食用菌制种技术ppt课件.ppt
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1、1,食用菌菌种的生产,2,食用菌的栽培一般包含几个步骤:首先是制作菌种,即通过孢子或菇体组织分离出菌丝体,并加以扩大繁殖形成生产菌种;其次是将制好的菌种接于培养基质,生产出食用菌子实体。,孢子,菇体组织,菌丝体,菌 种,培养基质,子实体,萌发,分离,3,一、菌种的制作,食用菌菌种有特定的制作程序,只有掌握了制种技术,才能生产出优良菌种,使食用菌栽培获得成功。,1、菌种类型及制种程序,(1)菌种类型,使用目的的不同,保藏用菌种,实验用菌种,生产用菌种,4,一、菌种的制作,1、菌种类型及制种程序,(1)菌种类型,物理性状,固化菌种,固体菌种,液体菌种,外观形态,颗粒状菌种,片状菌种,砖状菌种,培养
2、容器,袋装菌种,瓶装菌种,5,一、菌种的制作,1、菌种类型及制种程序,(1)菌种类型,培养基的主料,粪草菌种,谷粒菌种,木块菌种,木屑菌种,6,一、菌种的制作,1、菌种类型及制种程序,(1)菌种类型,菌种按生产程序,一级种(母种),二级种(原种),三级种(栽培种),7,一、菌种的制作,1、菌种类型及制种程序,(1)菌种类型,一级种,一级种又称母种、试管种。,将经孢子分离法或组织分离法得到的纯培养物,移接到试管斜面培养基上培养而得到的纯种。,采用分离法获得的母种数量有限,一般可将菌丝再次转接到新的斜面培养基上进行转管繁殖,能得到更多的母种,称为再生母种,即可用于生产,也适用于纯种的保藏。,一支长
3、满菌丝体的试管母种可分移成10多支新试管。试管种若不马上使用,可置于4的冰箱中保存。,8,一、菌种的制作,1、菌种类型及制种程序,(1)菌种类型,二级种,二级种又称原种,这是由母种转接到装有麦粒等固体培养基质的专有菌种瓶中经过培养后形成。原种可采用750mL菌种瓶或500mL罐头瓶作为培养容器。一般一支母种可扩大繁殖6-8瓶原种。,若原种直接用于生产,则成本太高,因此,原种还必须进一步扩大繁殖成三级种,使菌种数量增多,才能用于栽培。由于原种的培养基质接近栽培所用的基质,因此原种也可用于小规模的栽培。,9,一、菌种的制作,1、菌种类型及制种程序,(1)菌种类型,三级种,三级种又称栽培种,它是由二
4、级种进一步扩大繁殖而得。,栽培种的培养基质与二级种相似,更接近于栽培基质。三级种数量多、成本低。,栽培种一般采用固体培养基,用聚乙烯塑料袋或玻璃瓶作培养容器。通 常一瓶原种可繁殖30-50袋栽培种。,10,一、菌种的制作,1、菌种类型及制种程序,(2)制种程序,菌种生产是指通过无菌操作,大量培养繁殖菌种的过程。,11,一、菌种的制作,2、菌种生产的主要设备,(l)配料设备,切片机是将木材切成规格木片的专用机械,是食用菌培养基质粉碎处理的预前工序设备。,切 片 机,12,一、菌种的制作,2、菌种生产的主要设备,(l)配料设备,粉碎机是将木片、秸秆等原料粉碎成一定粗细度碎屑的专用机械。,粉 碎 机
5、,13,一、菌种的制作,2、菌种生产的主要设备,(l)配料设备,搅拌机是将培养料通过搅拌使其分布充分均匀的专业机械。其配套动力为3KW,每次拌料量为100KG湿重。,搅 拌 机,14,一、菌种的制作,2、菌种生产的主要设备,(l)配料设备,装袋机是将搅拌混合均匀后的培养料装入塑料薄膜筒内的机械。,装 袋 机,15,一、菌种的制作,2、菌种生产的主要设备,(l)配料设备,将培养料装入料瓶的机械。生产上采用的均匀螺旋挤入式装瓶机。,装 瓶 机,16,一、菌种的制作,2、菌种生产的主要设备,(2)灭菌设备,高压灭菌锅是密闭耐压的金属灭菌容器。其工作原理是在驱尽锅内空气的前提下,通过加热把密闭锅内的水
6、蒸气压力升高,从而使蒸汽温度相应提高到100以上。压力在98KPa时,蒸汽温度可达121。常见的高压灭菌锅有手提式、立式与卧式,也有自制的高压灭菌锅。手提式主要用于一级种制作,立式和卧式主要用于二级种、三级种和栽培瓶、袋的制作。,17,一、菌种的制作,2、菌种生产的主要设备,(2)灭菌设备,手提式高压灭菌锅的容积小,适用于试管培养基、三角瓶或平皿、无菌水、少量菌种瓶及一些器皿的灭菌。,手提式高压灭菌锅,18,一、菌种的制作,2、菌种生产的主要设备,(2)灭菌设备,立式高压灭菌锅容量大,可用于菌种瓶、罐头瓶及塑料袋装培养基的灭菌。,立式高压灭菌锅,19,一、菌种的制作,2、菌种生产的主要设备,(
7、2)灭菌设备,卧式高压灭菌锅容量大、盛物多,灭菌彻底,效果好。,卧式高压灭菌锅,20,一、菌种的制作,2、菌种生产的主要设备,(2)灭菌设备,常压灭菌灶是在自然压力下产生100蒸汽进行灭菌的炉灶,如土蒸锅。常压灶制作简单,造价低,很受菇农欢迎。,常压灭菌灶,21,一、菌种的制作,2、菌种生产的主要设备,(3)接种设备,无菌室是食用菌生产中无菌操作的环境。无菌室要求严密、清洁。,无菌室一般有内外两间,外间较小,作为缓冲间。缓冲间可放置工作服、拖鞋、口罩、消毒用药品等。无菌室门应采用推拉门,内外两间的门应呈对角线安装,以提高隔离缓冲效果。必 要时可安装一个双层小型玻璃推拉窗,以便于内外物品传递,减
8、少进出无菌室的次数。,22,一、菌种的制作,2、菌种生产的主要设备,(3)接种设备,为了在使用之后能排湿、通风,应在室内顶部设置小型排风扇,在室内的侧面底部设置玻 璃纤维过滤进气口。,无菌室(包括缓冲间)除照明用光源外,还应安装紫外线杀菌灯,吊装在接种操作台的正上 方。,23,一、菌种的制作,2、菌种生产的主要设备,(3)接种设备,超净工作台:是一种局部层流(平行或垂直流)装置,它能在局部造成高洁净度的工作空间;使小房间内的空气经预过滤器和高效过滤器除尘、洁净后,以垂直或水平层流状态通过操作区,因此,可使操作区保持既无尘又无菌的环境。,超净工作台,24,一、菌种的制作,2、菌种生产的主要设备,
9、(3)接种设备,接种箱:是用木材与玻璃制成密闭箱。有单人式或双人对接式。接种箱前后斜面为玻璃窗,便于操作时观察,可开启,以便取放物品。玻璃窗下的木板有一对椭圆形开孔,操作孔装有白布袖套,一端固定在圆孔上,另一端套口用松紧带箍住操作者的手腕,以防杂菌进入。箱内可安装20W日光灯和30W紫外线灯管。,25,一、菌种的制作,2、菌种生产的主要设备,(3)接种设备,A、接种针,B、接种钩,C、接种环,D、接种铲,E、接种锄,F、接种耙,G、接种刀,H、接种勺,I、接种镊,26,一、菌种的制作,2、菌种生产的主要设备,(4)培养设备,在制作一级种和少量二级种时,可采用电热恒温箱或隔水式电热恒温箱,目的是
10、控制温度,适温培养,恒 温 箱,27,一、菌种的制作,2、菌种生产的主要设备,(4)培养设备,培养室:是专门用于培养菌种的场所。各级菌种在接种完毕之后,即移人培养室。冬季培养室应有专用加温设备。无论采用何种方法加温,都要注意培养室内空气的相对湿度,一般维持在6570,否则菌瓶失水过多。菌种培养架可用木制,也可用钢材或铝合金材料制成,宽度11.5m,有4-6层,层间距0.4-1m.培养室内还需温、湿度计,用于培养室温度、湿度的测量。,28,一、菌种的制作,2、菌种生产的主要设备,(5)菌种保藏设备,多数菌种要在低温、干燥、隔绝空气等环境中保藏。常用的主要设备是电冰箱、干燥器、真空抽气机等。高温型
11、菌类的菌种需继代保藏,由于要越过寒冷的冬季,常用电热恒温箱.,电 冰 箱,29,一、菌种的制作,3、制种用品及材料,(1)药品,基物药品,制作母种时常用的药品有,琼脂、葡萄糖、蔗糖、磷酸二氢钾、硫酸镁、蛋白胨、麦芽汁、酵母膏和维生素B1等。,原种和栽培种常用药品有,石膏粉、碳酸钙、过磷酸钙、蔗糖、红糖、尿素、硫酸铵等。,30,一、菌种的制作,3、制种用品及材料,(1)药品,消毒及杀菌药品,5甲醛,5石碳酸,0.l高锰酸钾,75酒精,25漂白粉,0.1升汞,12煤酚皂溶液(又称来苏尔),0.25新洁而灭,31,一、菌种的制作,3、制种用品及材料,(2)配料用具,常见的配料用具有,搅拌机,天平,杆
12、秤,水泥地,水桶,铁铲、铝锅、铁锅、搪瓷杯、大烧杯、筐、木箱、塑料箱,脸盆,废油桶,32,一、菌种的制作,3、制种用品及材料,(3)分装及检测用具,分装用具有,铁架台,漏斗,试管筐,菌种袋(17cmX 33cm、14cmX 28cm等的聚乙烯或聚丙烯插角、平底袋),试管(18mmXl80mm、20mmX200mm),量杯(100、250、500mL),菌种瓶(750mL、500mL盐水瓶或罐头瓶),培养皿(d9cm),三角瓶250mL,33,一、菌种的制作,3、制种用品及材料,(3)分装及检测用具,检测用具有,生物显微镜,温度计,干湿球温度计,pH试纸,卡尺,34,一、菌种的制作,3、制种用品
13、及材料,(4)分离及其用具,常用分离用具,钟罩,棉花,纱布,记录本、标签纸、笔,尖头镊子,酒精灯,广口瓶,手术剪,95酒精,其他用具及材料有:纱布、工作衣、托鞋、口罩、无菌水、颈圈、绳线、回形针、钉书机等。,35,一、菌种的制作,4、菌种培养基的制备,(1)培养基(料)的配制原则,选择适宜的营养物质,食用菌所需的营养物质,碳源、氮源和矿质元素等,对每一种营养物质的种类和数量要求又有所不同。,从母种,原种到栽培种各个阶段的目的和要求不同,所选用的培养基营养成分也应有不同。,母种的初生菌丝比较嫩弱,分解养分能力差,因此要求营养丰富、完全,氮源和维生素的比例要高,需选用容易被菌丝吸收利用的物质,如葡
14、萄糖、蔗糖、马铃薯、玉米粉、麦芽汁、酵母膏、蛋白胨、无机盐类和生长素等为原料。,原种、栽培种所需培养基数量较多,而且菌丝分解物质能力强,可利用大量农作物秸秆、粪草,锯木屑、棉籽壳、麸皮和米糠等原料作为培养基。,36,一、菌种的制作,4、菌种培养基的制备,(1)培养基(料)的配制原则,注意各种营养成分的比例,培养基(料)中各种营养物质的比例是影响菌丝生长的重要因素。营养物质比例适当,菌丝生长发育就好,否则就差。,应根据不同培养对象的需要,配以适当比例。菌丝生长要求培养基(料)有一定的碳氮比,一般碳氮比(C:N)以20:1为好。,如培养基(料)中碳源供应不足时,容易引起菌丝的过早衰老和自溶,如氮源
15、过多或过少时,会引起菌丝的过于旺盛生长或生长缓慢,对菌丝生长造成不良影响。,37,一、菌种的制作,4、菌种培养基的制备,(1)培养基(料)的配制原则,调节适宜的酸碱度(pH),培养基(料)需要保持菌丝生长发育所需要的酸碱度,因此配制培养基(料)时,要用氢氧化钠、石灰或过磷酸钙等调节pH值。,各种食用菌所需要的pH值不同,培养基(料)的酸碱度也应不同。,如猴头菌丝喜欢酸性环境,需调节pH值为45;又如草菇菌丝喜碱性环境,需将pH值调为758。,38,一、菌种的制作,4、菌种培养基的制备,(1)培养基(料)的配制原则,选择经济实用的原料,制做培养基(料)的原料,有些价格比较贵、成本高,可用一些价格
16、低廉的代用原料。,可用一些农副产品代替化学药品,常用的有马铃薯、麦芽,玉米面、麦麸等。,在食用菌制种中,原种和栽培种因原料用量较大,选择合适的代用原料,其经济意义就更大。,过去多用麦粒和玉米,现在可用锯木屑和棉籽壳等来代替。但是选用代用料时,必须就地取材,来源丰富、价格便宜的原则,而且原料没有毒性。,39,一、菌种的制作,4、菌种培养基的制备,(2)培养基的类型,培养基的类型,营养来源,物理状态,表面形式,用途,天然培养基,合成培养基,半合成培养基,固体培养基,液体培养基,半固体培养基,斜面培养基,平面培养基,高层培养基,母种培养基,原种培养基,栽培种培养基,40,一、菌种的制作,4、菌种培养
17、基的制备,(2)培养基的类型,营养来源,天然培养基,天然的有机物质配制而成。如农副产品麦麸,米糠,豆饼及许多农作物秸秆等,也有动植物浸出液,如牛肉膏、麦芽汁、豆芽汁及马铃薯汁等。,培养基的优点是营养丰富、经济方便,但它的化学成分不能定量,每批成分也不稳定,不宜用作精确的实验。常用的天然培养基有马铃薯培养基、麦芽汁培养基等。,41,一、菌种的制作,4、菌种培养基的制备,(2)培养基的类型,营养来源,合成培养基,用已知成分的化学药品配制而成。,培养基的优点:是各种成分简单而清楚,容易控制,适于进行某些定性、定量测定。,常用的合成培养基有(高氏一号培养基)、察氏培养基等。,42,一、菌种的制作,4、
18、菌种培养基的制备,(2)培养基的类型,营养来源,半合成培养基,在天然培养基中适当添加一些无机盐类,或者在合成培养基中添加少数天然有机物质配制而成。,培养基的优点:是营养全面丰富、宜于控制。常用的有综合马铃薯培养基等。,43,一、菌种的制作,4、菌种培养基的制备,(2)培养基的类型,物理状态,液体培养基,培养基呈液体状态。它含有食用菌菌丝生长发育所需要的各种营养物质。,食用菌孢子或菌丝在这种培养基中能够更好地接触和吸收养料,因而菌丝体生长迅速而粗壮,同时这种液体菌种便于接种工作的机械化、自动化,有利于提高生产效率。,缺点是要发酵设备,成本较高,也较复杂。液体培养基常用来观察菌种的培养特征以及检查
19、菌种的污染情况。,44,一、菌种的制作,4、菌种培养基的制备,(2)培养基的类型,物理状态,固体培养基,在液体培养基中加入凝固剂即成为固体培养基。常用的凝固剂是琼脂。,根据季节和用途的不同,凝固剂的添加量一般在182之间。固体培养基可制成试管斜面,也可制成平皿平面(平板),试管斜面用来培养和保存菌种,平皿平面可用来分离和纯化菌种。,除了加凝固剂的固体培养基外,天然的固体基质做成的培养基也称固体培养基。在菌种制作中,用麦粒、玉米粒、木屑、棉籽壳、甘蔗渣等农副产品制成的培养基也属固体培养基。,45,一、菌种的制作,4、菌种培养基的制备,(2)培养基的类型,物理状态,半固体培养基,在1000毫升液体
20、培养基中,将加入的琼脂量减少为810克,即成为半固体培养基。它主要用来培养一些特殊菌类。,46,一、菌种的制作,4、菌种培养基的制备,(2)培养基的类型,培养基的表面形状,斜面培养基,将琼脂培养基装入试管灭菌后,乘热放置成斜面,凝固后即成。它用于菌种扩大转管及菌种的保藏。,平面培养基,高层培养基,将琼脂培养基装入三角瓶中灭菌后,冷至50左右,乘热倒入灭菌平皿(或不倒入平皿)凝固后即成。它用于菌种分离和研究菌类的某些特征。,将琼脂培养基装入试管内灭菌后,不摆成斜面,即成高层培养基。接入高层培养基的菌种,发育的面积虽然小,但这种培养基厚度大,营养丰富,存放时间长,也不易干燥开裂。常用于保存菌种。,
21、47,一、菌种的制作,4、菌种培养基的制备,(2)培养基的类型,培养基的用途,母种培养基,也称一级培养基。它是分离母种或试管种扩大繁殖用的培养基。因母种培养基装在试管内,并摆成斜面,因此也叫斜面培养基。,原种培养基,栽培种培养基,也称二级培养基通常装在罐头瓶或者750毫升容积的菌种瓶内,也可装在1000毫升容积的白色聚丙烯塑料瓶内。,也称三级培养基,它是供食用菌栽培用的菌种培养基。通常装在罐头瓶或750毫升容积的菌种瓶内,也可装在17X 33厘米或l7X28厘米大小的聚丙烯塑料袋内。,48,一、菌种的制作,5、菌种培养基的制备,母种(一级种)培养基的配制,种菇或种木的选择和处理,孢子、组织、种
22、木分离,马铃薯、琼脂、葡萄糖等原料,装入试管的培养基,排成斜面的培养基,母 种,接种,配制,灭菌,培养,49,一、菌种的制作,5、菌种培养基的制备,(1)母种(一级种)培养基的配制,母种培养基种类很多,常用的有以下几种:,马铃薯、葡萄糖、琼脂培养基(PDA培养基)马铃薯(去皮)200克,葡萄糖20克,琼脂1820克,水1000毫升。,马铃薯、蔗糖、琼脂培养基(PSA培养基)马铃薯(去皮)200克,蔗糖20克,琼脂1820克,水1000毫升。,蛋白胨、葡萄糖、琼脂培养基 蛋白胨2克,葡萄糖20克,磷酸氢二钾1克,磷酸二氢钾05克,维生素B1005毫克,硫酸镁05克,琼脂18-20克,水1000毫
23、升。,50,一、菌种的制作,5、菌种培养基的制备,(2)母种(一级种)培养基的配制方法,工艺流程,计算 配方各物用量,按比例称量各物质,配制,调pH,分装试管,塞棉塞,灭菌及摆斜面,无菌检查,51,一、菌种的制作,5、菌种培养基的制备,(2)母种(一级种)培养基的配制方法,工 艺 流 程,52,一、菌种的制作,5、菌种培养基的制备,(2)母种(一级种)培养基的配制方法,首先要选择合适的浸煮容器,一般选用铝锅、搪瓷缸或玻璃烧杯等,而不能用铜,铁器皿,以免铜锈或铁锈混进培养基中。,母种培养基的制作,按以下顺序操作,计算 先选好培养基配方,按照培养基需要的数量计算各种成分的用量,然后称量。,53,一
24、、菌种的制作,5、菌种培养基的制备,(2)母种(一级种)培养基的配制方法,称量 用架盘天平称取培养基各种成分的用量,对一些不易称量的成分,需采用特殊方式称量,如牛肉膏比较粘稠,可先称好一根玻棒和烧杯,再用玻棒取牛肉膏放在烧杯中一起称。微量元素与生长因子等,需要量很少,难以称准,可先配成较浓的原液,再从中取出需要的量。,配制 为避免发生沉淀,加入的顺序一般是先加缓冲化合物,溶解后加入主要元素,然后是微量元素,再加入维生素等。最好是每种成分溶解后,再加入第二种营养成分。若各种成分均不发生沉淀,也可以一起加入。,54,一、菌种的制作,5、菌种培养基的制备,(2)母种(一级种)培养基的配制方法,配制,
25、若用马铃薯、玉米粉、苹果、米粉、木屑等原料时,应先制取这些原料的煮汁,然后再把煮汁与其它成分混合,以马铃薯葡糖琼脂培养基为例,说明其配制方法。,把选好的马铃薯洗净,去皮挖去芽眼,切成薄片或1厘米大小的方块,称取200克放在容器中,加水1000毫升,加热煮沸2030分钟,至软而不烂的程度,用四层纱布过滤;取其滤液。,55,一、菌种的制作,5、菌种培养基的制备,(2)母种(一级种)培养基的配制方法,配制,在滤液中加入琼脂,小火加热,用玻璃棒不断搅拌,以防溢出或焦底,至琼脂全部溶化,再加入葡萄糖和其它营养物质使其溶化,最后加水至1000毫升即成。,调pH 一般用10盐酸(HCl)或10氢氧化钠(Na
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