年产6000吨木聚糖酶发酵车间的设计.docx
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1、年产6000吨木聚糖酶发酵车间的设计 作 者 姓 名 李斌 专 业 生物技术及应用 指导教师姓名 张大伟 目 录摘 要 1ABSTRACT 2 第一章 绪论 31.1木聚糖酶简介 31.1.1木聚糖酶的理化性质 31.1.2木聚糖酶的生产简史 41.1.3木聚糖酶用途 41.1.4木聚糖酶产业发展现状 51.2巴斯德毕赤酵母简介 61.2.1巴斯德毕赤酵母表达系统 61.2.2巴斯德毕赤酵母的优缺点 61.2.3前景展望 7 第二章 木聚糖酶发酵机理72.1重组巴斯德毕赤酵母发酵合成木聚糖酶的代谢途径 72.1.1甘油代谢途径 7 2.1.2甲醇代谢途径92.2巴斯德毕赤酵母发酵生产木聚糖酶过
2、程中的主要影响因素 112.2.1碳源的影响112.2.2氮源的影响112.2.3基础盐和PTM1微量盐的影响 112.2.4添加其它物质,降低蛋白酶降解122.2.5pH的影响122.2.6温度的影响122.2.7溶氧浓度(DO )的影响 132.2.8诱导前菌体密度( CWPT I )与比生长速率(PT I )的影响13 第三章 木聚糖酶发酵的工艺流程 133.1高效分泌木聚糖酶的毕赤酵母工程菌株的获得133.1.1材料 133.1.2黑曲霉木聚糖酶cDNA 的获得 133.1.3表达载体VMANpPIC9K 的构建 133.1.4重组菌株VMANpPIC9KGS115 的获得和高酶活菌株
3、的筛选133.1.5重组毕赤酵母的扩大培养 133.2重组巴斯德毕赤酵母工程菌发酵生产木聚糖酶 143.2.1原料 143.2.2重组菌株的液体发酵 153.2.3发酵工序 153.3发酵液后处理获得木聚糖酶 163.3.1离心 163.3.2干燥 173.4工艺流程 173.5产品的工艺要求 183.5.1产品的规格与使用方法 183.5.2产品的包装与储运 183.5.3常用饲料原料中木聚糖量 18 第四章 工艺计算 194.1物料衡算 194.1.1原料的物料衡算194.2热量衡算204.3冷却水水耗20 第五章 设备的设计与选型215.1输送设备的设计计算 215.2发酵设备的设计及选
4、型235.2.1发酵罐的设计计算235.2.2种子罐的设计265.3发酵车间相关设备的型号一览表 26 第六章 发酵车间的布置设计 29 6.1概述296.2生产车间工艺布置的原则296.2.1车间布置设计的依据296.2.2生产车间工艺布置的原则306.3发酵车间的设计316.4管路的设计32 第七章 总平面布置与建筑说明337.1设计依据和范围337.1.1设计依据337.2厂址337.2.1厂址地理位置337.2.2厂区基本条件337.3总厂平面设计337.3.1平面设计原则347.3.2平面的总体布置的设计方案347.3.3工厂出入口布置特征357.3.4厂区设计357.3.5坐标系统
5、357.3.6厂区划分要求357.4建筑物得布置位置36参考文献37致谢38摘 要木聚糖酶(-1,4-D-Xylanase, EC3.2.1.78)是一类能够水解-1,4-糖苷键的半纤维素酶,已广泛应用于食品、医药、饲料、造纸、采油等诸多领域。本设计以一株高效表达木聚糖酶的重组毕赤酵母为发酵菌株,对年产6000吨木聚糖酶的发酵车间进行设计。发酵工艺采用连续补料培养工艺,选用2个0.8m3一级种子罐和2个8 m3二级种子罐,采用2个80m3发酵罐,发酵罐直径3100 mm。发酵罐罐体厚度设计是6.5mm,制作材料采用1Cr18Ni9Ti耐酸不锈钢。本设计根据确定的工艺流程进行了物料衡算,并绘制了
6、全厂工艺流程图、全厂总平面布置图及三级发酵罐的装配图。关键词:木聚糖酶 高密度发酵 补料培养 发酵罐 ABSTRACTxylanase (-1 ,4-D-xylanase , EC3.2.1.78) are a class can hydrolyze -1 ,4-glycosidic bond hemicellulase, its role in xylan substrate grapes , xylan, galactoxylan and galactoxylan such as grape xylan more widely distributed in nature, most are
7、 renewable resources. hemicellulose resources as the major products of deep processing, -xylanase has been widely applied In food, medicine, feed, paper, oil and many other fields.In this study, using RT-PCR, selection was highly expressed xylanase secreted Pichia pastoris strain MAN22, and the liqu
8、id fermentation. Temperature control during fermentation 30 C, by adjusting the stirring rate to the dissolved oxygen concentration was maintained at 30%, mainly in methanol as carbon source, nitrogen source, ammonia did, by adding ammonia flow control pH 5.5, make every 12 h Add a Methanol, post-fe
9、rmentation to add 5% (NH4) 2 SO4, NH4 + levels were maintained to 150mmol / L or more (2 g / L or so). Seeds with two 0.6m3 and two 6 m3 tank and two second seed containers, with two 60m3 fermenter, the fermentation tank diameter of 3100m. Fermentation Tanks thickness design is 6.5mm, made of stainl
10、ess steel materials used 1Cr18Ni9Ti acid. Selected according to the design of -xylanase production process and the design of computing devices, according to the requirements of the mission statement drawn flow chart of the whole plant, whole plant general layout plans and -xylanase fermentation tank
11、 assembly Fig.朗读显示对应的拉丁字符的拼音字典Key words: xylanase ; High density fermentation; seed pot; fermentation pot 第一章 绪论1.1木聚糖酶简介1.1.1木聚糖酶的理化性质 木聚糖酶(Xylanase)EC 3.2.1.8是指将木聚糖降解成低聚糖和木糖的一组酶的总称,是木聚糖降解酶系中最关键的酶。主要包括外切-1,4-木聚糖酶,内切-1,4-木聚糖酶和-木糖苷酶。其中外切-1,4-木聚糖酶EC3.2.1.92是以单个木糖为切割单位,它作用于木聚糖的非还原性末端,使反应体系的还原性不断增加。内切-1
12、,4-木聚糖酶EC3.2.1.8是从木聚糖主链的内部切割-1,4糖苷键,使木聚糖溶液的黏度迅速降低,鉴于其特殊功能,内切-1,4-木聚糖酶多用于食品行业。-木糖苷酶EC3.2.1.37主要作用是切割低聚木糖和木二糖,有助于木聚糖彻底降解为木糖。该酶通过水解低聚木糖的末端来催化释放木糖残基。 不同来源的木聚糖酶在组成和催化性质上各不相同,但它们的理化性质有相似的地方。大多数微生物木聚糖酶为单亚基蛋白,分子量8145kDa,等电点pI值310,最适作用温度为4075。根据对几十种内切-1,4-木聚糖酶的分子量和等电点进行统计分析后发现,70%的酸性-1,4-木聚糖酶分子量在30kDa以上,而碱性-
13、1,4-木聚糖酶分子量则多在30kDa以下。木聚糖酶 中-木糖苷酶有单聚体、二聚体或四聚体等组成形式,分子量为26360kDa,pI值为3.37.3。其它一些特异性酶,如-L-呋喃型阿拉伯糖苷酶多以单体形式存在,也有二聚体、四聚体、六聚体和八聚体等形式,分子量为53495kDa,pI值为2.59.3 ;-葡萄糖醛酸苷酶的分子量一般都大于100kDa,而pI值都小于4.0。粘度:木聚糖酶在水中溶解后变成有粘性的溶液,使消化道中食糜的粘稠度增加。木聚糖在低溶度时,因与水分子直接互作而增加了食糜的粘度。随着木聚糖溶度的增加,分子本身相互作用,从而缠绕成网状结构,这种作用过程的相互作用极大时,可能会变
14、成凝胶。表面活性:木聚糖的表面带有负电荷,在溶液中趋于与其他物质表面结合。在饲料消化时,多糖可以与肠道中的饲料颗粒表面、脂类微团表面及多糖-蛋白质复合物表面相结合。持水性:由于木聚糖具有高的持水性,这在木聚糖溶度较高时变得尤其显著,因为此时可以形成凝胶。这些效应能根本上改变消化物的物理特性,从而改变肠道的生理机能,即增强对肠蠕动的抵抗力。离子、小分子与木聚糖的结合:除了阳离子与一些木聚糖中带负电基团结合外,木聚糖的立体结构也使它与离子发生螯合作用事实上,阳离子能在木聚糖分子间形成离子桥,这将大大影响其粘度和凝胶的形成特性。小分子通过疏水键的相互作用,也可能与多糖发生微弱的结合。1.1.2木聚糖
15、生产简史 木聚糖酶的研究始于20世纪60年代。目前国际上研究工作主要集中在对微生物木聚糖酶的诱导与调节机理研究,以及酶的提纯、鉴定方法,木聚糖酶基因分子的克隆和表达 等。而我国对木聚糖酶的研究主要集中在产木聚糖酶优良菌株的筛选和驯化、木聚糖酶的纯化和理化性质的研究等方面。当前,木聚糖酶主要通过真菌、细菌等微生物发酵生产获得。根据发酵工艺的不同,可分为固体发酵和液体发酵两种。这两种发酵方式各有其优缺点:固体发酵所用培养基相对便宜,主要以农副产品为主。且操作设备简单,整个生产过程中无废物产生,不存在环境污染问题,产率较高。易于在中、小企业推广应用,目前国内木聚糖酶生产主要采用固体发酵方式。但固体发
16、酵同时也存在不易控制,酶系复杂,纤维素等酶含量高,难以精酶化等缺点;相比较而言,液体发酵由于是在液态环境中进行,菌体、底物、产物(包括热)均易于扩散,使得发酵能够在均质或拟均质条件下进行。该方法便于在生产过程中进行实时检测、控制,易于扩大生产规模。同时,由于液体输送方便,便于机械化操作,产品也易于提取精制。液态发酵工艺的缺点主要是对设备有一定要求及生产成本较高,技术要求也较为严格。但随着生物技术的发展和木聚糖酶广泛应用,采用液体发酵生产木聚糖酶将成为今后发展方向。1.1.3木聚糖酶的用途 从上世纪60年代开始,随着木聚糖酶研究的不断深入,其应用领域也不断扩大,在造纸、食品、饲料、纺织、医药、环
17、境和能源等行业被广泛应用,前景十分看好。在造纸行业中的应用:木聚糖酶在造纸工业中的重要作用体现在其取代了有毒化学物质,通过酶法预处理可以回收造纸行业中有用的副产物等方面。造纸工业中通过木聚糖酶的使用,缩短了纸浆的处理时间,增加了纤维的分离度,使氯气等化学漂白剂更好地渗透到纸浆里,从而大大减少了化学漂白剂的用量并且使漂白效果得以提高。木聚糖酶在造纸工业中还应用于废纸脱墨这一重要环节,不仅使脱墨工艺变得容易,而且减少了化学药品的用量。木聚糖酶应用于纸浆生物漂白工艺过程,减少了氯气用量,减少致癌物质的排放,减轻环境污染,显著改善了纸浆的滤过性、脆性,增加了纤维的分离度、纸浆漂白度,降低了生产能耗,降
18、低了生产成本,其诸多优点不断在造纸工业中显现出来。在食品行业中的应用:木聚糖酶在食品行业中的应用主要体现在将天然半纤维素分解后得到低聚木糖这一环节。在面包的生产中,1/3的水分是面团中的戊聚糖吸收的,戊聚糖的高吸水性对面团和面包的质量有明显的影响。在新鲜蔬菜、水果加工成婴儿食品、膏状物、干燥蔬菜粉末和速溶食品时,营养物质通常被一层坚硬的半纤维素、果胶等物质组成的细胞壁所包围,如果对其用含有纤维素酶、木聚糖酶、果胶酶的酶制剂来处理,就可在比较温和条件下使组织柔化,使细胞破壁,将有效物质充分提取出来。与此同时也降低了提取液的粘度,使生产过程中的浓缩、干燥效率成倍提高,相应降低生产成本。其他应用:据
19、报道,木聚糖酶可与其它酶共同参与使植物降解为戊糖、己糖,再用其它菌株发酵生产乙醇。也有报道发现能把植物纤维直接转化为乙醇的一些菌,如Thermbacteroides acetoethylicus, Clotridium thermosaccharolyticum。另据报道,木聚糖酶在去污洗涤,医药制造,以及在果实成熟、种子萌发、真菌的寄生及植物的抗性等诸多生理过程中都有着重要的应用。1.1.4木聚糖酶产业发展现状我国对木聚糖酶的研究主要集中在产木聚糖酶优良菌株的筛选和驯化、木聚糖酶的纯化和理化性质的研究等方面。当前,木聚糖酶主要通过真菌、细菌等微生物发酵生产获得。根据发酵工艺的不同,可分为固体
20、发酵和液体发酵两种。这两种发酵方式各有其优缺点:固体发酵所用培养基相对便宜,主要以农副产品为主。且操作设备简单,整个生产过程中无废物产生,不存在环境污染问题,产率较高。易于在中、小企业推广应用,目前国内木聚糖酶生产主要采用固体发酵方式。但固体发酵同时也存在不易控制,酶系复杂,纤维素等酶含量高,难以精酶化等缺点;相比较而言,液体发酵由于是在液态环境中进行,菌体、底物、产物(包括热)均易于扩散,使得发酵能够在均质或拟均质条件下进行。该方法便于在生产过程中进行实时检测、控制,易于扩大生产规模。同时,由于液体输送方便,便于机械化操作,产品也易于提取精制。液态发酵工艺的缺点主要是对设备有一定要求及生产成
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