用洗衣粉浸泡洗刷,自来水冲洗后再用12%盐酸水溶液浸泡数小时后,用自来水冲洗干净,必要时可用少量蒸馏水洗2次,1、新购玻璃器皿的处理 对于新购买的玻璃器皿应,2、使用后玻璃器皿的处理 每次使用后的玻璃器皿都必须及时彻底清洗干净,以供下次实验之用,如轻视这一步骤,可用的玻璃器皿不够干净,则会影响染色效果,甚至导致染色失败,特别在酶组化和银离子反应操作过程中更有严格的要求,使用后的玻璃器皿在一般清洗后,
4、还要求用硫酸清洗液浸泡。,2、使用后玻璃器皿的处理 每次使用后的玻璃器皿,硫酸清洗液配制重铬酸钾 80g自来水 1000ml浓硫酸(工业用)120m新配制的清洁液为红褐色,反复使用一段时间后,慢慢变成绿色,说明清洁液已失败,不能继续使用应重新配制。,硫酸清洗液配制重铬酸钾,3、玻璃器皿的清洗方法 任何玻璃器皿都必须用自来水冲洗,然后把残余药液或染液洗去。用毛刷沾洗衣粉擦干净。自来水冲洗,蒸馏水洗2次。把晾干的器皿轻轻置入清洁液浸泡数日。取出器皿,用自来水把器皿内外彻底冲洗干净,最后用蒸馏水洗2次。把玻璃器皿倒置于有孔架上自然晾干或温箱中烤干,最后存放橱内备用。,3、玻璃器皿的清洗方法 任何玻璃
5、器皿都必须用自来水,常用的特染第一节 结缔组织染色,常用的特染第一节 结缔组织染色,一、胶元纤维染色(VG 染色)胶元纤维的分部组成成分 胶原纤维是结缔组织中的三种纤维之一,分布最为广泛,含量最多。主要分布于真皮、腱、韧带、骨、透明软骨、动脉、肠壁、子宫和基底膜等。胶原纤维具有韧性大,抗拉力强的特点。胶原纤维单位主要由纤维母细胞合成。,一、胶元纤维染色(VG 染色)胶元纤维的分部组成成分,苦味酸酸性品红法1 VG 染液试剂配制1%酸性品红 10ml苦味酸饱和液 90ml此液常分别配制临用时加以混合,不能久用。,苦味酸酸性品红法1 VG 染液试剂配制1%酸性品,【染色步骤】(1)组织固定于10%
6、早醛液中,常规脱水包埋(2)组织切片脱腊至水。(3)V-G染液2-5(酸性品红1:苦味酸饱和液9)(4)倾去染液,无水酒精急速脱水,用滤纸吸干(5)二甲苯透明,中性树胶封片。,【染色步骤】(1)组织固定于10%早醛液中,常规脱水包埋,【结果】胶元纤维呈红色,肌纤维、胞质及 红细胞黄色。,【结果】胶元纤维呈红色,肌纤维、胞质及,第九章特殊染色课件,胶元纤维染色应用 胶原纤维染色在病理诊断上主要用于鉴定梭形、纤维形细胞肿瘤的组织来源;常常要在纤维、平滑肌和神经三者之中作出选择。观察动脉硬化的心脏,在H切片中,心肌内散在的小疤痕灶和心肌均被染作红色,而作胶原纤维染色可将胶原组织和肌肉上明显地区分开来
7、。早期肝硬化用胶原纤维染色,也可使小叶之间少量增生的胶原纤维突出地显示出来。,胶元纤维染色应用 胶原纤维染色在病理诊断,二、网状纤维染色网状纤维染色的形态特点和染色原理 网状纤维是网状结缔组织内的一种纤维。它由网状细胞产生,网状纤维细而有分支,穿行于细胞体和突之间,共同构成网状支架。这种纤维用HE染色一般不易辨认。若用银氨溶液浸染能使纤维变成黑色,故又称嗜银纤维。,二、网状纤维染色网状纤维染色的形态特点和染色原理,(二)网状纤维染色的原理 网状纤维的染色方法很多,但是染色原理基本相同,有以下方面。(1)氧化 使网状纤维具有选择性,不经氧化的切片,常用的氧化剂是高锰酸钾。(2)漂白 一般采用2%
8、草酸,漂白后无色,(二)网状纤维染色的原理 网状纤维的染色方法,(3)媒染 多用2%硫酸铁氨(俗称铁明矾)。这些试剂可增加网状纤维对银氨液的选择性。(4)浸银 也称镀银,使银氨配位化合物与网状纤维结合,带正电荷的二氨合银Ag(NH3)+2被具有嗜银性物质的网状纤维吸附。(5)还原 甲醛液是还原剂,能把与网状纤维结合的银氨配位化合物还原成棕黑色的金属银。,(3)媒染 多用2%硫酸铁氨(俗称铁明矾)。这些试剂可增,(三)网状纤维纤维染色应用 判定病变组织支架的破坏情况,组织、脏器网状支架的存在与塌陷、完整与破坏、网状纤维的分布及走行,有多少、粗细、疏密或有无断裂形态变化。,(三)网状纤维纤维染色应
9、用 判定病变组织支架,用于显示和鉴别肿瘤的性质和来源显示和区分癌与肉瘤 来源于上皮组织的恶性肿瘤(癌)仅癌巢周围有网状纤维包绕,巢内癌细胞之间则没有网状纤维分部。来源于间叶组织的恶性肿瘤(肉瘤),瘤细胞之间往往可见较多的网状纤存在。,用于显示和鉴别肿瘤的性质和来源显示和区分癌与肉瘤,用于某些肿瘤的诊断 根据染色所显示的网状纤维多少、分布及行走特点,可用于诊断下列肿瘤。,用于某些肿瘤的诊断 根据染色所显示的网状纤,1)平滑肌肉 细胞之间见有大量平行分布的网状纤维。2)纤维肉瘤 可见大量网状纤维存在,并且密集包绕细胞。3)滑膜肉瘤 其梭形细胞也产生网状纤维,但不如纤维肉瘤多。,1)平滑肌肉 细胞之
10、间见有大量平行分布的网状纤维。2),用于观察和研究癌组织的发生、发展及其恶性程度 癌组织发生,发展过程以及癌组织生长速度,可通过网染进行观察和研究,如癌巢周围的网状纤维包囊完整,说明癌组织生长较慢,恶性程度低;再如子宫颈鳞状细胞癌巢周围网状纤维分解,说明癌组织正在扩散,其恶性程度较高。,用于观察和研究癌组织的发生、发展及其恶性程度,(5)用于显示和研究肝组织病变 用网状纤维的染色法,观察肝脏病变处的网状支架形态、分布特点及其破坏情况,可以判定和研究其病变性质、程度及其发展与转规。,(5)用于显示和研究肝组织病变 用网状纤维的,(四)网状纤维染色的注意事项(1)用新蒸馏水配制最好用双蒸水配制。(
11、2)所用玻璃器材及载玻片均要达到化学洁净程度.(3)对已配制好的硝酸银液和氨银溶液,要贮存冰箱中保存待用。,(四)网状纤维染色的注意事项(1)用新蒸馏水配制最好用,(4)在染色过程中,用染氨银染液或硝酸银液的前后应用蒸馏水洗浸。(5)氯化金调色和硫代硫酸钠固定的时间不应太长,否则会引起网状纤维染色变淡。(6)切片脱水后及时封片,不宜在空气中停留时间过长,以免产生色素颗粒。,(4)在染色过程中,用染氨银染液或硝酸银液的前后应用蒸馏水洗,【氨银液的配制】1.取10%硝酸银水溶液5ml于三角烧瓶内,一滴一滴地滴加氨水(氢氧化铵),并同时摇动容器 2.硝酸银遇到氨水立即产生沉淀,当其沉淀物被溶解时(不
12、能完全溶解也可)3.再加入3%氢氧化钠水溶液5ml。溶液重新产生沉淀 4.此时再滴加氨水。至其沉淀被溶解后,(为避免氨水加入过量最好能有少许沉淀物为妥,以免脱片)最后加蒸馏水稀释至50ml。5.滤过,贮存于棕色瓶中存放入冰箱备用。临用前取出恢复室温再用。,【氨银液的配制】1.取10%硝酸银水溶液5,【染色步骤】(1)切片脱蜡至水洗。(2)0.25%高锰酸钾液氧化5。(3)自来水洗2次。(4)2.5%草酸液漂白1-2,水洗2。(5)2%硫酸铁铵媒染(铁明矾)10。(6)水洗,蒸馏水洗2次。(7)滴染氨银液1左右。,【染色步骤】(1)切片脱蜡至水洗。(2)0.25%高,(8)蒸馏水洗2次。(9)1
13、0%中性早醛还原3。(10)蒸馏水洗12次。(11)0.2%的氯化金调色5 水洗。(12)5%硫代硫酸钠固定5。(13)自来水冲洗,蒸馏水洗。(14)复染(对比染色)伊红、中性红、。(15)脱水、透明、封片。,(8)蒸馏水洗2次。(9)10%中性早醛还原3。,【结果】胶元纤维呈黄色,网状纤维成黑色。,【结果】胶元纤维呈黄色,网状纤维成黑色。,【染色结果】网状纤维染灰黑色,胶元纤维红色,基质 黄色。,【染色结果】网状纤维染灰黑色,胶元纤维红色,基质,三、弹力纤维染色法,弹力纤维较细,直径0.2-1微米,且坚固,弹性大,容易伸展,纤维分枝连接成网,HE染色与胶原纤维着色相似,若用弹力纤维染色法,则
14、可分辨的很清楚。,三、弹力纤维染色法 弹力纤维较细,直径0.2-1微,Weigert氏弹力纤维染色法:标本用Zenker氏液,酒精或10%甲醛固定均可。石蜡或冰冻切片。脱蜡至水。水洗后,加入Weigert氏染色液2-6小时或更长的时间,一般依染色液的新旧而定。,Weigert氏弹力纤维染色法:,取出后,直接浸入1%盐酸酒精或酒精中进行分化。如需复染细胞核,可染于明矾苏木素溶液中10分钟。冲洗后,可再以V G氏染液作对比染色1-2分钟。95%酒精分化、脱水、透明、封固。,取出后,直接浸入1%盐酸酒精或酒精中进行分化。,试剂配制:盐基性复红(碱性品红)2g间苯二酚(雷锁辛)4g蒸馏水 200ml3
15、0%三氯化铁水溶液 25ml 95%酒精 200ml浓盐酸 4ml,试剂配制:,先将盐基性复红(碱性品红)溶于200ml的蒸馏水中,加入4-5g间苯二酚,加温煮沸(不停搅拌),然后加入25ml的30%三氯化铁水溶液,继续搅拌煮沸2-5分钟,冷却后过滤倾去滤液,将滤纸及沉淀物置于温箱中烘干。而后将滤纸和干燥的沉淀物一并投入烧杯,加200ml 95%酒精,小心隔水加热,徐徐搅拌使沉淀溶解,然后弃去滤纸冷却后,补足因加热蒸发的酒精。最后加入4ml的盐酸即可应用。(对苯二酚可代替间苯二酚)。,先将盐基性复红(碱性品红)溶于200ml的蒸馏水中,,【注意事项】Weigert氏弹力纤维染色的配制已有许多改
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