分选型流式细胞仪课件.ppt
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1、FACSAria,分选型流式细胞仪,BD,公司生物科学部,FACSAria分选型流式细胞仪BD公司生物科学部,BD,公司流式细胞仪,FACSCalibur,FACSAriaII,Influx,FACSJazz,LSRII,FACSCantoII,LSRFortessa,FACSVerse,Accuri C6,BD公司流式细胞仪FACSCaliburFACSAriaII,BD FACSAriaII,分选型流式细胞仪,?,?,2008,年最新产品,集多种专利技术和完美设计,BD FACSAriaII分选型流式细胞仪?2008年最,基本概念,?,流式细胞术,(Flow Cytometry,简称,FC
2、M),是一种快速、准,确、客观的同时检测直线流动状态中单个颗粒多项物理,及生物学特性,加以分析定量的技术,并可以对特定群,体加以分选。,?,研究对象为生物颗粒,如各种细胞、染色体、微生物及,人工合成微球等。,?,流式细胞仪,(Flow Cytometer),集激光技术、电子物理技,术、光电测量技术、电子计算机技术、细胞荧光化学技,术、单克隆抗体技术为一体的一种新型高科技仪器。,基本概念?流式细胞术(Flow Cytometry,简称FC,流式细胞仪组成,?,液流系统,?,光学系统,?,电子系统,?,数据储存与分析系统,?,分选系统,流式细胞仪组成?液流系统?光学系统?电子系统?数据储存与分析,
3、液流系统,液流系统,样品流速的选择,?,低流速:一般用于分辨率较高的分析,如,DNA,分析,?,高流速:一般用于定性分析,如免疫分型。采集速度快,影响,分型。,样品流速的选择?低流速:一般用于分辨率较高的分析,如DNA分,光学系统,光信号,FSC detector,q,e,r,F,Fluorescence,SSC and Fluorescence detector,(PMT3, PMT4 etc.),光学系统光信号FSC detectorqerFFluores,前向角散射光信号,11,前向角散射光信号11,侧向角散射光信号,侧向角散射光信号,荧光信号,荧光信号,分选型流式细胞仪,Wavelen
4、gths,LONG,(700nm),Short Pass,Long Pass,Band Pass,Pass Through,Filters,SHORT,(500nm),650 Short Pass,(600SP),650 nm,650 nm,550 Long Pass,(650LP),550 nm,550 nm,600/100 Band Pass,(600/100),550 - 650 nm,(600?0),650 nm,Transmitted,Blocked,LONG,(700nm),Dichroic,Filters,SHORT,(500nm),650 Short Pass,(600SP),
5、650 nm,650 nm,550 Long Pass,(650LP),550 nm,550 nm,Transmitted,Diflected 90?,Wavelengths LONG (700nm)Short,Fluorochromes,Overview,FluorochromesOverview,1,1,2,2,3,3,分选型流式细胞仪,分选型流式细胞仪,电子系统,?,光电转换器:将光信号转换成电信号,光电二极管,光电倍增管(,PMT,),?,放大器两种放大方式:,线性放大(,lin,),对数放大(,log,),电子系统?光电转换器:将光信号转换成电信号光电二极管光电倍增,分选型流式细胞仪
6、,对数放大:按光强度的对数关系输出信号。用于大多数,荧光染色实验。,对数放大:按光强度的对数关系输出信号。用于大多数荧光染色实验,电脉冲信号类型:,高度信号,H,宽度信号,W,面积信号,A,脉冲面积,度,高,冲,脉,0,脉冲,宽度,时间,(,秒,),电,压,电脉冲信号类型:高度信号H宽度信号W面积信号A脉冲面积度高冲,细胞周期中粘联体区分,细胞周期中粘联体区分,阈值,用于屏蔽噪音信号和碎片信号,只有高于等于阀值道数的,信号才会被送入计算机进行处理。,Area,H,e,i,g,h,t,Threshold,阈值用于屏蔽噪音信号和碎片信号,只有高于等于阀值道数的信号才,模拟数字转换器,模拟数字转换器
7、,数据储存与分析系统,数据储存,List-Mode Data,Time,FSC,SSC,FITC,PE,39,271,Event 1,0,60,120,39,271,89,675,Event 2,Event 3,10,30,160,650,65,FITC/PE,双染样本,39,271,30,621,6,189,May be exported as FCS file,160,22,688,89,F,I,T,C,-,A,675,PE-A,30,621,F,I,T,C,-,A,PE-A,数据储存与分析系统数据储存List-Mode DataTim,数据显示,?,直方图(,Histogram,),?,
8、二维点图(,Dot Plot,),?,等高线图(,Contour Plot,),?,密度图(,Density,),?,三维图(,3D Plot,)等,数据显示?直方图(Histogram)?二维点图(Dot P,?,直方图:显示单一参数(横坐标)与通道细胞个数(纵坐标),。一条竖线代表一个细胞信号,多竖线累加形成峰图,一个峰,即一类细胞。,?,二维点图:一个点代表一个细胞信号。,?,等高线图:可显示数据信号的疏密程度。,?,密度图:可显示信号分布的疏密程度。,?,三维图(,3D Plot,)等,?直方图:显示单一参数(横坐标)与通道细胞个数(纵坐标)。一,分选系统,Aria II,的喷嘴位于检
9、测点,的下方,因此更换喷嘴后,无需重新调整激光光路,1,检测,2,充电,3,偏转,4,收集,分选系统Aria II的喷嘴位于检测点的下方,因此更换喷嘴后,流式细胞仪分选要素,?,分析结果精准:需要高灵敏度和分辨率,-,石英杯流动池,?,分选细胞纯度:需要对目标细胞的准确定位,-,Accudrop,和,Sweetspot,技,术,?,分选速度:保证纯度前提下高度分选,-,分选速度,70 ,000,个细胞,/,秒,?,分选后活性:需要整个系统各环节对细胞的保护,-,石英杯流动池,自动,无菌管路清洗,温控,?,仪器性能状态稳定性:质控程序的监控和调整,-,CS&T,仪器质控程序及仪,器状态监控,流式
10、细胞仪分选要素?分析结果精准:需要高灵敏度和分辨率-石英,高灵敏度,-,弱表达样本检测,Dim,staining,PE,population,visible,Dim staining,高灵敏度-弱表达样本检测Dim staining PE po,高灵敏度,稀有样本检测,待测细胞细胞群的比例,并不总是这么高,有时,很低,十万分之一,此时,灵敏度和分辨率至关重要,高灵敏度稀有样本检测待测细胞细胞群的比例并不总是这么高有,传统透射光路,?,采用长通,/,短通滤光片,?,光信号经过一次透射,信号损失,15-20%,?,多色分析时,荧光检测灵敏度降低,传统透射光路?采用长通/短通滤光片?光信号经过一次透
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- 关 键 词:
- 选型 细胞 课件
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