全国基层医疗机构抗菌药物合理应用培训项目常见病原真菌课件.ppt
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1、全国基层医疗机构抗菌药物合理应用,培训项目,全国基层医疗机构抗菌药物合理应用培训项目,常见病原真菌,李若瑜北京大学第一医院北京大学真菌和真菌病研究中心,常见病原真菌李若瑜,病原真菌鉴定的基本流程,临床标本,PDA, SDA28度培养,不能生长,鼻孢子菌、肺孢子菌、马拉色菌(厚皮除外),芽孢,关节孢子,念珠菌、隐球菌、红酵母等,毛孢子菌、地霉等,有隔菌丝,无隔菌丝,担子菌、子囊菌、半知菌,接合菌等,病原真菌鉴定的基本流程临床标本PDA, SDA不能生长鼻孢子,区分酵母样或霉样菌落,区分酵母样或霉样菌落,常见病原真菌,酵母及酵母样真菌_念珠菌_隐球菌_毛孢子菌_马拉色菌,霉菌(丝状真菌)_皮肤癣菌
2、_曲霉_毛霉_镰刀菌等,双相真菌,常见病原真菌酵母及酵母样真菌霉菌(丝状真菌)双相真菌,念 珠 菌 属,念 珠 菌 属,简介,念珠菌大约有150个种,65%以上不能在37生长,无致病性念珠菌属可以感染皮肤、粘膜及内脏器官引起念珠菌病常见的致病性念珠菌白念珠菌、热带念珠菌、近平滑念珠菌、光滑念珠菌、克柔念珠菌、季也蒙念珠菌、乳酒念珠菌临床最常见的是白念珠菌,简介念珠菌大约有150个种,65%以上不能在37生长,无致,生物学特性,念珠菌在环境中和人体内均可寄生存在 正常人皮肤、口腔、肠道、肛门、阴道中可分离出本菌 显微镜下表现为芽孢和假菌丝假菌丝一般与致病相关寄生时一般表现为孢子相,生物学特性 念
3、珠菌在环境中和人体内均可寄生存在,致病性,条件致病菌 白念珠菌致病力强 念珠菌毒素、菌体形态、黏附性和分泌水解酶与其致病性密切相关,致病性 条件致病菌,临床表现- 浅部念珠菌病,口腔念珠菌病念珠菌性女阴阴道炎念珠菌性龟头炎皮肤念珠菌病念珠菌性甲沟炎及甲床炎慢性粘膜皮肤念珠菌病念珠菌性角膜炎,临床表现- 浅部念珠菌病口腔念珠菌病,全国基层医疗机构抗菌药物合理应用培训项目常见病原真菌课件,临床表现-系统性念珠菌病,支气管、肺念珠菌病消化道念珠菌病泌尿道念珠菌病念珠菌败血症念珠菌性心内膜炎念珠菌性脑膜炎,临床表现-系统性念珠菌病支气管、肺念珠菌病,常见病原菌,白念珠菌(Candida albican
4、s)热带念珠菌(C.tropicalis)克柔念珠菌(C.krusei)近平滑念珠菌(C.parapsilosis)光滑念珠菌 (C.glabrata)乳酒念珠菌(C.kefyr)季也蒙念珠菌(C.guilliermondii),常见病原菌白念珠菌(Candida albicans),少见病原菌,链状念珠菌(C.catenulata)西弗念珠菌(C.ciferrii)海默郎尼念珠菌(C.haemulonii)解脂念珠菌(C.lipolytica)葡萄牙念珠菌(C.lusitaniae)挪威念珠菌(C.norvegensis)铁红念珠菌(C.pulcherrima)皱落念珠菌(C.rugosa)
5、产朊念珠菌(C.utilis)维丝念珠菌(C.viswanathii)涎沫念珠菌(C.zeylanoides)都柏林念珠菌 (C. dubliniensis,少见病原菌链状念珠菌(C.catenulata),组织病理学,组织病理学,实验室检查,直接镜检:可见卵园形发芽孢子及菌丝,如查到大量假菌丝,说明念珠菌处于致病状态。染色:革兰氏染色,菌丝、芽孢呈蓝色,着色不均匀。过碘酸染色,菌丝、芽孢染成红色。用1:1000吖啶橙染色,在荧光显微镜下,菌体呈现荧光。培养:最常用的培养基是沙堡氏培基,当菌落生长后再移种至米粉吐温80培基或其它鉴定培养基中,以便进一步鉴定菌种。,实验室检查直接镜检:可见卵园形
6、发芽孢子及菌丝,如查到大量假菌,念珠菌直接镜检(LPCB),假菌丝和芽孢,念珠菌直接镜检(LPCB)假菌丝和芽孢,致病性酵母菌鉴定原则,鉴定目的:确定感染及传染源;选择敏感抗真菌药物;哪些酵母菌需要鉴定到种:所有分离自无菌体液,包括脑脊液、血液、尿液、穿刺液及其它体液的酵母菌;分离自所有严重疾患或免疫受损病人或怀疑真菌感染的病人的酵母菌;从任何临床标本中分离出大量的酵母菌;分自若干连续取材的标本,除呼吸道分泌物,也应鉴定至种的水平;,致病性酵母菌鉴定原则鉴定目的:确定感染及传染源;选择敏感抗,芽管试验(Germ-tube test),原理:白念珠菌在有营养的液体环境中35培养,可从酵母细胞生出
7、芽管。结果:白念珠菌可在2h内生成芽管,热带念珠菌和其他念珠菌则否。,芽管试验(Germ-tube test)原理:白念珠菌在有营,厚膜孢子形成试验(Dalmo plate test),厚膜孢子形成试验(Dalmo plate test),念珠菌显色培养基CHROMagar Candida,念珠菌显色培养基CHROMagar Candida,API20C酵母鉴定系统,API20C酵母鉴定系统,ID32C 酵母鉴定系统,ID32C 酵母鉴定系统,其它快速同化试剂,其它快速同化试剂,VITEK全自动微生物鉴定仪,YBC酵母菌鉴定卡。有30个孔的一次性塑料卡,包括26个常规生化反应和4个阴性质控。利
8、用YBC,只有21.3%的酵母需做补充生化试验或形态学检查。,VITEK全自动微生物鉴定仪YBC酵母菌鉴定卡。,白念珠菌,菌落特征 沙氏培养基25中等速度生长,形成酵母样菌落,奶油样、光滑、闪光,老后有皱褶显色琼脂基上呈绿色菌落 显微镜特征 玉米粉吐温琼脂:真菌丝和假菌丝,多数假菌丝,假菌丝连接处产生多数呈簇状、葡萄状小分生孢子,顶端或侧支产生厚壁孢子血清芽管试验,在371-3小时后,可以产生芽管,白念珠菌 菌落特征,白念珠菌(Candida albicans),白念珠菌(Candida albicans),酵母菌鉴定程序和路线,酵母纯培养 玉米粉吐温琼脂培养基(25) 假菌丝(+) 假菌丝(
9、-) 厚壁孢子(+) 厚壁孢子(-) 尿素酶试验(+) 尿素酶试验(-) 白念珠菌 光滑念珠菌 关节孢子(+) 关节孢子(-) 酵母属 芽孢(+) 菌落无胡萝卜色 菌落呈胡萝卜色 芽孢(+) 芽孢(-) 念珠菌属 红酵母属 丝孢酵母属 地霉菌属 咖啡酸试验 有棕色色素 无棕色色素 新生隐球菌 隐球菌属,酵母菌鉴定程序和路线,血清学试验-菌种鉴定,抗原型别: 因子血清(CANDIDA CHECK):九种因子+蔗糖分解,鉴别7种致病性念珠菌; 因子血清(CRYPTO CHECK):八种因子,可鉴别8种隐球菌及变种,血清学试验-菌种鉴定抗原型别:,分子生物学方法,1.5hrs,3hrs,2.5hrs
10、,4.5hrs,5.5hrs,分子生物学方法C.glabrata, C.lusitania,小结酵母菌鉴定依据,传统菌落颜色、外观镜下细胞形态、大小有无荚膜有无假菌丝和菌丝芽管形成和厚膜孢子形成碳源同化、发酵氮源同化、发酵,现代 辅酶Q系统 同功酶 血清学 基因分型技术,小结酵母菌鉴定依据传统现代,敏感药物,两性霉素B唑类抗真菌药物棘白菌素类药物,敏感药物两性霉素B,隐 球 菌,隐 球 菌,隐球菌属(Cryptococcus)特点,本属的共同特征为细胞呈圆形或卵圆形,偶有伸长形或多样形,呈多边芽殖。大部分菌株有荚膜。所有菌种都能同化肌醇并在碳源中生长。糖发酵()在固体培养基中,大部分菌种呈粘液
11、状,无假菌丝或假菌丝发育不全。不产生子囊孢子。冬孢子或掷孢子。新生隐球菌有性期:属担子菌,新生线黑粉菌,隐球菌属(Cryptococcus)特点本属的共同特征为细,临床常见的隐球菌,Lodder1970年记载隐球菌:17种,6变种。主要致病菌种:新生隐球菌新生隐球菌新生变种新生隐球菌格替变种C.neoformans var. grubii浅黄隐球菌浅白隐球菌罗伦隐球菌,临床常见的隐球菌Lodder1970年记载隐球菌:17种,6,致病性隐球菌,新生隐球菌(C. neoformans)三个变种 新生隐球菌新生变种(C.neoformans var. neoformans)格特变种(C.neofo
12、rmans var.gatii)C.neoformans var. grubii,致病性隐球菌 新生隐球菌(C. neoformans),血清学分类,A、B、C、D及AD型新生变种-D型grubii变种-A型格特变种-B、C型,血清学分类 A、B、C、D及AD型,致病性,呼吸道进入体内健康人具有免疫能力 易感因素AIDS、糖尿病、淋巴瘤、晚期肿瘤、SLE、器官移植,致病性 呼吸道进入体内,隐球菌病cryptococcosis,是由隐球菌属中某些种或变种引起的一种深部真菌病。 主要侵犯中枢神经系统, 预后严重, 死亡率高, 也可侵犯肺部、皮肤、骨骼等其它脏器。近年来免疫力降低的病人逐年增多, 本
13、病发病率也呈上升趋势, 特别是在爱滋病病人已成为死亡的主要原因之一。,隐球菌病cryptococcosis是由隐球菌属中某些种或变,常见临床类型,中枢神经系统隐球菌病1. 脑膜炎型 2. 急性脑膜炎型3. 脑炎型 4. 肉芽肿型 肺隐球菌病 皮肤粘膜隐球菌病 骨隐球菌病 隐球菌败血症,常见临床类型中枢神经系统隐球菌病,全国基层医疗机构抗菌药物合理应用培训项目常见病原真菌课件,生物学性状,在SDA培养基上25培养2-5天,可以见到奶油色酵母样菌落,有时黄色或带粉色显微镜下可见到球形或椭圆形酵母细胞,直径2-5m,第一代培养物有时可见小的荚膜,继代培养不见荚膜脑脊液直接涂片,细胞有较宽的荚膜。显微
14、镜下有时可见到出芽现象,生物学性状 在SDA培养基上25培养2-5天,可以见到奶油,实验室检查-病原学检查,直接镜检: 墨汁染色,新生隐球菌呈圆形或椭圆形的双层厚壁孢子, 外有一层宽阔荚膜, 边缘清楚完整, 菌体内可见出芽(菌体计数:判断预后及疗效的指标)培养:培养基内可加氯霉素, 但不可加放线菌酮, 因后者抑制本菌生长。生理生化测定:采用自动微生物系统和API鉴定组织病理学检查及免疫组化,实验室检查-病原学检查直接镜检: 墨汁染色,新生隐球菌呈圆形,直接镜检,脑脊液直接墨汁涂片,直接镜检 脑脊液直接墨汁涂片,真菌培养,SDA培养基,25培养,真菌培养 SDA培养基,25培养,组织病理学,HE
15、 PAS 阿申兰,粘蛋白卡红 免疫组化,组织病理学HE PAS 阿申兰粘蛋白卡红,实验室检查-其它检查方法,脑脊液检查: 中枢神经系统隐球菌病脑脊液压力增高, 外观正常或微混, 白细胞数增多, 早期以中性粒细胞为主, 中后期以淋巴细胞为主。糖和氯化物在早期变化不明显, 中后期可明显减少。蛋白含量在中后期增高。抗原检查: 乳胶凝集试验检测脑脊液及其它体液标本中新生隐球菌荚膜多糖抗原可简便快速有效诊断隐球菌性脑膜炎,实验室检查-其它检查方法脑脊液检查: 中枢神经系统隐球菌病,乳胶凝集试验,阴性,阳性,乳胶凝集试验 阴性阳性,新生隐球菌(Cryptococcus neoformans),主要侵犯中枢
16、神经系统,也可侵及肺、骨、皮肤,甚至引起败血症。肺是新生隐球菌侵入的主要途径,肺隐球菌病也是隐球菌病的最早表现。该菌的特异性检查为,墨汁涂片,镜下可见圆形或卵圆形厚壁孢子,直径2.5-20um,单芽,也可多芽。菌体外围有一圈透光的荚膜,厚度几乎与菌体相等甚至大于菌体。孢子内有反光颗粒。尿素酶试验阳性。,新生隐球菌(Cryptococcus neoforman,新生隐球菌(Cryptococcus neoformans),直接镜检(墨汁染色),咖啡酸琼脂产生棕色菌落,新生隐球菌(Cryptococcus neoforman,敏感药物,两性霉素B氟康唑5-氟胞嘧啶,敏感药物两性霉素B,毛孢子菌,毛
17、孢子菌,毛孢子菌属(Trichosporon),过去属于半知菌,又称丝孢酵母,现已归于担子菌,是致病性酵母中重要的一属可致皮肤感染、肺炎等浅表和深在感染最近阿萨希毛孢子菌所致的播散性感染有增多趋势,毛孢子菌属(Trichosporon)过去属于半知菌,又称,与人类过敏或感染相关的种,* 阿萨希毛孢子菌(T.asahii)* 星状毛孢子菌(T.asteroids)* 皮瘤毛孢子菌(T.inkin)* 皮毛孢子菌(T.cutaneum)* 粘液毛孢子菌(T.mucoides)* 倒卵形毛孢子菌(T.ovoides),与人类过敏或感染相关的种,毛孢子菌生物学特性,酵母样菌落丰富的关节孢子。有或无芽生
18、孢子。可有鹿角菌丝(Appressoria)缺乏发酵碳水化合物的能力,可同化多种碳原不能利用硝酸盐,尿素酶阳性,毛孢子菌生物学特性酵母样菌落,鉴定方法,形态学温度试验37 C放线菌酮抑制试验生理学API 20C、ID32C序列测定rDNA基因内转录间区(ITS1区以及2区),鉴定方法形态学,形态学观察,阿萨希毛孢子菌,皮肤毛孢子菌,皮瘤毛孢子菌,皮炎毛孢子菌菌落外观形态比较相似,呈圆形,表面粗糙,有的呈脑回状小培养镜下可见关节孢子以及芽生孢子,皮瘤毛孢子菌还可见到鹿角菌丝;,形态学观察阿萨希毛孢子菌,皮肤毛孢子菌,皮瘤毛孢子菌,皮炎毛,阿萨希毛孢子菌 (T.asahii),深部感染最常见的毛孢
19、子菌,35生长7天后,阿萨希毛孢子菌 (T.asahii)深部感染最常见的毛孢子菌,菌落及显微镜下特征,阿萨希毛孢子菌 :菌落:SDA上生长速度中等,表面干燥,可见泡状突起,似乎有白色、粉状的覆盖物,边缘有宽而深的裂隙。镜下:芽生孢子,无侧生分生孢子,关节孢子呈桶形,玻片培养可见附着孢 。,菌落及显微镜下特征阿萨希毛孢子菌 :,皮毛孢子菌(T. cutaneum ),28生长7天后,该菌在35不能生长,皮毛孢子菌(T. cutaneum )28生长7天后,该菌,菌落及显微镜下特征,皮毛孢子菌 :菌落:SDA上中等速度生长,圆形,脑回状,闪光,表面无粉状物。边缘有裂隙 。镜下:芽生孢子很多,反复
20、接种,菌丝增多。 关节孢子柱状至椭圆形 。,菌落及显微镜下特征皮毛孢子菌 :,皮瘤毛孢子菌 (T.inkin),35生长7天后,皮瘤毛孢子菌 (T.inkin)35生长7天后,菌落及显微镜下特征,皮瘤毛孢子菌 :菌落:SDA上菌落白色,粉状,圆形,细小脑回状,在培养过程中常常使培养基裂开。镜下:无芽生孢子及侧生孢子,关节孢子长圆柱状,玻片培养可见附着孢,在高糖的培养基中可见多个分生孢子,成八叠球样。,菌落及显微镜下特征皮瘤毛孢子菌 :,温度试验,37C生长阿萨希毛孢子菌(T.asahii )、皮瘤毛孢子菌(T.inkin )、粘液毛孢子菌(T.mucoides) 37C不能生长皮肤毛孢子菌(
21、T.cutaneum ) 可变卵圆形毛孢子菌(T.ovoides),温度试验37C生长阿萨希毛孢子菌(T.asahii ),放线菌酮耐受试验,0.1%放线菌酮可耐受阿萨希毛孢子菌(T.asahii )、粘液毛孢子菌(T.mucoides) 、卵圆形毛孢子菌(T.ovoides)不能耐受皮肤毛孢子菌( T.cutaneum ) 可变皮瘤毛孢子菌(T.inkin ),放线菌酮耐受试验0.1%放线菌酮,应用API 20C AUX进行鉴定,试验菌株中的阿萨希毛孢子菌能准确鉴定到种,但其它毛孢子菌有时与此交叉,需要采用温度试验或测序方法进行再鉴定;,生理学试验,应用API 20C AUX进行鉴定,试验菌
22、株中的阿萨希毛孢子,耐药性及抗菌治疗建议,关于该菌属的抗真菌药物敏感性研究十分有限,结果也存在差异。 体外药物敏感试验证实该菌属大部分菌种对多烯类药物、三唑类药物如伊曲康唑敏感,棘白菌素类抗真菌药物对该菌属无效。 应用二性霉素B、氟康唑或是伊曲康唑治疗失败的事件时有报道,目前多主张联合应用上述药物,或是使用新型三唑类药物如伏立康唑等。,耐药性及抗菌治疗建议 关于该菌属的抗真菌药物敏感性研究十分有,马拉色菌属,马拉色菌属,分类,马拉色菌属主要有7个种:厚皮马拉色菌(M.pachydermatis)糠秕马拉色菌(M.furfur)球形马拉色菌(M.globosa)合轴马拉色菌(M.sympodia
23、lis)钝形马拉色菌(M.obtuse)限制马拉色菌(M.restricta)斯洛菲马拉色菌(M.sloofiae),分类马拉色菌属主要有7个种:,致病性,临床常可引起花斑癣马拉色菌毛囊炎深部感染如败血症,致病性临床常可引起花斑癣,生物学特性,培养条件该菌具有嗜脂性, 除厚皮马拉色菌可以在沙堡氏培养基上生长外,只在含有长链脂肪酸的培养基上生长。菌落在Dixon 培养基和改良花斑癣培养基上生长良好, 并且最佳生长温度为34或37。,生物学特性,镜 检,KOH或墨水涂片直接光镜下观察,马拉色菌属的孢子呈成群、厚壁、圆形或卵圆形,直径约38m,亦可见芽生孢子,为单极出芽,芽颈较宽;菌丝粗短、弯曲或弧
24、形,一端较钝。,镜 检,全国基层医疗机构抗菌药物合理应用培训项目常见病原真菌课件,马拉色菌菌种鉴定试验,沙堡培养试验吐温试验20、40、80过氧化氢酶试验形态学鉴定七叶苷分解试验聚乙二醇培养基,马拉色菌菌种鉴定试验沙堡培养试验,马拉色菌基本形态特征,球形马拉色菌,糠秕马拉色菌,吐温培养基,马拉色菌基本形态特征球形马拉色菌糠秕马拉色菌吐温培养基,马拉色菌,马拉色菌,七叶苷分解试验,各菌在七叶苷培养基上32培养3天合轴马拉色菌和钝形马拉色菌可使培养基完全变黑糠秕马拉色菌使培养基上部变黑球形马拉色菌、限制马拉色菌和斯洛菲马拉色菌不能使培养基变色。,七叶苷分解试验各菌在七叶苷培养基上32培养3天,全国
25、基层医疗机构抗菌药物合理应用培训项目常见病原真菌课件,耐药性,目前尚未发现明显耐药性报道。,耐药性目前尚未发现明显耐药性报道。,双相型真菌,Dimorphic fungi,双相型真菌Dimorphic fungi,双相型真菌,37 C 酵母相,27 C 菌丝相,双相型真菌37 C 酵母相27 C 菌丝相,定义,专指那些在组织内或37培养时呈酵母相,于室温中培养时则呈菌丝相的致病真菌包括申克孢子丝菌、马内菲青霉、荚膜组织胞浆菌、粗球孢子菌、巴西副球孢子菌和皮炎芽生菌等有较严格的地域分布(仅申克孢子丝菌此点不突出)对人体致病力较强(有较大的侵袭性),患者不一定在感染前有免疫受损,定义专指那些在组织
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