免疫标记技术培训课件.ppt

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1、免疫标记技术,免疫标记技术,简 介,免疫标记技术(immunolabeling technique)是指用荧光素、酶、放射性同位素等对抗体或抗原进行标记，然后再通过检测标记物来观察抗原抗体反应的实验技术。 优点：特异、敏度和快速； 可定性、定量和定位,2,免疫标记技术,简 介 免疫标记技术(immunolabeling,分 类,3,免疫标记技术,分 类免疫标记技术 放射免疫技术 免疫酶技术,放射免疫技术,放射免疫技术为一种将放射性同位素测量的高度灵敏性和抗原抗体反应的高度特异性相结合，在体外测定超微量物质的一项技术常用的放射性同位素有：125I、3H 、14C、35S、32P三种方法： 基于竞

2、争性结合反应的放射免疫分析(RIA) 非竞争性结合的免疫放射分析(IRMA) 放射受体分析技术（RRA）,4,免疫标记技术,放射免疫技术 放射免疫技术为一种将放射性同位素测,放射免疫技术,放射免疫技术具有灵敏度高、特异性强、精密度好的优点，常用于各种激素、微量蛋白质、肿瘤标志物和药物等微量物质的测定，但具有放射污染的缺点。,5,免疫标记技术,放射免疫技术放射免疫技术具有灵敏度高、特异性强、精密度好的优,免疫酶技术,免疫酶技术是将抗原抗体反应的特异性与酶的高效催化作用有机结合的一种方法。常用的酶： 辣根过氧化物酶(HRP)碱性磷酸酶(AP)特点： -灵敏度高、特异性强、准确性好、试剂稳定和简易安

3、全等优点。,6,免疫标记技术,免疫酶技术免疫酶技术是将抗原抗体反应的特异性与酶的高效催化作,分类,7,免疫标记技术,免疫酶技术 酶联免疫酶免疫组化技术 双抗体夹心法 双抗,免疫荧光技术,免疫荧光技术是用荧光标记的抗体或抗原与样品(细胞、组织或分离的物质等)中相应的抗原或抗体结合，以适当检测荧光的技术对其进行分析的方法常用于标记的荧光素有：异硫氰酸（FITC）、罗丹明（RB200）常用的方法有直接法和间接法两种,8,免疫标记技术,免疫荧光技术免疫荧光技术是用荧光标记的抗体或抗原与样品(细胞,直接荧光法：把荧光素标记的抗体与待检标本（细胞悬液、细胞涂片或组织切片）相互作用，洗去未结合荧光标记抗体，

4、在荧光显微镜下观察，有荧光的部分为阳性。,。,免疫荧光技术,9,免疫标记技术,直接荧光法：把荧光素标记的抗体与待检标本（细胞悬液,间接荧光法：将特异性抗体（一抗）和待检标本（细胞悬液、细胞涂片或组织切片）相互作用后加入荧光素标记的一抗的抗体（二抗）显示结果。,免疫荧光技术,10,免疫标记技术,间接荧光法：将特异性抗体（一抗）和待检标本（细胞悬液、细,实验一酶联免疫吸附技术,-双抗体夹心法测定甲胎蛋白（AFP),11,免疫标记技术,实验一酶联免疫吸附技术-双抗体夹心法测定甲胎蛋白（A,免疫标记技术培训课件,双抗体夹心法,【实验原理】,13,免疫标记技术,EE EE 双抗体夹心法【实验原理】13免

5、疫标记技术,ELISA基本的实验过程,包被：将已知抗原或抗体通过物理吸附到固相载体表面，使抗原或抗体固相化抗原抗体反应：先后加入被检标本和酶结合物，使之与固相抗原或抗体发生免疫反应而被结合固定酶促反应：在反应体系中加入酶作用的底物，使发生酶促反应而显色,14,免疫标记技术,ELISA基本的实验过程包被：将已知抗原或抗体通过物理吸附到,ELISA基本的实验过程,15,免疫标记技术,ELISA基本的实验过程15免疫标记技术,【实验器材】,1、AFP诊断试剂盒,2、AFP阳性对照品，阴性对照品，待检品,3、微量加样器、温箱,16,免疫标记技术,【实验器材】1、AFP诊断试剂盒2、AFP阳性对照品，阴

6、性对,【操作步骤】,将包被孔编号，分别加入阳性对照、待测样品及阴性对照各50ul在各孔内加入酶结合物1滴，37温育30分钟甩掉孔内液体，然后在各孔中分别加入洗涤液1滴，摇匀，弃去，用蒸馏水或自来水加满各孔甩掉，反复5次，然后在吸水纸上吸干（倒扣在吸水纸上）各孔内加入底物和显色液各1滴，轻轻摇动混匀，室温避光反应2-5min，观察结果,17,免疫标记技术,【操作步骤】将包被孔编号，分别加入阳性对照、待测样品及阴性对,【注意事项】,1、加样应加在加样孔的底部，避免产生气泡，防止产生假阴性2、洗涤必须彻底，防止产生假阳性,18,免疫标记技术,【注意事项】 1、加样应加在加样孔的底部，避免产生气泡，防

7、止,【实验结果】,若待检孔显色浅于或等于阴性对照孔则判定为若待检孔显色深于或等于阳性对照孔则判定为若待检孔显色介于阴性对照孔和阳性对照孔之间则判定为,阴性,阳性,弱阳性,19,免疫标记技术,【实验结果】若待检孔显色浅于或等于阴性对照孔则判定为阴性阳性,【临床意义】,1、原发性肝癌的大规模普查,2、可以用作检测胎儿畸形,、畸胎瘤,20,免疫标记技术,【临床意义】1、原发性肝癌的大规模普查2、可以用作检测胎儿畸,实验二免疫金标记技术,21,免疫标记技术,实验二免疫金标记技术21免疫标记技术,免疫金标记技术,免疫金标记技术(Immunogold labelling techique) 是将金颗粒标记

8、抗原或抗体，用于检测相应抗体或抗原的一种实验方法,22,免疫标记技术,免疫金标记技术 免疫金标记技术(Immunogold lab,免疫金标记技术,该技术主要利用了金颗粒具有高电子密度的特性，在金标蛋白结合处，在显微镜下可见黑褐色颗粒，当这些标记物在相应的配体处大量聚集时，肉眼可见红色或粉红色斑点，因而用于定性或半定量的快速免疫检测方法中,23,免疫标记技术,免疫金标记技术 该技术主要利用了金颗粒具有高电子密度的特性，,【实验原理】,胶体金标记的鼠抗人hCG抗体,抗人hCG抗体,抗鼠IgG抗体,hCG,妊娠诊断试纸,24,免疫标记技术,【实验原理】胶体金标记的鼠抗人hCG抗体抗人hCG抗,【实

9、验原理】,25,免疫标记技术,【实验原理】25免疫标记技术,【操作步骤】,1.待测样品、检测试纸和其它检测材料等恢复到室温后检测,2.将测试纸有箭头的一端插入尿液标本容器中，5秒钟后取出平放，5分钟内观察结果,注意：测试纸插入尿液深度不可超过MAX标志线,26,免疫标记技术,【操作步骤】1.待测样品、检测试纸和其它检测材料等恢复到室温,【实验结果】,阳性：,阴性：,无效：,27,免疫标记技术,【实验结果】阳性：阴性：无效：27免疫标记技术,思考题,1、免疫标记技术的特点是什么？2、在酶免疫标记技术中，最常用的酶是什么？,28,免疫标记技术,思考题1、免疫标记技术的特点是什么？28免疫标记技术,Thank You！,29,免疫标记技术,Thank You！ 29免疫标记技术,