第一章绪论蛋白质的结构和功能课件.ppt

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1、延安大学医学院 生物化学教研室,延安大学医学院 生物化学教研室,生物化学,生命的化学，应用化学的理论、技术及物理学、免疫学等原理和方法研究生物体（植物、动物、微生物、人体等）的化学组成和生命过程中化学变化规律的一门基础生命科学。,生物化学生命的化学，应用化学的理论、技术及物理学、免疫学,分子生物学 是从生物化学、生物物理学、遗传学、微生物学等多种学科经过相互杂交、相互渗透而形成的，主要研究核酸和蛋白质等生物大分子的结构及其在遗传信息传递和细胞信息转导过程中的作用。,第一章绪论蛋白质的结构和功能课件,生物化学发展史：,叙述生物化学阶段（20世纪20年代以前）以分析和研究组成生物体的成分及生物体的

2、分泌物和排泄物为主。动态生物化学阶段（20世纪20年代至50年代）主要研究体内各种物质的合成和分解途径及动态平衡。机能生物化学阶段（近50多年）探讨生物大分子的结构和机能的关系。,生物化学发展史：叙述生物化学阶段（20世纪20年代以前）,第 一 篇 生物大分子的结构与功能,构件分子 生物大分子 细胞器 细胞 组织器官 生物体,第 一 篇 生物大分子的结构与功能 构件分子,蛋白质的结构与功能,第 一 章,Structure and Function of Protein,蛋白质的结构与功能第 一 章Structure and Fu,一、什么是蛋白质?,蛋白质(protein)是由许多氨基酸(am

3、ino acids)通过肽键(peptide bond)相连形成的高分子含氮化合物。,一、什么是蛋白质?蛋白质(protein)是由许多氨基酸(a,二、蛋白质的生物学重要性,1.蛋白质是生物体重要组成成分分布广：所有器官、组织都含有蛋白质；细胞的各个部分都含有蛋白质。含量高：是细胞内最丰富的有机分子，占人体干重的45，某些组织含量更高，例如脾、肺及横纹肌等高达80。,二、蛋白质的生物学重要性1.蛋白质是生物体重要组成成分,1）作为生物催化剂（酶）2）代谢调节作用3）免疫保护作用4）物质的转运和存储5）运动与支持作用6）参与细胞间信息传递,2.蛋白质重要的生物学功能,3.氧化供能,1）作为生物催

4、化剂（酶）2.蛋白质重要的生物学功能3.氧,蛋 白 质 的 分 子 组 成The Molecular Component of Protein,第 一 节,蛋 白 质 的 分 子 组 成The Molecular,组成蛋白质的元素,主要有C、H、O、N和S。有些蛋白质含有少量磷或金属元素铁、铜、锌、锰、钴、钼，个别蛋白质还含有碘。,组成蛋白质的元素 主要有C、H、O、N和S。有,各种蛋白质的含氮量很接近，平均为16,由于体内的含氮物质以蛋白质为主，因此，只要测定生物样品中的含氮量，就可以根据以下公式推算出蛋白质的大致含量：,100克样品中蛋白质的含量(g%)=每克样品含氮克数 6.25100,

5、1/16%,蛋白质元素组成的特点,各种蛋白质的含氮量很接近，平均为16 由于体内的含氮物质,一、氨基酸 组成蛋白质的基本单位,存在自然界中的氨基酸有300余种，但组成人体蛋白质的氨基酸仅有20种，且均属 L-氨基酸（甘氨酸除外）。,一、氨基酸 组成蛋白质的基本单位存在自然界中的,H甘氨酸CH3丙氨酸L-氨基酸的通式R,极性中性氨基酸非极性疏水性氨基酸酸性氨基酸碱性氨基酸,（一）氨基酸的分类,极性中性氨基酸（一）氨基酸的分类,甘氨酸 glycine Gly G 5.97,丙氨酸 alanine Ala A 6.00,缬氨酸 valine Val V 5.96,亮氨酸 leucine Leu L

6、5.98,异亮氨酸 isoleucine Ile I 6.02,苯丙氨酸 phenylalanine Phe F 5.48,脯氨酸 proline Pro P 6.30,非极性疏水性氨基酸,目 录,甘氨酸 glycine Gly,色氨酸 tryptophan Try W 5.89,丝氨酸 serine Ser S 5.68,酪氨酸 tyrosine Tyr Y 5.66,半胱氨酸 cysteine Cys C 5.07,蛋氨酸 methionine Met M 5.74,天冬酰胺 asparagine Asn N 5.41,谷氨酰胺 glutamine Gln Q 5.65,苏氨酸 threo

7、nine Thr T 5.60,2.极性中性氨基酸,目 录,色氨酸 tryptophan Try,天冬氨酸 aspartic acid Asp D 2.97,谷氨酸 glutamic acid Glu E 3.22,赖氨酸 lysine Lys K 9.74,精氨酸 arginine Arg R 10.76,组氨酸 histidine His H 7.59,3.酸性氨基酸,4.碱性氨基酸,目 录,天冬氨酸 aspartic acid Asp,几种特殊氨基酸,脯氨酸（亚氨基酸）,几种特殊氨基酸 脯氨酸,半胱氨酸,胱氨酸,-HH,半胱氨酸+胱氨酸二硫键-HH,（二）氨基酸的理化性质,1.两性解离及

8、等电点,氨基酸是两性电解质，其解离程度和带电性质取决于其所处溶液的酸碱度。,等电点(isoelectric point,pI)在某一pH的溶液中，氨基酸解离成阳离子和阴离子的趋势及程度相等，成为兼性离子，呈电中性。此时溶液的pH值称为该氨基酸的等电点。,（二）氨基酸的理化性质1.两性解离及等电点氨基酸是两性电解,pH=pI,+OH-,pHpI,+H+,+OH-,+H+,pHpI,氨基酸兼性离子,阳离子,阴离子,pH=pI+OH-pHpI+H+OH-+H+pHpI氨,2.紫外吸收,色氨酸、酪氨酸的最大吸收峰分别280nm和275nm 附近。,大多数蛋白质含有这两种氨基酸残基，所以测定蛋白质溶液2

9、80nm的光吸收值是分析溶液中蛋白质含量的快速简便的方法。,2.紫外吸收,3.茚三酮反应,氨基酸与茚三酮水合物共热，可生成蓝紫色化合物，其最大吸收峰在570nm处。由于此吸收峰值与氨基酸的含量存在正比关系，因此可作为氨基酸定量分析方法。,3.茚三酮反应 氨基酸与茚三酮水合物共热，可生成蓝紫色化合,二、肽,肽键(peptide bond)是由一个氨基酸的-羧基与另一个氨基酸的-氨基脱水缩合而形成的化学键。,（一）肽(peptide),二、肽 肽键(peptide bond)是由一个氨基酸,+,-HOH,甘氨酰甘氨酸,肽键,+-HOH甘氨酰甘氨酸肽键,肽是由氨基酸通过肽键缩合而形成的化合物。,两分

10、子氨基酸缩合形成二肽，三分子氨基酸缩合则形成三肽,肽链中的氨基酸分子因为脱水缩合而基团不全，被称为氨基酸残基(residue)。,由十个以内氨基酸相连而成的肽称为寡肽(oligopeptide)，由更多的氨基酸相连形成的肽称多肽(polypeptide)。,肽是由氨基酸通过肽键缩合而形成的化合物。两分子氨基酸,N 末端：有自由氨基的一端C 末端：有自由羧基的一端,多肽链有两端,多肽链(polypeptide chain)是指许多氨基酸之间以肽键连接而成的一种结构。,N 末端：有自由氨基的一端多肽链有两端 多肽链(poly,N末端,C末端,牛核糖核酸酶,N末端C末端牛核糖核酸酶,（二）几种生物活

11、性肽,1.谷胱甘肽(glutathione,GSH),（二）几种生物活性肽 1.谷胱甘肽(glutathion,GSH过氧化物酶,GSH还原酶,NADPH+H+,NADP+,GSH过氧化物酶H2O2 2GSH 2H2O GSS,体内许多激素属寡肽或多肽,神经肽(neuropeptide),2.多肽类激素及神经肽,体内许多激素属寡肽或多肽 神经肽(neuropeptide),蛋 白 质 的 分 子 结 构The Molecular Structure of Protein,第 二 节,蛋 白 质 的 分 子 结 构The Molecular,蛋白质的分子结构包括 一级结构(primary str

12、ucture)二级结构(secondary structure)三级结构(tertiary structure)四级结构(quaternary structure),蛋白质的分子结构包括高 级 结 构,定义 指多肽链中氨基酸的排列顺序。,一、蛋白质的一级结构,主要的化学键 肽键，有些蛋白质还包括二硫键。,定义 指多肽链中氨基酸的排列顺序。一、蛋白质的一级结构主要,一级结构是蛋白质空间构象和特异生物学功能的基础。,目 录,一级结构是蛋白质空间构象和特异生物学功能的基础。目 录,二、蛋白质的二级结构,主要的化学键：氢键,二、蛋白质的二级结构 蛋白质分子中某一段肽链的局部空间结构，,（一）肽单元,参

13、与肽键的6个原子C1、C、O、N、H、C2位于同一平面，C1和C2在平面上所处的位置为反式(trans)构型，此同一平面上的6个原子构成了所谓的肽单元(peptide unit)。,（一）肽单元参与肽键的6个原子C1、C、O、N、H、C2,蛋白质二级结构的主要形式,-螺旋(-helix)-折叠(-pleated sheet)-转角(-turn)无规卷曲(random coil),蛋白质二级结构的主要形式-螺旋(-helix,（二）-螺旋,目 录,（二）-螺旋目 录,（三）-折叠,（三）-折叠,（四）-转角和无规卷曲,-转角,无规卷曲是指没有规律性的那部分肽链结构。,（四）-转角和无规卷曲-转角

14、无规卷曲是指没有规律性的那部,（五）模体,在许多蛋白质分子中，可发现二个或三个具有二级结构的肽段，在空间上相互接近，形成一个具有特殊功能的空间构象，被称为模体(motif)。,（五）模体在许多蛋白质分子中，可发现二个或三个具有二级结构的,钙结合蛋白中结合钙离子的模体,锌指结构,钙结合蛋白中结合钙离子的模体 锌指结构,三、蛋白质的三级结构,整条肽链中全部氨基酸残基的相对空间位置,即肽链中所有原子在三维空间的排布位置。,（一）定义,三、蛋白质的三级结构疏水键、离子键、氢键等。主要,目 录,目 录,肌红蛋白(Mb),肌红蛋白(Mb)N 端 C端,纤连蛋白分子的结构域,（二）结构域,大分子蛋白质的三级

15、结构常可分割成一个或数个球状或纤维状的区域，折叠得较为紧密，各行使其功能，称为结构域(domain)。,纤连蛋白分子的结构域（二）结构域大分子蛋白质的三级结,（三）分子伴侣,通过提供一个保护环境而加速蛋白质折叠成天然构象或形成四级结构。,可逆地与未折叠肽段的疏水部分结合随后松开，如此重复进行可防止错误的聚集发生，使肽链正确折叠。,与错误聚集的肽段结合，使之解聚后，再诱导其正确折叠。,折叠中对二硫键的正确形成起重要。,(chaperon),（三）分子伴侣通过提供一个保护环境而加速蛋白质折叠成天然构象,亚基之间的结合力主要是离子键，其次是氢键和疏水作用。,四、蛋白质的四级结构,蛋白质分子中各亚基的

16、空间排布及亚基接触部位的布局和相互作用，称为蛋白质的四级结构。,有些蛋白质分子含有二条或多条多肽链，每一条多肽链都有完整的三级结构，称为蛋白质的亚基(subunit)。,亚基之间的结合力主要是离子键，其次是氢键和疏水作用。四、蛋,血红蛋白的四级结构,血红蛋白的四级结构,五、蛋白质的分类,根据折叠方式和复杂程度 一级结构蛋白质 二级结构蛋白质 三级结构蛋白质 四级结构蛋白质 根据功能 活性蛋白质 非活性蛋白质,五、蛋白质的分类 根据折叠方式和复杂程度,根据组成成分,根据外观形状,根据组成成分 单纯蛋白质结合蛋白质=蛋白质部分+非,蛋白质结构与功能的关系The Relation of Struct

17、ure and Function of Protein,第 三 节,蛋白质结构与功能的关系第 三 节,（一）一级结构是空间构象的基础,一、蛋白质一级结构与功能的关系,（一）一级结构是空间构象的基础 一、蛋白质一级结构与功,天然状态，有催化活性,尿素、-巯基乙醇,去除尿素、-巯基乙醇,非折叠状态，无活性,天然状态，有催化活性 尿素、去除尿素、非折叠,（二）一级结构与功能的关系,例：镰刀形红细胞贫血,这种由蛋白质分子发生变异所导致的疾病，称为“分子病”。,（二）一级结构与功能的关系例：镰刀形红细胞贫血N-val,（一）肌红蛋白与血红蛋白的结构,二、蛋白质空间结构与功能的关系,目 录,（一）肌红蛋白

18、与血红蛋白的结构 二、蛋白质空间结构与功,Hb与Mb一样能可逆地与O2结合，Hb与O2结合后称为氧合Hb。氧合Hb占总Hb的百分数（称百分饱和度）随O2浓度变化而改变。,（二）血红蛋白的构象变化与结合氧,Hb与Mb一样能可逆地与O2结合，Hb与O2结合后称为氧合,肌红蛋白(Mb)和血红蛋白(Hb)的氧解离曲线,肌红蛋白(Mb)和血红蛋白(Hb)的氧解离曲线,协同效应(cooperativity),一个寡聚体蛋白质的一个亚基与其配体结合后，能影响此寡聚体中另一个亚基与配体结合能力的现象，称为协同效应。如果是促进作用则称为正协同效应(positive cooperativity)如果是抑制作用则称

19、为负协同效应(negative cooperativity),协同效应(cooperativity)一个寡聚体蛋,第一章绪论蛋白质的结构和功能课件,O2,血红素与氧结合后，铁原子半径变小，就能进入卟啉环的小孔中，继而引起肽链位置的变动。,O2血红素与氧结合后，铁原子半径变小，就能进入卟啉环的小孔中,变构效应(allosteric effect),在变构剂的作用下，变构蛋白质的空间构象发生改变，导致其功能发生改变的现象称为变构效应。,变构效应(allosteric effect)在变构剂的作用,（三）蛋白质构象改变与疾病,蛋白质构象疾病：若蛋白质的折叠发生错误，尽管其一级结构不变，但蛋白质的构象

20、发生改变，仍可影响其功能，严重时可导致疾病发生。,（三）蛋白质构象改变与疾病 蛋白质构象疾病：若蛋白质的折,蛋白质构象改变导致疾病的机理：有些蛋白质错误折叠后相互聚集，常形成抗蛋白水解酶的淀粉样纤维沉淀，产生毒性而致病，表现为蛋白质淀粉样纤维沉淀的病理改变。这类疾病包括：人纹状体脊髓变性病、老年痴呆症、亨停顿舞蹈病、疯牛病等。,蛋白质构象改变导致疾病的机理：,疯牛病中的蛋白质构象改变疯牛病是由朊病毒蛋白(prion protein,PrP)引起的一组人和动物神经退行性病变。正常的PrP富含-螺旋，称为PrPc。PrPc在某种未知蛋白质的作用下可转变成全为-折叠的PrPsc，从而致病。,疯牛病中

21、的蛋白质构象改变PrPcPrPsc正常疯牛病,第四节,蛋白质的理化性质与分离纯化The Physical and Chemical Characters and Separation and Purification of Protein,第四节蛋白质的理化性质与分离纯化,（一）蛋白质的两性解离,一、理化性质,蛋白质分子除两端的氨基和羧基可解离外，氨基酸残基侧链中某些基团，在一定的溶液pH条件下都可解离成带负电荷或正电荷的基团。,蛋白质的等电点(isoelectric point,pI)当蛋白质处于某一pH时，解离成正、负离子的趋势相等，即成为兼性离子，净电荷为零，此时溶液的pH称为蛋白质的等

22、电点。,（一）蛋白质的两性解离 一、理化性质 蛋白质分子除两,（二）蛋白质的胶体性质,蛋白质属于生物大分子之一，分子量可自1万至100万之巨，其分子的直径可达1100nm，为胶粒范围之内。,蛋白质胶体稳定的因素颗粒表面电荷水化膜,（二）蛋白质的胶体性质 蛋白质属于生物大分子之一，分子,水化膜,溶液中蛋白质的聚沉,+带正电荷的蛋白质带负电荷的蛋白,（三）蛋白质的变性、沉淀和凝固,蛋白质的变性(denaturation)在某些物理或化学因素作用下，其特定的空间构象被破坏，即有序的空间结构变成无序的空间结构，从而导致其理化性质改变和生物活性的丧失。,（三）蛋白质的变性、沉淀和凝固 蛋白质的变性(de

23、na,造成变性的因素 如加热,乙醇等有机溶剂,强酸、强碱、重金属离子及生物碱试剂等。,造成变性的因素 变性的本质破坏非共价键和二硫键，不改,应用举例 临床医学上,变性常被应用来消毒及灭菌。此外,防止蛋白质变性也是有效保存蛋白质制剂（如疫苗等）的必要条件。,应用举例,若蛋白质变性程度较轻，去除变性因素后，蛋白质仍可恢复或部分恢复其原有的构象和功能，称为复性(renaturation)。,若蛋白质变性程度较轻，去除变性因素后，蛋白质仍可恢复或部分恢,天然状态，有催化活性,尿素、-巯基乙醇,去除尿素、-巯基乙醇,非折叠状态，无活性,天然状态，有催化活性 尿素、去除尿素、非折叠,蛋白质沉淀在一定条件下

24、，蛋白疏水侧链暴露在外，肽链融会相互缠绕继而聚集，因而从溶液中析出。变性的蛋白质易于沉淀，有时蛋白质发生沉淀，但并不变性。,蛋白质的凝固作用蛋白质变性后的絮状物加热可变成比较坚固的凝块，此凝块不再溶于强酸和强碱中。,蛋白质沉淀蛋白质的凝固作用,（四）蛋白质的紫外吸收,蛋白质分子中含有共轭双键的苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸，在280nm波长处有特征性吸收峰。蛋白质的OD280与其浓度呈正比关系，可作蛋白质定量测定。,（四）蛋白质的紫外吸收蛋白质分子中含有共轭双键的苯丙氨酸、酪,（五）蛋白质的呈色反应,茚三酮反应(ninhydrin reaction)蛋白质经水解后产生的氨基酸可发生茚三酮反应。,双缩

25、脲反应(biuret reaction)蛋白质和多肽中肽键在稀碱溶液中与硫酸铜共热，呈现紫红色，用来检测蛋白质水解程度。,（五）蛋白质的呈色反应茚三酮反应(ninhydrin re,二、蛋白质的分离和纯化,（一）透析及超滤法,透析(dialysis)利用透析袋把大分子蛋白质与小分子化合物分开的方法。,超滤法 应用正压或离心力使蛋白质溶液透过有一定截留分子量的超滤膜，达到浓缩蛋白质溶液的目的。,二、蛋白质的分离和纯化（一）透析及超滤法 透析(dia,（二）丙酮沉淀、盐析及免疫沉淀,丙酮(或乙醇）沉淀时，必须在04低温下进行，丙酮用量一般10倍于蛋白质溶液体积。蛋白质被丙酮沉淀后，应立即分离。,盐

26、析法(salt precipitation)，是将硫酸铵、硫酸钠或氯化钠等中性盐加入蛋白质溶液，使蛋白质表面电荷被中和及水化膜被破坏，导致蛋白质沉淀。,（二）丙酮沉淀、盐析及免疫沉淀 丙酮(或乙醇）沉,免疫沉淀法：将某一纯化蛋白质免疫动物可获得抗该蛋白的特异抗体。利用特异抗体识别相应的抗原蛋白，并形成抗原抗体复合物的性质，可从蛋白质混合溶液中分离获得抗原蛋白。,免疫沉淀法：,（三）电泳（elctrophoresis）,蛋白质在高于或低于其pI的溶液中为带电的颗粒，在电场中能向正极或负极移动。这种通过蛋白质在电场中泳动而达到分离各种蛋白质的技术,称为电泳。根据支撑物的不同，可分为薄膜电泳、凝胶电

27、泳等。,（三）电泳（elctrophoresis）蛋白质在高于或低于,几种重要的蛋白质电泳 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，常用于蛋白质分子量的测定。等电聚焦电泳，通过蛋白质等电点的差异而分离蛋白质的电泳方法。双向凝胶电泳是蛋白质组学研究的重要技术。,几种重要的蛋白质电泳,（四）层析（chromatography）,待分离蛋白质溶液（流动相）经过一个固态物质（固定相）时，根据溶液中待分离的蛋白质颗粒大小、电荷多少及亲和力等，使待分离的蛋白质组分在两相中反复分配，并以不同速度流经固定相而达到分离蛋白质的目的。,（四）层析（chromatography）待分离蛋白,蛋白质分离常用的层析方法 离子交换层

28、析：利用各蛋白质的电荷量及性质不同进行分离。凝胶过滤(gel filtration)又称分子筛层析，利用各蛋白质分子大小不同分离。,蛋白质分离常用的层析方法,目 录,目 录,目 录,目 录,（五）超速离心,超速离心法(ultracentrifugation)既可以用来分离纯化蛋白质也可以用作测定蛋白质的分子量。,蛋白质在离心场中的行为用沉降系数(sedimentation coefficient,S)表示,沉降系数与蛋白质的密度和形状相关。,（五）超速离心 超速离心法(ultracentrifug,因为沉降系数S大体上和分子量成正比关系，可应用超速离心法测定蛋白质分子量，但对分子形状的高度不对称的大多数纤维状蛋白质不适用。,因为沉降系数S大体上和分子量成正比关系，可应用超速离心法测定,