抗核抗体ANA检测与临床应用课件.ppt
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1、抗核抗体ANA检测与临床应用_幻灯片,抗核抗体ANA检测与临床应用_幻灯片抗核抗体ANA检测与临床应用_幻灯片抗核抗体(ANA)检测与临床应用,抗核抗体ANA检测与临床应用_幻灯片抗核抗体ANA检测与临,抗核抗体(ANA)检测与临床应用,抗核抗体(ANA),ANA的靶抗原分布:,细胞核,整个细胞,包括细胞核、细胞浆、细胞骨架、细胞分裂周期蛋白等。ENA:抗可提取核抗原,包括RNP/Sm,Sm,SS-A,SS-B,Scl-70和Jo-1等六种靶抗原,抗核抗体的定义传统定义:针对细胞核成分的自身抗体的总称。广义定义:针对细胞内所有抗原成分的自身抗体的总称。对ANA的理解不再局限于核成分,而是指核酸
2、和核蛋白抗体的总称,ANA的靶抗原分布:细胞核整个细胞,包括细胞核、细胞浆、细胞,ANA可见于多种疾病,特别是结缔组织疾病,常作为结缔组织病的诊断、,病情判断和疗效观察的指标,高滴度ANA则高度提示自身免疫性疾病,在非结缔组织病中也可出现阳性;正常人中(特别是老年人)也可出现阳,性,但滴度低,目前,ANA检测已成为临床上的一个极重要的自身免疫病的筛查实验。,ANA检测的临床意义,ANA可见于多种疾病,特别是结缔组织疾病,常作为结缔,ANA检测的临床意义系统性红斑狼疮,活动期非活动期药物诱导的红斑狼疮混合性结缔组织病(MCTD、Sharp综合征)类风湿性关节炎进行性系统性硬化症多发性肌炎及皮肌炎
3、干燥综合征慢性活动性肝炎溃疡性结肠炎其它风湿病正常人,9510080100100100204020508595305070803040265-10,ANA检测的临床意义活动期95100,美国风湿学会(ACR)立场声明,HEp-2 细胞包含大约100 至150 种自身抗原 其它初筛方法仅具有少量自身抗原,大约 35%SLE患者和IFT-ANA阳性患者在其它初筛实验中为阴性结果,建议:,IIFT-ANA仍然为ANA检测的金标准,医院或商业诊断所应用其它ANA检测方法时,必须要求为临床大夫提供足够的数据证明其它ANA检测方法与IFT比较具有同样或更高的敏感度和特异性 实验室在ANA报告当中必须注明A
4、NA检测方法,美国风湿学会(ACR)立场声明 HEp-2 细胞包含大约1,EUROIMMUN,ANA筛查:,间接免疫荧光法(IFT),抗原谱完整(细胞核、细胞浆),检测ANA的金标准,具有很高的敏感性和特异性 基质组合:HEp-2细胞+灵长类肝,EUROIMMUNANA筛查:间接免疫荧光法(IFT)抗,HEp-2细胞:筛查不同的自身抗体,均质型核膜型,核点型核糖体P蛋白,着丝点型AMA,核仁型高尔基体,Scl-70溶酶体,Sm/RNP肌动蛋白,SS-A/SS-B波形蛋白,HEp-2细胞:筛查不同的自身抗体均质型核点型着丝点型,系统性红斑狼疮(SLE),ANCA 相关性血管炎,慢性炎症性结缔组织
5、病(CICTD)干燥综合征(SS),Systemischer LupusErythematodes(SLE)dsDNA系统性硬化症(SSc)Scl-70 and CenpB,SS-A and SS-B慢性炎症性结缔组织病(CICTD)多肌炎/皮肌炎(PM/DM)Myositis Profile,夏普综合征(MCTD)RNPRheumatoideArthritis(RA)EUROIMMUN,系统性红斑狼疮(SLE)ANCA 相关性血管炎慢性炎症性结,系统性红斑狼疮(SLE),红斑狼疮的特点,临床医生:容易误诊的一类致死性疾病,免疫学家:所有免疫系统的要件均参与致病机理产生过程,临床发病特点,发病
6、率:40/100,000(北欧);200/100,000(黑人);250,000(美国),患者寿命:4年/50%(1950);15/80%(当前);20岁诊断/35岁死亡几率1:6,系统性红斑狼疮(SLE)红斑狼疮的特点临床医生:,以上受累;96%),EUROIMMUN,SLE 各器官的表现,关节炎(至少2个关节,血液系统受累(贫血等;60%),狼疮肾炎(51%),浆膜炎(胸膜炎,心包炎;77%),神经系统受累(30%)皮肤(蝴蝶状皮疹,盘状狼疮;74%),以上受累;96%)EUROIMMUNSLE 各器官的表现,系统性红斑狼疮(SLE)代表性的抗体,抗 dsDNA 抗体抗核小体抗体抗 Sm
7、抗体抗核糖体 P 蛋白抗体,30-90%50-95%5-10%5-15%EUROIMMUN,系统性红斑狼疮(SLE)抗 dsDNA 抗体30-90%,EUROIMMUN,核均质型HEp-2细胞/猴肝,HEp-2细胞,猴肝,EUROIMMUN核均质型HEp-2细胞猴肝,抗dsDNA 抗体-检测方法:IIFT,Farr-法(RIA),ELISA or BlotIIFT dsDNA,HEp-2细胞,绿蝇短膜虫,抗dsDNA 抗体HEp-2细胞绿蝇短膜虫,高度特异性抗体;,70%患者阳性,0.5%正常人或RA患者阳性,滴度与疾病活动性相关,但不适用于所有患者,抗体滴度上升但临床症状不明显的患者,抗体检
8、测后5年内,80%患者进入活动期,抗dsDNA抗体与SLE,高度特异性抗体;70%患者阳性,0.5%正常,最新版“Autoantibodies”描述,不同实验方法的结果并无可比性:,1、抗原来源不同;,2、抗原展现形式不同;,3、实验体系反应条件不同。,最新版“Autoantibodies”描述不同实验方法的结,核均质:,抗核小体抗体(ANuA),靶抗原:,dsDNA-组蛋白-复合物的构象决定簇,方法:,IIFA,ELISA,Blot,临床意义:,SLE,阳性率 50-95%(特异性100%),核均质:抗核小体抗体(ANuA)靶抗原:dsDNA-组蛋白-,EUROIMMUN,抗核小体 ELIS
9、A:敏感性、特异性、疾病活动度,ANuA 与疾病的活动性相关性强(SLE DAI score),分组SLE干燥综合症皮肌炎/多肌炎系统性硬化症类风湿/骨关节炎强直性脊柱炎健康对照组特异性,n233414033602031225,抗核小体阳性144(61.8%)1(2.4%)1(2.5%)1(3.0%)1(1.7%)0098.2%,Su et al.,Clin Immunol 122:115-120,2007,EUROIMMUN抗核小体 ELISA:ANuA 与疾,LNTP(%),LN(%),CON(%),ANuAAnti-dsDNA,7943,1841,933,LNTP=lupus nephr
10、itis requiring renal transplantation(狼疮肾炎需要肾移植)LN=biopsy proven lupus nephritis(肾活检确诊为狼疮肾炎)CON=SLE patients without nephritis(无肾炎SLE患者),伴有狼疮肾炎的严重SLE的生物标记物,ANuA 与狼疮性肾炎Stinton et al.,Lupus 15:394-400,2007 狼疮肾炎是SLE的一种潜在的严重并发症(高达 50%)1.2%需要进行肾移植的患者有狼疮肾炎,LNTPLNCONANuA79189LNTP=lu,EUROIMMUN,抗U1-nRNP与Sm抗体,
11、HEp-2细胞,猴肝,EUROIMMUN抗U1-nRNP与Sm抗体HEp-2细胞猴,HEp-2细胞,抗U1-nRNP与Sm抗体抗U1-nRNP/Sm抗体抗Sm抗体SLE抗U1-nRNP抗体SLESharp综合征,(MCTD)EUROIMMUN,HEp-2细胞抗U1-nRNP与Sm抗体(MCTD),抗U1-nRNP与Sm抗体,SLE:15-40%MCTD:95-100%SLE:5-30%EUROIMMUN,抗U1-RNP抗体抗Sm抗体Function:Pre-mRNA splicing,抗U1-nRNP与Sm抗体SLE:15-40%抗,EUROLINE,ANA 谱,最多18种抗原,增加了RNP亚
12、单位,自动化 操作,全自动化 结果判读,EUROLINEANA 谱 最多18种抗原,自,EUROIMMUN,实验结果的解释(ANA谱):抗U1-nRNP/Sm和Sm抗体,抗 nRNP/Sm抗体,抗 Sm 抗体,结果,解释,-?+,-+-,-+-+,U1-nRNP:Sm:-U1-nRNP:Sm:+U1-nRNP:Sm:-结果不可靠,阴性SLESLE 或 MCTD无,EUROIMMUN实验结果的解释(ANA谱):抗 nRNP/,EUROIMMUN,抗核糖体P蛋白抗体,HEp-2细胞,猴肝,EUROIMMUN抗核糖体P蛋白抗体HEp-2细胞猴肝,40 S亚单位,60 S亚单位,P0,P2 P2,ac
13、cording to:Mahler et al.,J Mol Med,2003,抗原:,核糖体60S亚单位的3个蛋白:P0,P1,P2.在羧基末端有相同的免疫反应表位。核糖体P抗原的五聚体复合物。P1 P1,核糖体 P蛋白,40 S60 SP0P2 P2according t,核糖体 P 蛋白 ELISA:敏感性和特异性(1),群组SLE其他结缔组织病*健康献血员,n36079206,抗核糖体 P 蛋白阳性数34(9.4%)0%0%,*系统性硬化症,干燥综合症,皮肌炎/多肌炎 对 SLE 100%特异EUROIMMUN,核糖体 P 蛋白 ELISA:群组n抗核糖体 P 蛋白阳,核糖体 P 蛋白
14、 ELISA:敏感性和特异性(2),群组SLEMCTDSSSScRAHD特异性,n18521556689100310,抗核糖体P蛋白阳性数10(5.4%)00000100%EUROIMMUN,核糖体 P 蛋白 ELISA:群组n抗核糖体P蛋白阳,EUROIMMUN,HEp-2细胞,增殖型细胞核抗原(PCNA)Hep-2细胞,猴肝,EUROIMMUNHEp-2细胞增殖型细胞核抗原(PCNA,增殖型细胞核抗原(PCNA),靶抗原:,表达为细胞周期依赖性(S-期),三聚体(36 kDa),是 DNA 多聚酶的辅因子并参与 DNA 修复调控,检测:,IIFT,Blot,临床意义:,SLE高特异性(阳性
15、率 3-7%),与肾脏和CNS及血小板减少相关,增殖型细胞核抗原(PCNA)靶抗原:表达为细胞周期依赖性(,系统性红斑狼疮(SLE),ANCA 相关性血管炎,慢性炎症性结缔组织病(CICTD)干燥综合症(SS),Systemischer LupusErythematodes(SLE)dsDNA系统性硬化症(SSc)Scl-70 and CenpB,SS-A and SS-B慢性炎症性结缔组织病(CICTD)多肌炎/皮肌炎(PM/DM)Myositis Profile,夏普综合症(MCTD)RNPRheumatoideArthritis(RA)EUROIMMUN,系统性红斑狼疮(SLE)ANCA
16、 相关性血管炎慢性炎症性结,干燥综合征(Sjgrens Syndrome)外分泌腺受累的自身免疫疾病 症状:-口腔干燥-唾液及眼泪减少,-腮腺肿胀,口腔干燥,-胰腺外分泌腺分泌不足腮腺肿胀EUROIMMUN,干燥综合征(Sjgrens Syndrome)-腮,干燥综合征,SS-A(60 kDa)SS-B(47 kDa),40-95%40-95%,代表性抗体,干燥综合征SS-A(60 kDa)40-95%代表性抗体,EUROIMMUN,抗SS-A/SS-B抗体,HEp-2细胞,猴肝,EUROIMMUN抗SS-A/SS-B抗体HEp-2细胞猴肝,SS-A 抗原,Boire et al.,1995:
17、-Ro-52抗体不与SS-A 抗原结合,-纯化的 SS-A 抗原不包含 Ro-52,RNA+SS-A(60 kDa)+Ro-52hY-RNA,RNA+SS-A(60 kDa)hY-RNA,SS-A 抗原Boire et al.,1995:-,SS-A(Ro-60),Ro-52 and SS-B,干燥综合症:,40-95%,SLE:,20-60%,新生儿狼疮:,抗SS-B抗体,干燥综合症:SLE:新生儿狼疮:,40-95%10-20%78%,抗Ro-52(52 kDa)抗体非特异EUROIMMUN,功能:调控RNA翻译抗SS-A(60 kDa)抗体,功能:RNA聚合酶III辅助蛋白,96%X,S
18、S-A(Ro-60),Ro-52 and SS-B干燥,EUROIMMUN,抗Ro-52抗体:,不同组别中均可出现,EUROIMMUN抗Ro-52抗体:不同组别中均可出现,抗Ro-52抗体:风湿性疾病中的阳性率,疾病干燥综合症系统性硬化症肌炎SLEMCTDRA,n88812621021165,抗Ro-52抗体阳性81%28%31%38%19%5%,抗Ro-52抗体 在干燥综合症中阳性率较高,但没有疾病特异性Meyer,Schlumberger et al.,4th Asian Congress on Autoimmunity,Singapore,Sept.2009EUROIMMUN,抗Ro-5
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