HCV抗体检测方法与检测策略ppt课件.ppt

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1、HCV抗体检测方法与检测策略,亳州市疾病预防控制中心 单三毛,概述,结合丙型肝炎病毒实验室检测技术规范（试行）相关内容介绍丙型肝炎病毒抗体检测方法与检测策略丙型肝炎病毒抗体检测的实验室内质量控制,丙型肝炎病毒实验室检测技术规范（试行）抗体检测相关部分解读,丙型肝炎病毒实验室检测技术规范,5,丙型肝炎病毒实验室检测技术规范,规范共分9章，首次依据不同检测目的制定了不同的检测策略： 1疫情监测相关的检测策略 2临床诊断相关的检测策略 3血液筛查相关的检测策略,6,丙型肝炎病毒实验室检测技术规范,规范首次在临床诊断中规定了HCV抗体筛查阳性反应后必须进行补充实验（免疫印迹或NAT）。规范首次在丙肝临

2、床诊断中引入S/CO比值的使用。规范首次在血液筛查策略中规定了核酸检测（含pooling PCR）。规范首次明确丙肝检测实验室质量控制。,免疫诊断的特异性： NS3 core NS4 NS5,HCV免疫诊断抗原的策略,NS3+coreNS3+core+NS4NS3+core+NS4+NS5,HCV抗体检测方法,筛查试验补充试验：蛋白印迹试验,酶联免疫吸附试验化学发光试验胶体金法快速试验,化学发光免疫分析（CLIA）化学发光酶免疫分析（CLEIA）:HRP标记、ELEIA、ALP标记免疫渗滤试验免疫层析试验,检测模式的改进,雅培Axysm罗氏Elecsys,雅培Architect,10,增加了核

3、心区（C22-3）和NS3（ C33C）区抗原，检测的敏感性和特异性较第一代RIBA有所提高。,所用抗原由核心区的C22、NS3区的C33C、NS4区的5-1-1和C100及NS5抗原组成，较之第二代试剂增加了NS5。,1990年Chiron/Ortho公司联合研制了第一代RIBA试剂 ，两种HCV抗原即C100-3和5-1-1分别固定在硝酸纤维素膜上 。,第一代,第二代,第三代,HCV确证试剂的发展,Chiron RIBA HCV 3.0 SIA,Chiron RIBA HCV 3.0 SIA,高低两个水平的人lgG内部质控，必须清晰可见，且21。阳性对照条膜上虽有HCV带必须是2+或更强，

4、hSOD条带必须明显的比人lgG内部质控水平1浅（-or+/-）。阴性对照条膜必须能够见到每个HCV和hSOD条带，且比人lgG内部质控水平浅。,14,HCV Blot 3.0（MP）,GST质控带,HCV蛋白,确证试剂,包含HCV蛋白,血清质控带,血清转换期样本,注：1，2，3为阳性样本4为阴性样本,15,HCV BLOT 3.0(MP)结果分析,万泰HCV 抗体确证试剂,本试剂应用重组免疫印迹法原理，在硝酸纤维素膜条上预包被HCV合成抗原、重组抗原（Core，NS3，NS4，NS5）及对照线蛋白。将硝酸纤维素膜条浸泡在稀释的血清或血浆样品中反应后，加入酶标记的抗人IgG抗体温育，如样品中含

5、有HCV特异性抗体，则会形成“包被抗原-抗体-酶标二抗”复合物，加入底物液显色终止后，根据出现的不同条带情况判断结果。,Chiron,万泰,每条实验结果中，对照线-2必须出现，如果对照线-2不出现，则此条的检测结果无效。,万泰HCV 抗体确证试剂,丙型肝炎病毒,丙肝抗体假阴性问题,HCV窗口期,TRANSFUSION Volume 40, February 2000,丙型肝炎病毒抗体检测策略,HCV感染疫情报告的检测流程,HCV血液筛查的检测流程,HCV核酸定性检测用于血液筛查策略及结果报告,HCV临床诊断筛查的检测流程,HCV临床诊断补充试验检测流程（1）,HCV临床诊断补充试验检测流程（2

6、）,HCV核酸定性检测用于临床诊断策略及结果报告3,检测结果的解释,检测结果的解释,HCV检测试剂使用要求,必须使用经国家食品药品监督管理局注册批准的快速试剂详细信息可登录国家药品食品管理局网站（http:/ 试剂必须在有效期内使用。 推荐使用临床评估质量好的试剂中国疾病预防控制中心网站（http:/）。,2011年HCV抗体诊断试剂质量评估结果,HCV免疫学检测试剂,检测目的 检测方法 检测策略及 结果报告 检测的意义,HCV抗原检测,HCV抗原检测,检测目的HCV感染的早期诊断：窗口期，HCV（+）母亲所生的婴儿； 免疫受损或缺陷； 抗-HCV阳性患者的病毒血症分析； 以流行病监测为目的的

7、检测是为了解不同人群HCV感染率及其变化趋势。,HCV抗原检测的方法发展：一,HCV抗原检测原理示意图,检测策略及 结果报告,HCV抗原检测结果解释,a. HCV抗原检测阴性：HCV(-)HCV抗原初次检测（+），需双孔复检： 若均为（-）则报告为HCV（-）； 若双孔有一孔为（+），则报告为HCV（+）,HCV抗原检测的意义,丙型肝炎病毒抗原检测,丙型肝炎病毒抗原检测结果解释,HCV抗原检测试剂,质量保证体系循环,检测前,检测,检测后,实验数据及实验室的管理安全性客服,患者/客户准备采集样本,样品的接收与登记,样本的递送,质量控制,检验结果的保存,报告结果,对工作人员检测能力的资格评估,检测

8、,质控用材料的选择-校准品,用于对设备、试剂盒以及检测系统做出校准，以便于测定过程的标准化尽管这些物质不是真正的标准品，但有时也称其为标准品,质控用材料的选择-质控品,已知浓度的被分析物两或三个浓度 检测时加入到病例样本中用于验证检测体系的可靠性,质控用材料重要特征,其值应覆盖临床高、中、低值 与检测样本（基质）相似可大量获取小量分装贮存最好能至少持续使用1年通常为生物材料，应充分考虑到其生物危害性,对质控用材料的管理,需储备足量的同一批号的质控用材料或至少够一年使用可冻存、冻干或采用化学方法进行保存应保证其复原的准确性应按照生产商推荐的方法进行贮存,质控样本的来源,适宜的诊断用样本（患者样本

9、）来自下述途径：另一个实验室 PT/EQA 提供者市售产品,质控用材料的类型,定值相关数值由生产商提供实验室必须对其进行验证非定值相对较便宜需进行数据分析“自制产品” 或 “内部产品” 实验室自行采集的血清库予以标明小量分装保存，便于每日使用,Levey-Jennings 表 -对质控值进行记录和评价,平均值,天,+1SD,+2SD,+3SD,-1SD,-2SD,-3SD,Westgard 规则,“多规则质量控制方法” 联合使用判定标准或质控规则可对某种检测分析“是否”符合质控标准做出判断,Westgard 规则 (通常情况下适用于在一次检测中同时采用两个浓度的质控材料的情况),12S 规则1

10、3S规则22S规则,R4S规则41S规则10X规则,Westgard 12S 规则,“警告规则”两个浓度的质控材料中有一个浓度的结果在2SD以外对可能存在的问题提出警报不能构成拒绝检测的原因必须再以13S 规则对其进行评价,12S Rule = 一种能够引发对质控数据进行仔细核查的警报规则,平均值,天,+1SD,+2SD,+3SD,-1SD,-2SD,-3SD,不符合12S 规则,Westgard 13S 规则,如果两个质控数据中有任意一个落在3SD范围以外，则表示该次检测不符合Westgard规则应拒绝该次检测如果该检测没有破坏 13S规则，则应对其进行22S 规则评价,13S 规则 = 如

11、果任意一项质控数据超出+3SD 或-3SD的控制范围，则应拒绝该次检测,平均值,天,+1SD,+2SD,+3SD,-1SD,-2SD,-3SD,不符合13S 规则,Westgard 22S 规则,如果同浓度检测材料的两相邻值在同方向上超出2SD 范围，或同次检测的两个质控数值均超过 2SD 不得对该患者的检测结果出具报告应采取修正措施,22S 规则 = 如果连续的两次质控测量值在同方向上均超过+2SD 或 -2SD的限度范围，则应拒绝该次检测,平均值,天,+1SD,+2SD,+3SD,-1SD,-2SD,-3SD,不符合22S 规则,Westgard R4S 规则,一个质控数据超过平均值的2S

12、D，另一个质控数据超过平均值的+2SD 这两次结果的偏差范围将超过4 SD 产生随机误差，必须拒绝该次检测,R4S 规则 = 当一质控测量值超过+2SD 而另一质控值超过-2SD 的限度范围时，应拒绝该次检测,平均值,天,+1SD,+2SD,+3SD,-1SD,-2SD,-3SD,不符合R4S 规则,Westgard 41S 规则,需要提供以前检测的质控数据当某一浓度下有四次连续的质控数据超过1SD范围，或两个浓度下的质控数据均出现连续的检测结果超出1SD 范围的现象,Westgard 10X 规则,需要提供以往检测的质控资料某一浓度下有十次连续的质控检测结果在平均值的同一侧，或两个浓度下的质控数据均有五次连续的检测结果在平均值的同一侧,10 x 规则 = 当10次连续的质控检测结果在平均值的同一侧时应拒绝该次检测,平均值,天,+1SD,+2SD,+3SD,-1SD,-2SD,-3SD,不符合10 x 规则,质控规则,如果质控数据不符合质控规则，则应对其后的检测结果进行评价,当评价结果不符合某项规则时,警报规则 = 对质控数据点进行其他规则的审查拒绝规则 = “不符合质控标准”停止检测明确并修正问题对患者样本及质控材料重新进行检测 在问题得到解决，并且质控结果显示状况良好之前不得报告任何病例的检测结果,谢谢！,